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28 Chlamydia Trachomatis: una subdola causa di infertilità suo antigene o di un suo frammento molecolare, rimane, come per altre infezioni, la correttezza del prelievo, del suo trasporto e della sua conservazione. L’isolamento della C.t. in coltura cellulare da prelievi endocervicali ed uretrali, considerato fino a poco fa, il test di riferimento standard (sensibilità stimata 70%-90%, specificità 100%) richiede laboratori specializzati, in grado di garantire la qualità dell’indagine e un’attesa di 3-7 giorni per ottenere dei risultati. L’impiego routinario dell’esame colturale sembra trovare il massimo vantaggio solamente nelle popolazioni con tassi di prevalenza di infezione uguale o superiore al 14%. L’immunofluorescenza diretta prevede l’uso di anticorpi monoclonali fluorescinati specie-specifici. I tempi di esecuzione sono brevi (circa 15’); la tecnica è semplice e necessita di un microscopio ad immunofluorescenza e di un operatore esperto. La sensibilità varia dall’80 al 90% e la specificità dall’85 al 99%, sempre in riferimento alla metodica colturale e in relazione all’esperienza dell’operatore. Il metodo immunoenzimatico (ELISA) identifica l’antigene mediante anticorpi monoclonali coniugati con un enzima quale la perossidasi; la lettura spettrofotometrica fornisce risultati obiettivi a prescindere dall’operatore. Il consensus generale riconosce all’immunofluorescenza minore sensibilità e specificità rispetto alle metodiche colturali e alla stessa immunofluorescenza diretta. Il suo uso routinario, per prevalenze di infezione clamidiale uguali o inferiori al 7%, è giustificato dal basso costo, dalla semplicità di esecuzione, dalla facile lettura, nonché dalla rapidità di esecuzione (circa 30 minuti). Le metodiche di ibridazione molecolare, con impiego di sonde biotinate e di tecniche di amplificazione genica (PCR), sono in grado di evidenziare minuscoli frammenti di DNA di C.t. su prelievi uretrali, endocervicali o endometriali e su campioni di urina, con sensibilità e specificità pari al 100% (tabella 3). Tabella 3 LIMITI DI SENSIBILITA’ DEI PRINCIPALI METODI DIAGNOSTICI PER LA DETERMINAZIONE DI PROTEINE O ACIDI NUCLEICI IN UN CAMPIONE BIOLOGICO ANTIGENI PROTEICI Tab 3 ● Metodi immunoenzimatici (EIA) 100.000 molecole ACIDI NUCLECI ● Tecniche di ibridazione 10.000 molecole ● Metodi di biologia molecolare con amplificazione del DNA (PCR) 1 molecola La PCR amplifica sequenze nucleotidiche di un plasmide criptico della C.t., presente approssimativamente in un numero di copie variabile da 7 a 10 per corpo elementare così che risulta più vantaggioso in termini di sensibilità rispetto al DNA cromosomiale. I test di amplificazione genica degli acidi nucleici devono essere considerati oggi i test “gold standard’’ per la diagnosi di infezione da Chlamydia trachomatis (Poulakkaien et al., 1998) (tabella 4). Il loro impiego è tuttora ancora limitato sia per i costi elevati sia per la necessità di disporre di laboratori attrezzati. Sebbene siano più costose dei test antigenici, queste tecniche consentono di identificare un maggior numero di soggetti infetti. Non bisogna dimenticare che l’utilizzo del test diagnostico più costoso potrebbe essere costo-efficace, dal momento che il trattamento delle complicazioni dell’infezione clamidiale risulta essere decisamente più dispendioso e che la possibilità di effettuare la ricerca del microrganismo sulle urine di primo mitto potrebbe cambiare i programmi di controllo dell’infezione della Chlamydia perché più facilmente accettata dal paziente (Paavonen et al., 1999). La sierologia non è impiegata nella diagnosi di routine di infezione genitale “superficiale’’ da C.t., in quanto non permette di distinguere un’infezione recente da una pregressa. La ricerca anticorpale può tuttavia assumere un ruolo diagnostico importante nelle infezioni genitali profonde (salpingiti, PID). Maggiore è il titolo anticorpale, maggiore pare essere la gravità del danno tubarico (Tanikawa et al., 1996; Land et al., 1998; Thomas et al., 2000). In una recente meta-analisi, la capacità diagnostica degli Ab contro la Chlamydia è stata comparata a quella dell’ISG nella determinazione del danno tubarico. Le due metodiche non sembrano differire se non per il fatto che la seconda fornisce anche informazioni riguardo la cavità uterina (Mol et al., 1997). La determinazione degli Ab anti Chlamydia, fortemente caldeggiata da molti Autori quale test di screening nella valutazione della pervietà tubarica nelle donne infertili, non può comunque essere effettuata come unica indagine a tal proposito (Veenemans et al., 2002). Benché l’indagine sierologica sia semplice, non invasiva e ben accettata dalle pazienti, è gravata da falsi positivi per fenomeni di cross-reattività tra le diverse specie clamidiali genitali e non e da falsi negativi (la stenosi tubarica può essere dovuta a cause non relate alla C.t. quali l’endometriosi). Ne consegue che non è possibile sottoporre a laparosco-
