universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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A C E 2 TNFα E 2 +TNFα p65 citoplasm. (% cell pos /cell tot) 100 75 50 25 CTRL E 2 TNFα E 2 +TNFα p65 citoplasm. (% cell pos /cell tot) Figura 10. Effetto del 17β-estradiolo su p65 in cellule diverse A) Immunocitochimica per p65 in SK-N-BE B) Immunocitochimica per p65 in SK-ER3 120 B C E 2 TNFα E 2 +TNFα 100 75 50 25 CTRL E 2 TNFα E 2 +TNFα
DISCUSSIONE Numerosi studi indicano che l'estrogeno blocca la generazione della risposta infiammatoria nelle cellule macrofagiche [270, 273, 275, 280]; questa proprietà può spiegare il ruolo protettivo degli estrogeni endogeni ed esogeni in molti modelli animali di patologie a componente infiammatoria, delle quali l'ormone ritarda l’insorgenza e attenua i sintomi [243, 281-286]. Il meccanismo molecolare di questa azione deve essere ancora chiarito. Lo scopo che ha animato questa tesi è stato quello di determinare quali eventi molecolari vengano influenzati dal 17β-estradiolo per svolgere la sua attività inibitoria della via di segnale di LPS. In particolare ho focalizzato il mio studio sui fattori di trascrizione della famiglia di NF-κB. Visto che questi fattori di trascrizione, una volta attivati, migrano nel nucleo, abbiamo analizzato se l'E2 potesse modificare tale meccanismo di distribuzione subcellulare di p65. Un pretrattamento di 10 minuti con il 17β-estradiolo 10 -9 M seguito dalla stimolazione con LPS o TNFα per 30 minuti risulta comunque in una localizzazione citoplasmatica di p65. Questa azione dell'ormone non è limitata a p65, ma interessa anche gli altri membri della famiglia di NF-κB: infatti abbiamo ottenuto gli stessi risultati quando abbiamo focalizzato la nostra attenzione su p50 e c-Rel. Sorprendentemente l'E2 non blocca la fosforilazione di IKK, né protegge IκBα dalla degradazione. Quindi il 17β-estradiolo non agisce sulla via di IKK/IκBα dell'attivazione di NF-κB né sull'attivazione delle MAP chinasi. 121
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INDICE Pagina INTRODUZIONE 1 1) Est
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3) Western blot Procedimento 93 93
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INTRODUZIONE GLI ESTROGENI E I LORO
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Estrogeni e progesterone sono i pri
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Struttura dei recettori degli estro
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A/B C D E F DBD LBD AF-1 AF-2 NLS d
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hERα hERβ N N AF-1 DNA LIGANDO C
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hanno un grado maggiore di omologia
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MECCANISMO D’AZIONE DEGLI ESTROGE
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A C E 2 E 2 nucleo nucleo E 2 R R i
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Fattori di modificazione degli isto
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sequenze similari al NR-box. Anche
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dell’IGF-I è mediata dalla PI3K
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mediata dall'interazione con altri
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ER e PI3K Uno degli effetti rapidi
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hanno proposto che i recettori di m
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INFIAMMAZIONE L’infiammazione, o
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anaerobica essi provocano nel terri
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le componenti dell'essudato, come l
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vacuolo attorno alla particella est
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secreti. Le fonti cellulari più co
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Il PAF è coinvolto nella genesi di
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Il tumor necrosis factor α (TNFα)
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alchilazione del DNA dovuta ad alte
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Struttura 3D dell'eterodimero p65/p
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C-terminale, detta TA1, e una di 90
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Delezioni o mutazioni nelle sequenz
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Sono anche presenti regioni ricche
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di CREB binding protein (p300/CBP)
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complesso nel citoplasma [200, 201]
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In diversi studi è stato messo in
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NF-κB ed LPS L’endotossina batte
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IkBα IKKα NF-κB NF-κB kB-site L
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Estrogeni e patologie a componente
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cerebellari (mancanza di coordinazi
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L’EAE può essere indotta, in cep
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Page 135 and 136: signaling in the cardiovascular sys
Page 137 and 138: to activation of the mitogen-activa
Page 139 and 140: 153. Firestein, G.S., The T cell co
Page 141 and 142: 185. Wang, D. and A.S. Baldwin, Act
Page 143 and 144: 217. Yin, M.J., Y. Yamamoto, and R.
Page 145 and 146: 251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
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