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162<br />
In ciascuna PCR sono stati inclusi, come controlli<br />
per i marcatori e l’esecuzione dell’amplificazione,<br />
campioni <strong>di</strong> DNA <strong>di</strong> maschio e femmina normale, oltre<br />
che un campione non contenente DNA (controllo<br />
bianco).<br />
I test <strong>di</strong> PCR mostranti la delezione del gene per i loci<br />
AZF sono stati confermati con l’analisi <strong>di</strong> sequenza<br />
e i frammenti <strong>di</strong> PCR sequenziati con Abi Prism<br />
Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction<br />
Kit (PE Applied Biosystem) in accordo con le<br />
raccomandazioni della casa, insieme a un sequenziatore<br />
ABI PRISM 377 DNA (PE Applied Biosystem,<br />
Foster City, CA, USA).<br />
ANALISI DEGLI APLOGRUPPI DEL CROMOSOMA Y<br />
Un totale <strong>di</strong> 77 cromosomi Y da pazienti con oligozoospermia<br />
sono stati genotipizzati per 11 marcatori<br />
biallelici – YAP-DYS287, SRYY4064, M201,<br />
12f2 (DYS11), M9, M17, M74, M170, M173,<br />
M269, P25 – e classificati nei maggiori aplogruppi<br />
europei del cromosoma Y (Hgs- The Y-Chromosome-Consortium-<br />
the YCC, 2002) 28 . Ad eccezione<br />
dei marker YAP e 12f2, esaminati in accordo con alcuni<br />
Autori 45 46 , rispettivamente tutti gli altri marcatori<br />
sono stati sottoposti ad analisi me<strong>di</strong>ante DHPLC<br />
(Denaturing High Performance Liquid Chromatography),<br />
come precedentemente riportato 26 .<br />
TEST STATISTICI<br />
L’analisi dei dati è stata condotta utilizzando la funzione<br />
<strong>di</strong> probabilità χ2 (Chi quadro) a 6 gra<strong>di</strong> <strong>di</strong> libertà,<br />
con un test ad una coda ed un livello <strong>di</strong> significatività<br />
alfa = 0,05.<br />
A livello <strong>di</strong> significatività alfa = 0,05, la <strong>di</strong>pendenza<br />
fra le righe e le colonne era assunta non significativa.<br />
Risultati<br />
I dati epidemiologici emersi dal nostro stu<strong>di</strong>o e riportati<br />
in Tabella I mostrano i seguenti risultati: le delezioni<br />
del cromosoma Y per quanto riguarda l’AZFc<br />
sono state riscontrate solo in 3 degli 86 soggetti oligozoospermici<br />
esaminati (3,5%).<br />
Le frequenze dell’aplogruppo del cromosoma Y in<br />
77 dei soggetti oligozoospermici (Tab. II) evidenziano<br />
che: tutti i cromosomi Y sono stati trovati appartenere<br />
agli aplogruppi E (D), G, I, J ed R. Dalla comparazione<br />
con il gruppo <strong>di</strong> controllo non è stata osservata<br />
alcuna <strong>di</strong>fferenza nella <strong>di</strong>stribuzione degli<br />
aplogruppi (χ 2 = 12,168; p = 0,058). Sebbene tutti i 3<br />
pazienti con delezioni del cromosoma Y (AZFc) ap-<br />
partenessero all’aplogruppo J (il più comune aplogruppo<br />
nell’Italia Centro-Sud), questi dati non sono<br />
risultati statisticamente significativi.<br />
Discussione<br />
G. Peluso, G. Morrone.<br />
Tab. I. Dati epidemiolo<strong>di</strong>ci <strong>di</strong> pazienti italiani oligozoospermici.<br />
Epidemiologic data in Italian oligozoospermic<br />
patients.<br />
Numero <strong>di</strong> pazienti 86<br />
Età (Me<strong>di</strong>a ± SD) 37,1 ± 3,8<br />
Tempo <strong>di</strong> infertilità (me<strong>di</strong>a ± SD) 2,8 ± 1,1<br />
Conta spermica (10 6 x ml) 3,2 ± 0,7<br />
Motilità spermatica (%) 15,6 ± 4,9<br />
Normale morfologia spermatica 21,4 ± 8,5<br />
Pazienti con delezioni del cromosoma-Y 3 (3,5%)<br />
Con la ICSI, la prognosi riproduttiva <strong>di</strong> uomini con<br />
oligozoospermia severa 47 è cambiata sostanzialmente,<br />
sebbene l’uso <strong>di</strong> tale tecnica desta tuttora preoccupazioni<br />
per le probabili conseguenze sulla prole,<br />
da quando lo sperma non naturalmente selezionato o<br />
immaturo e quello prelevato <strong>di</strong>rettamente dai testicoli<br />
vengono usati per fertilizzare gli ovociti, aggirando<br />
le naturali barriere <strong>di</strong> selezione 5 .<br />
È stato riportato in letteratura un aumento, nella IC-<br />
SI, <strong>di</strong> prole con aneuploi<strong>di</strong>e dei cromosomi sessuali 6<br />
e documentato inoltre un incremento <strong>di</strong> cromosomi<br />
aneuploi<strong>di</strong> negli spermatozoi <strong>di</strong> uomini oligozoospermici<br />
48 49 .<br />
Inoltre, la scoperta delle delezioni del locus AZFc nel<br />
cromosoma Y <strong>di</strong> uomini infertili ha evidenziato ancor<br />
<strong>di</strong> più il rischio <strong>di</strong> trasferire alterazioni genetiche<br />
alla prole me<strong>di</strong>ante ICSI 9 10 .<br />
Dai dati riportati in letteratura ad oggi sono state riscontrate<br />
larghe <strong>di</strong>fferenze nella frequenza delle delezioni<br />
del cromosoma Y in un range variabile da 1,5<br />
a 18% <strong>di</strong> uomini infertili 18 20 .<br />
Gli stessi range <strong>di</strong> frequenze nei casi <strong>di</strong> azoospermia<br />
non ostruttiva vanno da 10 a 35%, mentre nelle<br />
oligozoospermie severe i<strong>di</strong>opatiche variano da 8<br />
a 14% 12 41 44 .<br />
Nel nostro campione <strong>di</strong> soggetti con oligozoospermia<br />
severa i<strong>di</strong>opatica, la frequenza delle delezioni<br />
del cromosoma Y riscontrata è risultata significativamente<br />
più bassa rispetto a quelle riportate in letteratura<br />
18 19 21 24 50 51 : infatti solo il 3,5% dei pazienti ha<br />
mostrato una delezione del locus AZFc, frequenza a<br />
nostro avviso piuttosto bassa rispetto a quella riportata<br />
dai <strong>di</strong>versi Autori (1,5-18%).