MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Emaitzak eta eztabaida<br />
liseri-zelulen lisosometako BSD eta zitoplasma<br />
bereizteko segmentazio-prozedura aplikatu zen.<br />
Neurketak bare bakoitzean 5 eremutan burutu<br />
ziren, eta talde esperimental bakoitzean 10 bare<br />
erabili ziren; tratamendu bakoitzeko guztira 50<br />
neurketa eginez. Kalkuluak, Lowe et al.-ek (1981)<br />
proposatutako formulak erabiliz egin ziren. Hau da,<br />
BSD partikulen tamaina ebakiaren lodiera baino<br />
txikiagoa zela kontutan hartuz, Holmes efektua<br />
zuzentzeko faktorea kontuan hartu zen.<br />
Azterketa histologikoa eta analisi histologiko<br />
kuantitatiboak<br />
Parafinan inkluditutako ebakiak (7 µm)<br />
Hematoxilina-eosinaz tindatu ziren eta EPON<br />
erretxinan inkluditutako ebaki semifinak (3-4 µm)<br />
toluidina urdinez tindatu ziren, talde desberdinetako<br />
bareen liseri-guruineko epitelioaren eta bertoko<br />
zelula-moten deskribapen morfologikoa argi-<br />
mikroskopioaren bitartez egiteko.<br />
Liseri-zelulen, iraizte-zelulen eta kaltzio-zelulen<br />
dentsitate bolumetrikoa kalkulatzeko (Vv DIG ,<br />
Vv EXC , Vv CAL ) prozedura estereologikoa aplikatu<br />
zen. Horretarako, lagin bakoitzean azarez<br />
aukeratutako zelai batetan egin ziren kontaketak<br />
guztira talde esperimental bakoitzeko 10 kontaketa<br />
burutuz. Analisi estereologikoak burutzeko, Nikon<br />
Optiphot mikroskopioari atxikitako irudi-hodia<br />
erabili zen (amaierako handipena 670x). Zelulen<br />
Vv DIG , Vv EXC eta Vv CAL Delesse printzipioan<br />
oinarrituz (Weibel, 1979) kalkulatu zen. Lortutako<br />
datu horietan oinarrituta, zelula-mota bakoitzaren<br />
proportzio erlatiboa portzentaietan kalkulatu zen.<br />
194<br />
Lisosomen egitura-aldaketak<br />
Liseri-zelulen lisosomen ikustaraztea ß-<br />
glukuronidasa (ß-GUS) entzimaren jardueraren<br />
agerketa histokimikoa burutuz egin zen, Cajaraville<br />
et al.-en (1991) prozedura jarraituz. Ebakiak, egin<br />
berria zen ß-GUS inkubazio-medioan (28 mg<br />
naphtol AS-BI-ß-D-glucuronide 1.2 ml 50 mM sodio<br />
bikarbonatoan disolbatuta eta 100 ml-arte %2.5<br />
NaCl eta %15 polibinilo alkohola zuen azetato<br />
indargetzailean, pH 4.5) murgildu ziren 10 minutuz<br />
37ºC-tan, etengabe irabiatuz. Inkubazioaren<br />
ondoren, laginak %2.5 NaCl gatz-disoluzioan<br />
garbitu ziren 2 minutuz 37ºC-tan, etengabe<br />
irabiatuz. Laburki, ebakiak disoluzio ikustarazlean<br />
sartu ziren (0.1 g Fast Garnet GBC % 2.5 NaCl<br />
zuen 0.1 M fosfato indargetzaileko (pH 7.4) 100 ml-<br />
tan disolbatuak) 10 minutuz eta ilunpean. Ondoren,<br />
laginak %2.5 NaCl zuen Baker formol kaltzikoan<br />
fixatu ziren 10 minutuz 4ºC-tan, eta uretan labur<br />
garbitu ziren. Azkenik, laginak % 0.1 Fast Green<br />
disoluzio batean kontrastatu ziren bi minutuz, ur<br />
distilatuan hainbat aldiz garbitu, Kaiser gelatina<br />
glizerinatuan montatu eta azazkalen esmalteaz<br />
zigilatu ziren.<br />
Lisosomen egitura, automatizatutako irudi-<br />
analisi (Biological Measurement System software-<br />
BMS- Sevisan; Cajaraville et al., 1991) bitartez<br />
neurtu zen. Ebakiak, x100 handipeneko objektiboa<br />
erabiliz aztertu ziren Leitz argi-mikroskopioan. 5<br />
neurketa burutu ziren ebaki bakoitzean, hurrengo<br />
parametro estereologikoak kalkulatuz: lisosomen<br />
dentsitate bolumetrikoa (Vv LYS = V(L)/V(C)),<br />
dentsitate superfiziala (Sv LYS = S(L)/V(C)),<br />
azalera/bolumena ratioa (S/V LYS = S(L)/V(L)) eta
Change language