universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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p65 rabbit 1:500 (Santa Cruz) p50 rabbit 1:1000 (Santa Cruz) IMMUNOCITOCHIMICA Preparazione vetrini: Immergere per alcuni giorni i vetrini in HCl 7%. Rimuovere l'HCl dai vetrini, lavare con acqua bidistillata per 3 volte. Sotto cappa sterile aprire una petri e mettere nel coperchio dell'alcool e nel fondo acqua per vetrini, quindi immergere vetrini nell'alcool, poi trasportarli con una pinzetta nell'acqua. Prendere un vetrino alla volta ed asciugarlo sulla fiamma del bunsen, infine riporre il vetrino in una piastra da 24 pozzetti sterile. Fissaggio cellule: Aspirare il terreno di coltura, lavare con PBS 1X non sterile, fissare le cellule per aggiunta di paraformaldeide al 4% per 5 minuti. Aspirare la paraformaldeide, e lavare per 3 volte con PBS 1X non sterile, mettere infine PBS + NaN3 conservare a 4°C. 98
Immunodetezione: 1. Togliere il PBS + NaN3, aggiungere la soluzione di blocco per 45 minuti a temperatura ambiente. 2. Incubare con la soluzione contenente l'anticorpo primario overnight a 4°C. 3. Fare 3 lavaggi da 10 minuti, nella soluzione di lavaggio 4. Incubare con la soluzione contenente l'anticorpo secondario per 1 ora a temperatura ambiente. 5. Fare 3 lavaggi da 10 minuti, nella soluzione di lavaggio 6. Incubare con la soluzione ABC per 1 ora a temperatura ambiente. 7. Lavare due volte con PBS 1X non sterile per 10 minuti. 8. Lavare infine con TRIS HCl 50mM pH 7.5 per 10 minuti. 9. Aggiungere la soluzione con la DAB per circa 5 minuti, fermare la reazione per aggiunta di PBS 1X non sterile. 10.Lavare con PBS 1X non sterile. Montaggio vetrini: Su ogni vetrino mettere una goccia di PBS + glicerolo (1/1), riporre il vetrino sul porta vetrini, ricoprire con il vetro copri-vetrini, sigillare con Eukit 99
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UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI MILANO
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INDICE Pagina INTRODUZIONE 1 1) Est
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3) Western blot Procedimento 93 93
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INTRODUZIONE GLI ESTROGENI E I LORO
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Estrogeni e progesterone sono i pri
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Struttura dei recettori degli estro
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A/B C D E F DBD LBD AF-1 AF-2 NLS d
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hERα hERβ N N AF-1 DNA LIGANDO C
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hanno un grado maggiore di omologia
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MECCANISMO D’AZIONE DEGLI ESTROGE
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A C E 2 E 2 nucleo nucleo E 2 R R i
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Fattori di modificazione degli isto
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sequenze similari al NR-box. Anche
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dell’IGF-I è mediata dalla PI3K
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mediata dall'interazione con altri
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ER e PI3K Uno degli effetti rapidi
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hanno proposto che i recettori di m
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INFIAMMAZIONE L’infiammazione, o
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anaerobica essi provocano nel terri
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le componenti dell'essudato, come l
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vacuolo attorno alla particella est
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secreti. Le fonti cellulari più co
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Il PAF è coinvolto nella genesi di
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Il tumor necrosis factor α (TNFα)
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alchilazione del DNA dovuta ad alte
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Struttura 3D dell'eterodimero p65/p
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Page 127 and 128: DISCUSSIONE Numerosi studi indicano
Page 129 and 130: BIBLIOGRAFIA 1. Barnea, E.R., N.J.
Page 131 and 132: 33. Pike, A.C.W., A.M. Brzozowski,
Page 133 and 134: 63. Ignar-Trowbridge, D.M., M. Pime
Page 135 and 136: signaling in the cardiovascular sys
Page 137 and 138: to activation of the mitogen-activa
Page 139 and 140: 153. Firestein, G.S., The T cell co
Page 141 and 142: 185. Wang, D. and A.S. Baldwin, Act
Page 143 and 144: 217. Yin, M.J., Y. Yamamoto, and R.
Page 145 and 146: 251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
Page 147 and 148: estradiol-mediated protection again
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