universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

RISULTATI
1. Azione del 17β-estradiolo sulla localizzazione
citoplasmatica di p65 in cellule macrofagiche
Studi preliminari effettuati dal nostro laboratorio hanno messo in
evidenza che l'E2 è in grado di bloccare il legame di p65 al DNA.
I fattori di trascrizione della famiglia di NF-κB una volta attivati
traslocano dal citoplasma al nucleo. Per questo motivo abbiamo voluto
valutare l'influenza del 17β-estradiolo sulla localizzazione subcellulare di
p65 in cellule dell'infiammazione; ci siamo serviti della linea cellulare
RAW 264,7 in quanto già ben caratterizzata sia nel nostro che in altri
laboratori [274].
La valutazione della localizzazione subcellulare di p65 è stata effettuata
con due tecniche: immunocitochimica e western blot.
Mediante immunocitochimica condotta sulle cellule RAW 264,7
osserviamo che in condizioni di assenza di stimolo la localizzazione di
p65 è citoplasmatica, condizione che non è perturbata dal trattamento con
l'ormone in concentrazione fisiologica.
Il trattamento con LPS, come previsto, porta ad un massivo accumulo
nucleare di p65; il pretrattamento di 10 minuti con il 17β-estradiolo prima
dell'LPS comporta una localizzazione citoplasmatica simile alle cellule
controllo (Figura 1A e B).
Per confermare l'effetto ottenuto tramite immunocitochimica è stata
effettuata una western blot su estratti citoplasmatici e nucleari dalle
cellule RAW 264,7. La tecnica di immunocitochimica permette di
valutare la variazione subcellulare di una proteina, ma non si ha la
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