MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara

MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara

euskara.euskadi.net
from euskara.euskadi.net More from this publisher
16.05.2013 Views

AZIL KoA-OXIDASA (AOX) JARDUERAREN NEURKETA (Small et al., 1985). 1.- Bareen liseri-guruinak TVBE indargetzailean homogenizatu eta 500 g-tan zentrifugatu, 15 minutuz eta 4ºC-tan. TVBE indargetzailea pH 7.6 (100 ml) NaHCO3 8.4 mg 0.1M EDTA 1 ml %0.1 etanol 0.1 ml %10 Triton X-100 0.1 ml H2O distilatua 100 ml 2.- Gainjalkinaren 100 µl (beharrezko diluzioan) hartu eta 1.9 ml inkubazio-mediora gehitu. Nahasketa 5 minutuz eta 25ºC-tan iluntasunean mantendu. Substratuaren (Palmitoil-KoA (Sigma P-9276) 3 mM) 10 µl gehitu, nahastu eta absorbantziaren aldaketa neurtu 502 nm-tan 3 minutuz. Inkubazio-medioa 0.5M potasio fosfato indargetzailea 2 ml DCF disoluzioa* 2 ml Errefrau peroxidasa 1200 mU/ml (Sigma P-8250) 1 ml 4 M NaN 3 (Sigma S-2002) 1 ml %10 Triton X-100 (Sigma X-100) 2 ml H 2 O distilatua 100 ml arte *1 ml egiteko: 1.3 mg diklorofluoreszeina (DCF) (Molecular Probes D-399) 100 µl dimetilformamida + 900 µl 0.01 N NaOH-an disolbatu. Potasio fosfato indargetzailea 0.5 M pH 7.4 KH2PO4 680 mg H2O distilatua 10 ml K 2 HPO 4 3H 2 O 1140 mg H 2 O distilatua 10 ml KH 2 PO 4 disoluzioa K 2 HPO 4 3H 2 O disluzioari gehitu pH 7.4 lortu arte. Substratu disoluzioa (3 mM palmitoil-KoA oxidasa) Palmitoil-KoA (Sigma, P-9276) ur distilatuan disolbatu, beharrezko kontzentrazioa lortu arte. 0.5 ml-tako alikuotetan izoztu eta gorde. 3.- AOX jardueraren neurketa honela burutu: mUnitate/ml = (Absorbantziaren aldaketa/minutu) x (erreakzio-bolumena/lagin-bolumena) x (mg proteina/ml). mUnitate/mg proteina = (mUnitate/ml) / ( mg proteina/ml) Metodologi-eranskina 235

Metodologi-eranskina 236

Metodologi-eranskina<br />

236

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!