universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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Soluzioni per immunocitochimica per p65: Soluzione di blocco PBS 1X non sterile BSA (Sigma) 3% Siero di goat (Gibco) 10% Triton 0,2% Soluzione per anticorpi PBS 1X non sterile Siero di goat 10% Anticorpo primario: p65 1:500 (Santa Cruz) Anticorpo secondario: Biotinilato goat anti rabbit IgG 1:200 (Vector Laboratories) Soluzione di lavaggio PBS 1X non sterile BSA 3% TWEEN (Sigma) 0,1% Soluzione di avidin-biotin horseradish peroxidase complex (ABC kit, Vector Laboratories) 10μL di A + 10μL di B per ogni mL di PBS 1X non sterile agitare su piastra agitante per 30 minuti 100
Soluzione di 3,3’-diaminobenzidina (DAB) (Sigma) 1 pastiglia urea + 1 pastiglia di DAB in 5mL di acqua vortexare fin quando tutto è ben sciolto SCHEMA DEI TRATTAMENTI DELLE CELLULE Negli esperimenti le cellule sono state trattate con i seguenti reagenti: • 17β-estradiolo (Sigma) 10 -9 M 10 minuti seguito dagli stimoli infiammatori: • LPS (isotipo 0111:B4, Sigma) 50 μg / mL 30 minuti • TNFα (Sigma) 20 ng / mL 30 minuti • IL-1β (Peprotech) 10 ng / mL 30 minuti • LY 294002 (Sigma) 50 μM 1 ora prima del trattamento con E2 101
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UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI MILANO
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INDICE Pagina INTRODUZIONE 1 1) Est
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3) Western blot Procedimento 93 93
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INTRODUZIONE GLI ESTROGENI E I LORO
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Estrogeni e progesterone sono i pri
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Struttura dei recettori degli estro
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A/B C D E F DBD LBD AF-1 AF-2 NLS d
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hERα hERβ N N AF-1 DNA LIGANDO C
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hanno un grado maggiore di omologia
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MECCANISMO D’AZIONE DEGLI ESTROGE
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A C E 2 E 2 nucleo nucleo E 2 R R i
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Fattori di modificazione degli isto
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sequenze similari al NR-box. Anche
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dell’IGF-I è mediata dalla PI3K
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mediata dall'interazione con altri
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ER e PI3K Uno degli effetti rapidi
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hanno proposto che i recettori di m
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INFIAMMAZIONE L’infiammazione, o
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anaerobica essi provocano nel terri
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le componenti dell'essudato, come l
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vacuolo attorno alla particella est
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secreti. Le fonti cellulari più co
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Il PAF è coinvolto nella genesi di
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Il tumor necrosis factor α (TNFα)
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alchilazione del DNA dovuta ad alte
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Struttura 3D dell'eterodimero p65/p
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C-terminale, detta TA1, e una di 90
Page 55 and 56: Delezioni o mutazioni nelle sequenz
Page 57 and 58: Sono anche presenti regioni ricche
Page 59 and 60: di CREB binding protein (p300/CBP)
Page 61 and 62: complesso nel citoplasma [200, 201]
Page 63 and 64: In diversi studi è stato messo in
Page 65 and 66: NF-κB ed LPS L’endotossina batte
Page 67 and 68: IkBα IKKα NF-κB NF-κB kB-site L
Page 69 and 70: Estrogeni e patologie a componente
Page 71 and 72: cerebellari (mancanza di coordinazi
Page 73 and 74: L’EAE può essere indotta, in cep
Page 75 and 76: La leucodistrofia a cellule globoid
Page 77 and 78: L’artrite reumatoide L’artrite
Page 79 and 80: L’ischemia cerebrale Con il termi
Page 81 and 82: dimostrato un aumento dell’espres
Page 83 and 84: taglio è generato un Aβ di 40 o d
Page 85 and 86: d’inibire l’attivazione della m
Page 87 and 88: umano, hanno mostrato che il 17β-e
Page 89 and 90: SCOPO DELLA TESI Lo scopo di questa
Page 91 and 92: suddivise due volte la settimana in
Page 93 and 94: Procedimento 1. Sciogliere la polve
Page 95 and 96: STRIPAGGIO DEL SIERO DCC 24 ore pri
Page 97 and 98: Soluzioni Lysis buffer per estratti
Page 99 and 100: piastre da 96 pozzetti (Costar) in
Page 101 and 102: solution. Come anticorpo secondario
Page 103 and 104: Laemmli buffer 3X Tris pH 6,8 150 m
Page 105: Immunodetezione: 1. Togliere il PBS
Page 109 and 110: certezza che l'anticorpo riconosca
Page 111 and 112: 2. Azione del 17β-estradiolo sulla
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Page 115 and 116: 4. Influenza del 17β-estradiolo su
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Page 123 and 124: p50 Densità ottica p50/β-actina C
Page 125 and 126: p65 citoplasm. (% cell pos /cell to
Page 127 and 128: DISCUSSIONE Numerosi studi indicano
Page 129 and 130: BIBLIOGRAFIA 1. Barnea, E.R., N.J.
Page 131 and 132: 33. Pike, A.C.W., A.M. Brzozowski,
Page 133 and 134: 63. Ignar-Trowbridge, D.M., M. Pime
Page 135 and 136: signaling in the cardiovascular sys
Page 137 and 138: to activation of the mitogen-activa
Page 139 and 140: 153. Firestein, G.S., The T cell co
Page 141 and 142: 185. Wang, D. and A.S. Baldwin, Act
Page 143 and 144: 217. Yin, M.J., Y. Yamamoto, and R.
Page 145 and 146: 251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
Page 147 and 148: estradiol-mediated protection again
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