universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

MATERIALI E METODI
COLTURE CELLULARI
Le cellule RAW 264,7 (linea cellulare di macrofagi murini
immortalizzati), le cellule SK-N-BE (linea cellulare immortalizzata da
neuroblastoma umano da midollo spinale) sono state acquistate dalla
ATCC, le cellule U-937 (linea cellulare di monociti umani
immortalizzati) sono state gentilmente fornite dal laboratorio dei prof
Simonetta Nicosia e GianEnrico Rovati del Dipartimento di Scienze
Farmacologiche di Milano, le cellule SK-ER3 (clone di SK-N-BE che
esprime stabilmente ERα) sono state generate dal nostro laboratorio
mediante una transfezione stabile delle SK-N-BE [278], le cellule HepG2
(linea cellulare immortalizzata da carcinoma epatico umano) sono state
gentilmente fornite dal laboratorio del prof Cesare Sirtori del
Dipartimento di Scienze Farmacologiche di Milano.
Condizioni di crescita
Le cellule RAW 264,7 sono cresciute in terreno DMEM con rosso fenolo
(Invitrogen) supplementato con 10% FBS, le cellule U-937 e le cellule
SK-N-BE in terreno RPMI 1640 con rosso fenolo + 10% FBS, le cellule
SK-ER3 in terreno RPMI 1640 + 10% FBS-DCC, le cellule HepG2 in
terreno MEM con rosso fenolo + 10% FBS a 37°C in atmosfera di aria
umidificata 95% / CO2 5%. Le cellule RAW 264,7 vengono suddivise due
volte la settimana in piastre Petri da 10 cm 2 (Corning) alla densità di
1 x 10 6 cellule/mL. Le cellule SK-N-BE e le cellule HepG2 vengono
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