universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

Immunodetezione:
1. Togliere il PBS + NaN3, aggiungere la soluzione di blocco per 45
minuti a temperatura ambiente.
2. Incubare con la soluzione contenente l'anticorpo primario overnight a
4°C.
3. Fare 3 lavaggi da 10 minuti, nella soluzione di lavaggio
4. Incubare con la soluzione contenente l'anticorpo secondario per 1 ora a
temperatura ambiente.
5. Fare 3 lavaggi da 10 minuti, nella soluzione di lavaggio
6. Incubare con la soluzione ABC per 1 ora a temperatura ambiente.
7. Lavare due volte con PBS 1X non sterile per 10 minuti.
8. Lavare infine con TRIS HCl 50mM pH 7.5 per 10 minuti.
9. Aggiungere la soluzione con la DAB per circa 5 minuti, fermare la
reazione per aggiunta di PBS 1X non sterile.
10.Lavare con PBS 1X non sterile.
Montaggio vetrini:
Su ogni vetrino mettere una goccia di PBS + glicerolo (1/1), riporre il
vetrino sul porta vetrini, ricoprire con il vetro copri-vetrini, sigillare con
Eukit
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