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La PCR: stato e prospettive
a venti anni dalla sua invenzione
La metodica
La PCR é la metodica di laboratorio che ha avuto più
vasta eco non solo nel suo settore di applicazione ma
anche tra il grande pubblico per aver saputo rappresentare
al meglio le avveniristiche potenzialità della
biotecnologia.
La clonazione genica, il sequenziamento del genoma
umano, la scoperta del virus HIV e HCV e la definizione
dei loro cicli replicativi, sono alcune delle tappe più significative
che hanno contrassegnato la rivoluzione tecnologica
che la PCR ha avviato in biologia ed in genetica
molecolare.
Concepita 20 anni fa da Kary Mullis, un ricercatore
americano che lavorava presso la Cetus corporation, la
PCR consente di ottenere quantità pressoché illimitate
di qualsiasi tipo di acido nucleico facilitandone l’analisi,
la quantificazione, il clonaggio ed ogni successiva
processazione ed applicazione. Mullis intuì che sarebbe
stato possibile duplicare in vitro una sequenza di DNA
o RNA attraverso cicli ripetuti di polimerizzazione ottenendo
così un’ amplificazione esponenziale del numero
di molecole iniziale. La scarsa accuratezza ed efficacia
delle prime prove, che si basavano su DNA polimerasi
di limitata stabilità, furono rapidamente migliorate
dallo sviluppo di enzimi termoresistenti e quindi in
grado di funzionare in condizioni limite.
Dalla ricerca alla diagnostica
L’impiego della famiglia di DNA polimerasi isolate dai
batteri termoresistenti Thermus acquaticus (Taq) e Thermus
thermophilus (Tth) permise di rifinire le condizioni
sperimentali della PCR, che, grazie a passaggi procedurali
più rapidi e a più elevata stringenza, acquisì maggior
sensibilità e specificità.
Inoltre la polimerasi ottenuta dal Tth, essendo in grado
di amplificare l’RNA in unica reazione, ne semplificò
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