RICERCA DI CHLAMYDIA TRACHOMATIS MEDIANTE TECNICHE DI BIOLOGIA MOLECOLARE VANTAGGI Tabella 4 monografia ● Sensibilità (90-95%) superiore rispetto a metodi IFA (80-90%) e EIA (73%); specificità (98-100%) elevata ● Unico metodo consigliato per la ricerca su liquido seminale, secreto endoprostatico, s ecreto endocervicale ed urine LIMITI ● Costi elevati in confronto ad IFA, EIA e ELFA ● Falsi postivi per possibili contaminazioni tra campioni diversi per elevata sensibilità del metodo e falsi negativi per sostanze inibenti l’amplificazione del DNA ● Tempo di risposta minimo 12 ore per PCR ● Specifico addestramento del personale di laboratorio ● Disponibilità di spazi di laboratorio separati e dedicati Tab 4 pia esclusivamente le pazienti ad alto rischio per patologia tubarica sulla base del titolo degli Ab anti Chlamydia (Johnson et al., 2000). Conclusioni Lo screening per la Chlamydia trachomatis nelle coppie infertili costituisce un problema non ancora risolto. La prevalenza dell’infezione da C.t. non è esattamente nota nella popolazione infertile. Nelle donne affette da sterilità si stima che la prevalenza delle cerviciti sintomatiche dovute a C.trachomatis possa variare dallo 0 al 1.9 % (Macmillan et al., 1999). E’ dimostrato che procedure diagnostiche (isterosalpingografia, isteroscopia) e/o terapeutiche (inseminazione intrauterina, embryo transfer) strumentali sull’utero possono favorire la risalita di batteri dalla cervice nelle vie genitali femminili superiori o riattivare microrganismi già presenti nel tratto genitale alto in pazienti con pregressa infezione clamidiale, soprattutto se asintomatica. Ed è dimostrato che infezioni maschili, specie se asintomatiche, possono compromettere la fertilità della donna. Se si può accettare che donne infertili abbiano probabilmente una bassa incidenza di infezioni cervicali attive dovute alla C.t., dal momento che hanno un’età superiore a 25 anni ed una maggiore probabilità di avere una relazione stabile con un solo partner, è meno accettabile un’ulteriore compromissione della loro fertilità. A questo proposito ci si è chiesti se, prima di effettuare indagini strumentali sull’utero (ISG, LPS, IUI, ET), fosse preferibile effettuare uno screening almeno nelle donne ad alto rischio. Estendere lo screening per l’infezione da C.t. a tutte le coppie infertili, nella quale l’infezione clamidiale ha una Infezioni Sessualmente Trasmissibili bassa prevalenza, potrebbe, infatti, comportare spese ingenti per il Sistema Sanitario Nazionale, soprattutto se il programma di screening non fosse fondato su tecniche diagnostiche altamente sensibili e specifiche, quali i test di amplificazione genica degli acidi nucleici considerati i “gold standard’’ nella diagnosi di infezione da Chlamydia trachomatis (Macmillan et al., 1999; Land et al., 2002). L’impiego stesso della PCR potrebbe essere limitato dai costi elevati e dalla mancanza di laboratori opportunatamente attrezzati. D’altro canto, una profilassi antibiotica estesa a tutte le donne, candidate a strumentazione uterina, potrebbe gravare pesantemente sul bilancio della spesa sanitaria nazionale. L’uso non selettivo degli antibiotici potrebbe portare, infatti, all’aumento delle infezioni persistenti e allo sviluppo di chemioresistenza da parte dei vari ceppi della C.trachomatis (Macmillan et al., 2002). Una review (Macmillan et al., 2002) delle evidenze (Chief Medical Officer 1998; Royal College of Obstetricians and Gynaecologists 2000) suggerisce che vengano screenate per la C.t. nelle vie genitali inferiori, mediante test sensibili, donne infertili di età 25 anni ma con fattori di rischio, uomini con fattori di rischio e i donatori di gameti. Maggiori informazioni sono necessarie prima di estendere lo screening anche agli uomini sulla base dell’età. L’indagine sierologica con i test tuttora disponibili non può essere utilizzata quale test di screening. Le donne con una pregressa infezione clamidiale o con diagnosi di patologia tubarica dovrebbero, oltre allo screening, essere sottoposte a profilassi antibiotica quando sottoposte a strumentazione uterina (si consiglia in questi casi la somministrazione di azitromicina da 1 g, in singola dose, dodici ore prima della procedura) (Land et al., 2002). Si raccomanda lo screening per le MST anche al partner di queste donne. 29
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