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74 Micoplasmi urogenitali Fig. 3 Colonie di U. urealyticum Fig. 4 Sistema diagnostico Mycoplasma IST Negli ultimi anni sono stati introdotti in commercio dei kits che contengono, già pronti all’uso, tutti i terreni occorrenti per la coltura e l’identificazione dei Micoplasmi urogenitali permettendo così anche ai laboratori non specializzati la ricerca di questi microrganismi. Generalmente si tratta di microgallerie i cui pozzetti contengono substrati adatti alla crescita. I prelievi eseguiti secondo le modalità illustrate in precedenza, vengono sempre inoculati in terreno di trasporto. Previo vortexamento, si trasferiscono alcune gocce in ognuno dei pozzetti che sono poi ricoperti con olio di paraffina, per assicurare l’anaerobiosi, ed incubati a 37°C per 24 ore. L’identificazione viene effettuata sulla base della sensibilità agli antibiotici di profilo o delle caratteristiche biochimiche, mentre la conta batterica si basa sull’inibizione della cinetica enzimatica. Non bisogna inoltre dimenticare che alcuni di questi sistemi permettono anche di valutare la resistenza ad alcuni antibiotici e che prolungando l’incubazione a 48- 72 ore si possono evidenziare conte batteriche basse. Interpretazione L’isolamento di U. urealyticum o di M. hominis da distretti normalmente sterili è sempre significativa. Il loro isolamento da distretti dove possono essere presenti allo stato commensale è di più difficile interpretazione per cui è necessaria una valutazione quantitativa generalmente espressa in “unità cambianti colore” (UCC). Nell’uomo vanno prese in considerazione cariche batteriche ≥ 10 4 UCC per i prelievi uretrali e ≥ 10 3 per il 1° getto di urina. Nella donna la presenza di U.urealyticum in un prelievo cervico-vaginale è ancora di più difficile interpretazione a causa della sua elevata frequenza in pazienti asintomatiche. M.hominis è isolato più di rado e può essere presente in conta ≥ 10 4 UCC nella Vaginosi batterica. La sua presenza in conta elevata può anche evocare un’infezione dell’apparato genitale superiore. La presenza di Micoplasmi in prelievi periferici del neonato può indicare una semplice contaminazione, decisamente più significativo è il loro isolamento da prelievi endotracheali. PCR Le tecniche di amplificazione genica con PCR costituiscono, praticamente, il solo metodo utilizzabile per diagnosticare le infezioni da M. genitalium e restano comunque il miglior metodo per l’identificazione di M. fermentans e M. penetrans. Sono molto interessanti anche nella diagnosi di U.urealyticun e M.hominis in alcuni prelievi particolari come il liquido amniotico, l’aspirato endotracheale, il liquido sinoviale etc. Diversi studi hanno dimostrato l’elevata sensibilità di questi metodi in confronto alle tecniche colturali standard che si traduce in un aumento di diagnosi (fino al 40%) soprattutto nelle complicanze ostetriche e nelle infezioni neonatali 60, 61.
La PCR permette inoltre di differenziare i 2 biovar di Ureaplasma: U. urealyticum e U. parvum. Diagnosi sierologica La sierologia non è applicata nella diagnosi di routine delle infezioni sostenute dai Micoplasmi urogenitali. E’ possibile comunque valutare la presenza di anticorpi specifici verso le diverse specie du Micoplasmi utilizzando metodi immunoenzimatici o che sfruttano l’inibizione metabolica. Quest’ultima consiste nel valutare l’effetto di un siero, diluito in serie, sull’attività metabolica dei Micoplasmi (idrolisi dell’urea per U. urealyticum e dell’arginina per M. hominis). Sensibilità agli antibiotici I Micoplasmi hanno una resistenza intrinseca ad alcuni antibiotici (beta-lattamici, rifampicina, polimixina); potenzialmente attivi sono invece le tetracicline, i chinoloni, i macrolidi. Tuttavia M. hominis è generalmente resistente all’Eritromicina, ma non agli altri macrolidi, U urealyticum è resistente alla Lincomicina L’apparire di ceppi resistenti alle tetracicline (espressione del gene tetM), ai macrolidi e più recentemente ai chinoloni 62, 63, rende l’esecuzione del test di sensibilità agli antibiotici indispensabile in molte occasioni. monografia Fig. 5 Sistema diagnostico Mycofast Infezioni Sessualmente Trasmissibili Questo, nella routine, può essere realizzato solo con terreni liquidi in gallerie o in micropiastre. La reazione utilizzata é una inibizione metabolica: quando il germe é sensibile all’antibiotico presente nel pozzetto, il suo metabolismo é inibito ed il terreno, che contiene come indicatore rosso fenolo, resta del colore di partenza altrimenti si ha un viraggio. Fig. 6 Mycofast: campione negativo Fig. 7 Mycofast: U. urealyticum con conta 10 5 UCC 75
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