universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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agiscono invece come repressori [170-174]. L’attività costitutiva di NF-κB nei linfociti B è principalmente attribuibile agli eterodimeri p50/c-Rel [163, 175]. Tuttavia nella maggior parte delle cellule l’attività di NF-κB è largamente inducibile e il dimero più diffuso è p50/p65. Ciascun membro della famiglia Rel contiene all’N-terminale una regione conservata di 300 aminoacidi, detta RHD (Rel Homology Domain). Il dominio RHD contiene sequenze coinvolte nel legame al DNA e nella dimerizzazione. Nell’estremità C-terminale del RHD è presente anche una sequenza di localizzazione nucleare (Nuclear Localization Signal, NLS). Il fattore di trascrizione NFAT (Nuclear Factor of Activated T cells) ha anch’esso un dominio RHD ed è da alcuni considerato membro della famiglia Rel [176]. Le proteine appartenenti alla famiglia Rel si possono suddividere in due classi in base alla loro sequenza C-terminale. I membri della prima classe sono p105/p50, p100/p52 e la proteina di Drosophila Relish. Queste proteine sono caratterizzate da domini ripetuti di anchirina, presenti anche nelle proteine della famiglia di IκB. p100, il precursore di p50, e p105, il precursore di p52, sono esclusivamente citosoliche, perché i domini ripetuti di anchirina mascherano le loro sequenze di localizzazione nucleare [177]. Queste due proteine sono poi digerite nel dominio N- terminale a livello di regioni specifiche di 23 aminoacidi ricche di glicina (Glicine Rich Region, GRR) così da generare p50 e p52. p50 e p52 non hanno domini di transattivazione e quindi sono trascrizionalmente inattive [163]. La seconda classe include p65, RelB, c-Rel, Dorsal e Dif. Queste proteine contengono uno o più domini di transattivazione nella loro regione C-terminale [178]. In particolare, il dominio di transattivazione di p65 contiene due regioni di transattivazione, una di 30 aminoacidi a livello 46
C-terminale, detta TA1, e una di 90 aminoacidi, adiacente al TA1, chiamata TA2. Sia nel dominio TA1 che nel dominio TA2 sono presenti siti di fosforilazione importanti per l’attivazione di p65. Questi domini, quando legano le sequenze bersaglio, assumono una conformazione ad α elica. Attivazione di NF-κB In assenza di uno stimolo infiammatorio, NF-κB è localizzato nel citoplasma complessato con una proteina inibitoria chiamata IκB (Inhibitor of NF-κB), che maschera la sua sequenza di localizzazione nucleare (NLS). Quando uno stimolo extracellulare attiva la via di NF-κB si attivano le IKK, chinasi specifiche per IκB, che fosforilano IκBα sulle serine 32 e 36. Tale fosforilazione promuove la reazione di poliubiquitinazione sulle lisine 21 e 22 e quindi la rapida degradazione di IκBα da parte del proteasoma 26S. In assenza di IκB è dunque smascherata la sequenza di localizzazione nucleare e NF-κB può migrare nel nucleo dove attiva la trascrizione dei geni bersaglio. Fra i geni responsivi a NF-κB troviamo anche IκBα. Quando IκBα è stato risintetizzato, entra nel nucleo, perché ha, all’interno del dominio di anchirina ripetuto (Ankyrin Repeat Domain, ARD), una sequenza di localizzazione nucleare che permette il suo ingresso nel nucleo. Qui si lega ad NF-κB bloccandone l’attività trascrizionale e complessata a NF- κB torna nel citoplasma, grazie alla presenza di sequenze di esporto nucleare (Nuclear Export Sequences, NES) ricche di leucine localizzate nei dominii C-terminale (aminoacidi 265-277) ed N-terminale (aminoacidi 45-54) di IκBα [179]. 47
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DISCUSSIONE Numerosi studi indicano
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251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
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estradiol-mediated protection again
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