MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara

Zelula-moten ordezkapen itzulgarria kadmio pean jarritako Littorina littorea molusku itsastarraren liseri-guruinean.
hematoxilinaz kontrastatu ziren (10 s), dabilen
uretan garbitu eta Kaiser gelatina glizerinatuan
(Merck & Co., Inc, Whitehouse Station, New Jersey,
Amerikako Estatu Batuak) montatu ziren.
Mikrografiak, Olympus BX50 mikroskopio batetara
atxiki zegoen Olympus PM20 argazki-kamera batez
erdietsi ziren.
Autometalografia
Metalak, Danscher-ek (1984) deskribatutako eta
Soto et al.-ek (1998b) modifikatutako prozedura
jarraituz determinatu ziren parafinan inkluditutako
laginetan. Ebakiak (7 µm), laburki xilenoz
desparafinatu ziren, beheranzko graduazioko
etanolezko bainu-serie batean hidratatu eta labean
(37ºC) utzi ziren guztiz lehortu arte. Laginak
ondoren, argazki-emultsio geruza fin eta uniforme
batez estali ziren gela ilunean (Ilford Nuclear
Emulsion L4, Ilford, Mobberley, Ingalaterra).
Laginak ilunpean mantendu ziren lehortu bitartean
(30 minutu) eta laginak Ultrafin Tetenal SF (1:5
diluzioa ur destilatuan) (Tetenal AG & Co,
Norderstedt, Alemania) errebelatzaile komertziala
erabiliz errebelatu ziren 15 minutuz. Ondoren,
errebelatzailearen erreakzioa %1 azido azetikoa
zuen diluzio batean geldiarazi zen minutu batez, eta
azkenik erreakzioa fixatzailean (Agfa Agefix, Agfa-
Gevaert N.V., Mortsel, Belgika, 1:9 uretan) fixatu
zen 10 minutuz. Hauspeakin beltz (BSD) moduan
agertutako metalak irudi-analisi baten bitartez
(Biological Measurement System software BMS-
Sevisan, Bilbo, Espainia.) kuantifikatu ziren.
Horrela, BSDen dentsitate bolumetrikoa (Vv BSD )
kalkulatu zen: Vv BSD = V BSD /V EH non V BSD
BSDen bolumena den eta V EH ehunaren
bolumena.
Lisosomen estereologia
ß-glukuronidasa entzimaren erreakzio
histokimikoa fixatu gabeko kriotomo ebakietan
burutu zen Moore-k (1976) deskribatu eta
Cajaraville et al.-ek, (1989) modifikatu legez.
Ebakiak (8 µm) -21ºC-ko kabinako tenperatura
zuen CM3000 kriotomoan (Leica Instruments
GmbH, Nussloch, Alemania) lortu ziren, ebakiak
giro-tenperaturan zeuden portaobjektuetan jazo
ziren eta -40ºC-tan mantendu ziren tindatu aurretik.
Ebakiak, 28 mg naphtol AS-BI glucuronide 1.2 ml
sodio bikarbonatoan (50 mM) disolbatutako eta 100
ml-arte %2.5 NaCl zuen 0.1 M sodio azetato
indargetzailean (pH 4.5) murgildu ziren. Disoluzio
honetan, %20 (W/V) polibinilo alkoholezko 10-21 g
disolbatu ziren egonkortzaile koloidal gisa. Ebakiak
40 minutuz 37ºC-tan inkubatu ziren etengabeko
irabiatzea zuen bainu batean. Ondoren, laginak
%2.5 NaCl-tan garbitu ziren 2 minutuz eta 37ºC-
tan,eta %2.5 NaCl eta 1 mg/ml Fast Garnet GBC
0.1 M fosfato indargetzailean (pH 7.4) tindatu ziren
10 minutuz giro tenperaturan. Ebakiak, Baker
formol kaltzikoan (%4 formaldehido, %1 CaCl 2 eta
%2.5 NaCl) fixatu ziren 10 minutuz 4ºC-tan.
Laburki, uretan garbitu eta gero %0.1 zuen Fast
Green FCF disoluzioan kontrastatu zen 2 minutuz.
Azkenik, ebakiak Kaiser gelatina glizerinatuan
muntatu ziren.
Prozedura estereologikoa aplikatuz eta irudi-
analisia erabiliz liseri-zelulen lisosomen egitura
kuantifikatu zen (Cajaraville et al., 1995b;
147