universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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Via non genomica Le prime evidenze di effetti degli estrogeni troppo rapidi per essere mediati dall'attivazione della trascrizione e della sintesi proteica risalgono agli anni settanta, quando studi elettrofisiologici dimostrarono che l'estradiolo è in grado di modulare le concentrazioni intracellulari dello ione Ca 2+ entro pochi secondi dalla stimolazione [88]. Un anno più tardi Pietras e Szego descrissero una rapida formazione di cAMP in risposta all'E2, presumibilmente mediata dal legame dell'ormone ad una proteina recettoriale nella membrana cellulare [89, 90]. Dopo questi studi pionieristici parecchi gruppi si sono dedicati agli effetti non genomici dei recettori degli estrogeni [91, 92]. Questi effetti mostrano delle caratteristiche comuni: 1) sono troppo rapidi per essere compatibili con la sintesi di RNA e di proteine, dal momento che si verificano entro pochi minuti dalla somministrazione dell’ormone; 2) avvengono in cellule nelle quali la sintesi di RNA e proteine è praticamente assente, come gli spermatozoi; 3) sono riprodotti in presenza di inibitori della trascrizione o della sintesi proteica; 4) possono essere riprodotti usando ormoni legati covalentemente a molecole impermeabili alla membrana cellulare [93]. Questi effetti non trascrizionali degli estrogeni comprendono la regolazione del flusso cellulare di Ca 2+ [94-102], la modulazione del contenuto citoplasmatico di cAMP [103-107], cGMP [108, 109], IP3 [110] e la modulazione di recettori associati alle proteine G [111-116]. Inoltre l'E2 attiva chinasi come la PKA [69, 100, 105], la PKB [117, 118], la PKC [119, 120], la chinasi Ca 2+ /calmodulina-dipendente (CAMK) [121], le MAP chinasi [122-124] e tirosin-chinasi [125]; ed attiva fattori di trascrizione tra cui CREB [115, 116] ed AP-1 [126]. 24
ER e PI3K Uno degli effetti rapidi degli estrogeni più recentemente descritti è la modulazione della via della PI3K e di Akt. Le fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3K) sono delle chinasi importanti per molti processi cellulari. Sulla base della struttura e della specificità del substrato sono state identificate tre classi di PI3K: la classe I fosforila preferibilmente il fosfatidilinositolo-4,5-bifosfato, la classe II il fosfatidilinositolo-4-fosfato e la classe III il fosfatidilinositolo. La classe I si suddivide a sua volta in due sottoclassi: IA ed IB. Esistono tre isoforme di PI3K della classe IA: p110α, p110β e p110δ; queste sono strettamente associate ad una subunità regolatoria che contiene due dominii SH2 (Src-Homology 2). Della subunità regolatoria si conoscono tre isoforme: p85α, p85β e p85γ. Della classe IB è noto un solo membro: PI3Kγ che è associato alla subunità regolatoria p101; la classe II è formata dalle isoforme: PI3K-C2α, PI3K-C2β e PI3K-C2γ, mentre la III classe dal solo enzima Vps34p. Le due classi IA ed IB sono quelle più importanti e studiate. Le fosfatidilinositolo 3-chinasi sono coinvolte nella sopravvivenza cellulare, nel ciclo cellulare, nella mobilità cellulare, nella degranulazione, nell'immunità, nella regolazione del metabolismo di glucosio e glicogeno e nella sintesi proteica [127]. Parecchi studi hanno evidenziato un cross-talk tra le vie di trasduzione del segnale della PI3K e quelle del recettore degli estrogeni; è stata provata sia un'attivazione di ER in seguito a fosforilazione da parte di Akt, una chinasi a serina/treonina attivata dalla PI3K [65, 128-130], sia un'attivazione del signaling della PI3K in seguito al legame dell'estrogeno al suo recettore. In cellule MCF-7 è stato dimostrato che l’ingresso in fase S del ciclo cellulare e l’attività del promotore della ciclina D1 sono mediati 25
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dimostrato un aumento dell’espres
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Soluzioni Lysis buffer per estratti
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Laemmli buffer 3X Tris pH 6,8 150 m
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Soluzione di 3,3’-diaminobenzidin
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DISCUSSIONE Numerosi studi indicano
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BIBLIOGRAFIA 1. Barnea, E.R., N.J.
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signaling in the cardiovascular sys
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251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
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estradiol-mediated protection again
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