universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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8. Effetto del 17β-estradiolo sulla localizzazione citoplasmatica di p65 in cellule non macrofagiche Anche se il suo ruolo principale è nelle cellule del sistema immunitario, NF-κB è un fattore di trascrizione espresso in modo ubiquitario. Per questo abbiamo deciso di valutare se l'estrogeno inibisse la traslocazione di p65 anche in cellule non infiammatorie. A tale scopo abbiamo condotto un'immunocitochimica su MCF-7, SK-ER3 ed SK-N-BE. Le cellule MCF-7 sono derivate da un carcinoma mammario umano positivo per ERα e sono spesso usate per studiare gli effetti degli estrogeni; le SK-ER3 sono cellule di neuroblastoma transfettate stabilmente con ERα e sono state generate nel nostro laboratorio per studiare l'azione del 17β-estradiolo, le SK-N-BE sono il loro controllo negativo, in quanto non esprimono gli ER. Ogni tipo cellulare è stato trattato con lo stimolo che produceva l'attivazione di p65. Infatti abbiamo osservato che LPS non attiva NF-κB nelle MCF-7, nelle SK-N-BE e nelle SK-ER3, perché queste cellule non hanno il recettore per l'LPS. Quindi abbiamo usato il TNFα, stimolo che porta all'attivazione di NF-κB in vari tipi cellulari. Come si vede dalle figure 9 e 10 in nessuno di questi tipi cellulari un pretrattamento di 10 minuti con 17β-estradiolo 10 -9 M è stato in grado di prevenire la traslocazione nucleare di p65 (Figura 9 e 10). L'azione dell'estrogeno è perciò limitata alle cellule che prendono parte alla risposta infiammatoria. 118
p65 citoplasm. (% cell pos /cell tot) C TNFα 100 75 50 25 CTRL E 2 119 TNFα E 2 +TNFα Figura 9. Effetto del 17β-estradiolo su p65 in cellule diverse Immunocitochimica per p65 in MCF-7 E 2 E 2 +TNFα
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UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI MILANO
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INDICE Pagina INTRODUZIONE 1 1) Est
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3) Western blot Procedimento 93 93
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INTRODUZIONE GLI ESTROGENI E I LORO
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Estrogeni e progesterone sono i pri
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Struttura dei recettori degli estro
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A/B C D E F DBD LBD AF-1 AF-2 NLS d
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hERα hERβ N N AF-1 DNA LIGANDO C
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hanno un grado maggiore di omologia
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MECCANISMO D’AZIONE DEGLI ESTROGE
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A C E 2 E 2 nucleo nucleo E 2 R R i
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Fattori di modificazione degli isto
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sequenze similari al NR-box. Anche
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dell’IGF-I è mediata dalla PI3K
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mediata dall'interazione con altri
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ER e PI3K Uno degli effetti rapidi
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hanno proposto che i recettori di m
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INFIAMMAZIONE L’infiammazione, o
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anaerobica essi provocano nel terri
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le componenti dell'essudato, come l
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vacuolo attorno alla particella est
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secreti. Le fonti cellulari più co
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Il PAF è coinvolto nella genesi di
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Il tumor necrosis factor α (TNFα)
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alchilazione del DNA dovuta ad alte
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Struttura 3D dell'eterodimero p65/p
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C-terminale, detta TA1, e una di 90
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Delezioni o mutazioni nelle sequenz
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Sono anche presenti regioni ricche
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di CREB binding protein (p300/CBP)
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complesso nel citoplasma [200, 201]
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In diversi studi è stato messo in
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NF-κB ed LPS L’endotossina batte
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IkBα IKKα NF-κB NF-κB kB-site L
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Estrogeni e patologie a componente
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cerebellari (mancanza di coordinazi
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Page 139 and 140: 153. Firestein, G.S., The T cell co
Page 141 and 142: 185. Wang, D. and A.S. Baldwin, Act
Page 143 and 144: 217. Yin, M.J., Y. Yamamoto, and R.
Page 145 and 146: 251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
Page 147 and 148: estradiol-mediated protection again
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