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Emocolture: Il prelievo deve essere seminato direttamente
sui terreni di coltura in quanto i flaconi per emocolture
contengono anticoagulanti che hanno un effetto inibitorio
sui Micoplasmi.
Trasporto
Data la loro sensibilità all’essiccamento si divrebbe adoperare
sempre un terreno di trasporto. In particolare il
terreno saccarosio-fosfato (2 SP) arricchito col 5% di siero
fetale di vitello, senza aggiunta di antibiotici può essere
utilizzato sia per l’esame colturale sia per la PCR.
I campioni devono essere seminati al più presto; possono
essere conservati a +4°C per 48 ore altrimenti devono
essere congelati a –70°C
Esame colturale
Relativamente semplice per M. hominis e U. urealyticum
è invece complessa e lunga per le altre specie.
Il terreno di coltura (A7) utilizzato per la ricerca di questi
microrganismi è abbastanza complesso ed è arricchito con:
● siero animale ricco in colesterolo essendo i Micoplasmi
incapaci di sintetizzarlo; generalmente viene usato il
siero di cavallo o meglio ancora di pollo.
● estratto di lievito
● antibiotici e specificatamente beta lattamici perché non
hanno effetto su questi microrganismi sprovvisti di
parete. Sembra che alcuni ceppi siano sensibili alla
micostatina ed alla amfotericina B per cui é preferibile
non aggiungere antimicotici al terreno di coltura.
Non bisogna dimenticare che essendo i Micoplasmi ubiquitari
possono infettare il siero di alcuni animali per cui
è bene filtrarlo prima dell’utilizzo.
Secondo lo schema classico la coltura di questi microrganismi
prevede una prima semina in brodo urea-arginina
da cui si prelevano 3 gocce per insemenzare il terreno
solido A7 incubato, poi, per 24-48 ore a 37°C in anaerobiosi
o in microaerofilia (Fig.1).
Identificazione
L’identificazione dei Micoplasmi si basa sulle loro proprietà
metaboliche: capacità di idrolizzare l’urea o l’arginina
e di fermentare il glucosio (Tab. 3) e sull’aspetto
Tabella 3
monografia
Fig. 1
Schema perl’esame
colturale dei
Micoplasmi urogenitali
Fig. 2
Colonie di M. Hominis
Tab. 3
Proprietà di acune
specie di Micoplasmi
Specie Frequenza Glucosio Arginina Urea
d’isolamento in coltura
____________________________________________
U. urealyticun Frequente - - +
M. hominis Frequente - + -
M. genitalium Molto rara + + -
M. fermentans Molto rara + - -
Infezioni Sessualmente Trasmissibili
delle colonie.
Le dimensioni e l’aspetto delle colonie sul terreno solido
A7 sono estremamente variabili. Sulla stessa piastra se ne
possono trovare con diametro da 10 a 500 microns (devono
essere osservate al microscopio), con aspetto omogeneo
o irregolare. Esse vanno ricercate sui bordi delle cellule
ed alla periferia della goccia di inoculo.
Nelle colonie di Mycoplasma hominis (Fig.2) possiamo
individuare due parti: una parte centrale otticamente più
densa, che é il vero centro germinativo della colonia, dall’aspetto
più o meno granuloso circondata da un anello
periferico traslucido che conferisce l’aspetto tipico ad
“uovo fritto”.
Questa parte si forma più tardi e può essere molto ridotta
se il numero di colonie é particolarmente elevato.
La maggiore densità ottica della parte centrale é data dal
fatto che le cellule di Micoplasmi si sviluppano nello spessore
dell’agar mentre nella parte periferica la crescita é
solo superficiale. Ureaplasma urealyticum forma delle
colonie molto più piccole in cui questa zona chiara é rudimentale
per cui é visibile solo la parte centrale più scura;
si direbbe di vedere solo il “tuorlo dell’uovo”.
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