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La PCR: stato e prospettive<br />
a venti anni dalla sua invenzione<br />
La metodica<br />
La PCR é la metodica di laboratorio che ha avuto più<br />
vasta eco non solo nel suo settore di applicazione ma<br />
anche tra il grande pubblico per aver saputo rappresentare<br />
al meglio le avveniristiche potenzialità della<br />
biotecnologia.<br />
La clonazione genica, il sequenziamento del genoma<br />
umano, la scoperta del virus HIV e HCV e la definizione<br />
dei loro cicli replicativi, sono alcune delle tappe più significative<br />
che hanno contrassegnato la rivoluzione tecnologica<br />
che la PCR ha avviato in biologia ed in genetica<br />
molecolare.<br />
Concepita 20 anni fa da Kary Mullis, un ricercatore<br />
americano che lavorava presso la Cetus corporation, la<br />
PCR consente di ottenere quantità pressoché illimitate<br />
di qualsiasi tipo di acido nucleico facilitandone l’analisi,<br />
la quantificazione, il clonaggio ed ogni successiva<br />
processazione ed applicazione. Mullis intuì che sarebbe<br />
stato possibile duplicare in vitro una sequenza di DNA<br />
o RNA attraverso cicli ripetuti di polimerizzazione ottenendo<br />
così un’ amplificazione esponenziale del numero<br />
di molecole iniziale. La scarsa accuratezza ed efficacia<br />
delle prime prove, che si basavano su DNA polimerasi<br />
di limitata stabilità, furono rapidamente migliorate<br />
dallo sviluppo di enzimi termoresistenti e quindi in<br />
grado di funzionare in condizioni limite.<br />
Dalla ricerca alla diagnostica<br />
L’impiego della famiglia di DNA polimerasi isolate dai<br />
batteri termoresistenti Thermus acquaticus (Taq) e Thermus<br />
thermophilus (Tth) permise di rifinire le condizioni<br />
sperimentali della PCR, che, grazie a passaggi procedurali<br />
più rapidi e a più elevata stringenza, acquisì maggior<br />
sensibilità e specificità.<br />
Inoltre la polimerasi ottenuta dal Tth, essendo in grado<br />
di amplificare l’RNA in unica reazione, ne semplificò<br />
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