universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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A C E2 C p65 LPS E 2 +LPS CTRL E 2 LPS E +LPS 2 100 75 50 37 CTRL E 2 104 B LPS E +LPS 2 p65 citoplasm. (% cell pos /cell tot) β− β−actina β− 100 75 50 25 Densità ottica p65/ββ-actina CTRL 150 100 50 E 2 LPS E 2 +LPS Figura 1. Effetto del 17β-estradiolo sulla localizzazione subcellulare di p65 nelle cellule RAW 264,7 A) Immunocitochimica per p65 B) Quantizzazione dell'effetto visto in A) mediante conta cellulare C) Western blot per p65 su estratti proteici citoplasmatici CTRL E 2 LPS E 2+LPS
2. Azione del 17β-estradiolo sulla localizzazione citoplasmatica di p65 in cellule monocitarie Per valutare se l'effetto osservato nelle RAW 264,7 fosse un meccanismo conservato nelle cellule mieloidi abbiamo utilizzato le cellule U-937, che sono monociti umani immortalizzati [279] Utilizzando ancora la tecnica di western blot osserviamo come nelle U-937 non stimolate p65 sia prevalentemente citoplasmatico, mentre il trattamento con TNFα 20 ng/mL per 30 minuti porti ad una pressoché totale traslocazione di p65. Anche in questo caso un breve pretrattamento con l'ormone in concentrazione fisiologica blocca l'effetto del TNFα (Figura 2A e 2B). Da questi risultati abbiamo concluso che il 17β-estradiolo è in grado di influenzare la localizzazione subcellulare di p65 in due tipi di cellule mieloidi. 105
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UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI MILANO
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INDICE Pagina INTRODUZIONE 1 1) Est
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3) Western blot Procedimento 93 93
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INTRODUZIONE GLI ESTROGENI E I LORO
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Estrogeni e progesterone sono i pri
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Struttura dei recettori degli estro
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A/B C D E F DBD LBD AF-1 AF-2 NLS d
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hERα hERβ N N AF-1 DNA LIGANDO C
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hanno un grado maggiore di omologia
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MECCANISMO D’AZIONE DEGLI ESTROGE
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A C E 2 E 2 nucleo nucleo E 2 R R i
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Fattori di modificazione degli isto
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sequenze similari al NR-box. Anche
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dell’IGF-I è mediata dalla PI3K
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mediata dall'interazione con altri
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ER e PI3K Uno degli effetti rapidi
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hanno proposto che i recettori di m
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INFIAMMAZIONE L’infiammazione, o
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anaerobica essi provocano nel terri
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le componenti dell'essudato, come l
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vacuolo attorno alla particella est
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secreti. Le fonti cellulari più co
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Il PAF è coinvolto nella genesi di
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Il tumor necrosis factor α (TNFα)
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alchilazione del DNA dovuta ad alte
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Struttura 3D dell'eterodimero p65/p
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C-terminale, detta TA1, e una di 90
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Delezioni o mutazioni nelle sequenz
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Sono anche presenti regioni ricche
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Page 129 and 130: BIBLIOGRAFIA 1. Barnea, E.R., N.J.
Page 131 and 132: 33. Pike, A.C.W., A.M. Brzozowski,
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Page 135 and 136: signaling in the cardiovascular sys
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Page 143 and 144: 217. Yin, M.J., Y. Yamamoto, and R.
Page 145 and 146: 251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
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