MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Emaitzak eta eztabaida<br />
AOX peroxisomikoaren jarduera<br />
AOX jarduera espektrofotometrikoki<br />
determinatu zen, 502 nm-ko uhin-luzeera erabiliz,<br />
Small et al.-ek (1985) ezarritako metodologia<br />
jarraituz. Bareen liseri-guruinak 4 ml/g ehun pH 7.6<br />
zuen TVBE indargetzailean (1 mM sodio<br />
bikarbonatoa, 1 mM EDTA, %0.1 etanola eta %0.01<br />
Triton X-100) teflonezko homegenizatzailea erabiliz<br />
izotzezko bainuan homogenizatu ziren. Lagin<br />
homogenizatuak 500 g-tara zentrifugatu ziren 15<br />
minutuz 4ºC-tan eta, ondoren, AOX jarduera<br />
neurtzeko, gainjalkina TVBE indargetzailean 10<br />
aldiz diluitu zen. Saiakerak, 30 µM palmitoil-CoA<br />
oxidasa substratu gisa erabiliz, peroxidasa<br />
endogenoak katalizatutako diklorofluoreszeina<br />
diazetatoaren (Molecular probes, Eugene, Oregon,<br />
Amerikako Estatu Batuak) H 2 O 2 menpeko<br />
oxidazioa du oinarri. Orotariko proteina-<br />
kontzentrazioa Lowry et al.-ek (1951) garatutako<br />
metodoan oinarritutako DC protein assay (BioRad,<br />
Hercules, California, Amerikako Estatu Batuak)<br />
erabiliz kalkulatu zen, estandar gisa γ-globulina<br />
erabiliz.<br />
BrdU immunohistokimika<br />
Liseri-guruineko zelula proliferatzaileak BrdU<br />
immunohistokimika bidez lokalizatzeko, 27.<br />
esposizio-eguneko eta arazte-aldi osteko bareei<br />
3.5 mg BrdU injektatu zitzaien oinean zehar.<br />
Carnoy-z fixatutako eta parafinan inkluditutako<br />
ebakiak (3-4 µm-ko lodiera) American Optical<br />
mikrotomoan lortu ziren, eta aldez aurretik (3-amino<br />
propil trietoxisilanoz) silanizatutako<br />
172<br />
portaobjektuetan jaso ziren. Ondoren, laginak<br />
xilenoz desparafinatu ziren, beheranzko<br />
graduazioko etanolezko bainu-seriean hidratatu eta<br />
fosfato indargetzaile salinoz (PBS; ingeleraz,<br />
Phosphate-Buffered Saline) garbitu ziren. DNA, 0.1<br />
N HCl-ez desnaturalizatu zen ordu batez, 37°C-tan.<br />
Ebakiak, %5 bovine serum albumine (BSA) zuen<br />
suero blokeatzailean ordu batez inkubatu ziren giro-<br />
tenperaturan eta berriro ere PBS-z garbitu ziren.<br />
Gero, ebakiak BrdUren aurkako antigorputz<br />
espezifikoan (Roche, Basilea, Suitza); %0.1 BSA<br />
zuen PBSan 1:10 diluitua) inkubatu ziren. Laginak<br />
PBS-z garbitu ziren, eta ondoren, abidina-biotina<br />
entzima-konplexua erabiliz antigorputza ikustarazi<br />
zen. Laburki, ebakiak, PBS-an diluitutako saguaren<br />
aurkako ahuntzaren IgG antigorputz sekundario<br />
biotinilatuan inkubatu ziren, 30 minutuz, eta<br />
ondoren PBSn garbitu ziren. Fosfatasa alkalinoa<br />
jarduera ikustarazteko kromogenoaren disoluzioa<br />
(naftol fast-red zuen PBS indargetzailean<br />
disolbatua) erabili zen. Azkenik, ebakiak Mayer<br />
hematoxilinaz kontrastatu (1 minutu), dabiluretan<br />
garbitu eta Kaiser gelatina glizerinatuan (Merck &<br />
Co., Inc, Whitehouse Station, New Jersey,<br />
Amerikako Estatu Batuak) muntatu ziren.<br />
Mikrografiak, Olympus BX50 (Olympus, Tokio,<br />
Japonia) mikroskopioari atxiki zegoen Olympus<br />
PM20 argazki-kameraz erdietsi ziren.<br />
EMAITZAK<br />
Bare kontrolek elikatze-jarduera konstantea<br />
erakutsi zuten esperimentuak iraun bitartean (1B<br />
Ird.). Maneiu esperimentalak eta laborategiko<br />
baldintzek jaitsiera txikia eragin zuten bareen
Change language