MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Emaitzak eta eztabaida<br />
berberak erabiliz (7 µm), liseri-zelulen (Vv DIG ) eta<br />
zelula basofilikoen (Vv BAS ) dentsitate<br />
bolumetrikoak kuantifikatzeko prozedura<br />
estereologikoa aplikatu zen. Horretarako<br />
kontaketak lagin bakoitzean azarez aukeratutako<br />
zelai batetan egin ziren kontaketak guztira talde<br />
esperimental bakoitzeko 10 kontaketak burutuz.<br />
Analisi estereologikoak burutzeko Nikon Optiphot<br />
mikroskopio bati atxiki zegoen irudi-hodi bat erabili<br />
zen (amaierako handipena x670). Vv DIG eta<br />
Vv BAS kalkulatzeko Weibel gratikula<br />
(multipurpouse test system M-168; Weibel, 1979)<br />
erabili zen eta liseri-zelula zein zelula basofilikotan<br />
eroritako puntuak kuantifikatu ziren eta kalkuluak<br />
Delesse-ren printzipioen arabera gauzatu ziren<br />
(Weibel, 1979).<br />
Liseri-zelula eta zelula basofilikoen<br />
bolumenaren estimazio absolutuak dentsitate<br />
bolumetrikoen datuetan oinarrituz burutu ziren.<br />
Liseri-zelulek eta zelula basofilikoek betetzen zuten<br />
bolumena (V DIG = Vv DIG x 17.8 x 10 6 µm 3 ; V BAS<br />
= Vv BAS x 17.8 x 10 6 µm 3 ) arbitrarioki<br />
aukeratutako liseri-guruinaren bolumen batekiko<br />
kalkulatu zen (17.8 x 10 6 µm 3 gutxi gorabehera).<br />
Bolumen hori kalkulu estereologikoak egiteko<br />
erabilitako Weibel gratikularen (356000 µm 2 )<br />
arbitrarioki aukeratutako 50 µm-ko lodierako<br />
ebakidura bati dagokio. Lodiera hori zelula<br />
basofilikorik handiena guztiz barneratua egotea<br />
ahalbidetzen du.<br />
Ondoren, liseri-guruineko zati arbitrario horretan<br />
liseri-zelula eta zelula basofilikoen kopurua<br />
kalkulatzeko, liseri-zelulek tamaina konstantea<br />
zutela onartu zen (talde esperimental<br />
146<br />
desberdinetan egindako behaketa mikroskopikoek<br />
liseri-zelulen altueran aldaketa txikiak erakusten<br />
dituzte, 30-33 µm, kalibrea konstante mantendu<br />
zelarik, 6-8 µm), eta zelula basofilikoen tamainen<br />
estimazio errealak aldez aurretik azaldu bezala egin<br />
ziren.<br />
PCNA immunohistokimika<br />
Ebakiak (3-4 µm-ko lodiera) mikrotomo batean<br />
lortu eta aldez aurretik (3-amino propil<br />
trietoxisilanoz) silanizatutako portaobjektuetan jazo<br />
ziren. Ondoren, laginak xilenoz desparafinatu ziren,<br />
beheranzko graduazioko etanolezko bainu-serie<br />
batean hidratatu eta fosfato indargetzaile salinoz<br />
(PBS; ingeleraz, phosphate-buffered saline) garbitu<br />
ziren. Peroxidasa jarduera endogenoa ekiditeko,<br />
ebakiak %3 zuen H 2 O 2 an inkubatu ziren 5 minutuz,<br />
eta berriro PBS-az garbitu ziren. Ebakiak,<br />
Vectastain Elite ABC Kit-ak (Vector Laboratories,<br />
Burlingame, Kalifornia, Amerikako Estatu Batuak)<br />
hornitutako suero blokeatzailean 30 minutuz<br />
inkubatu ziren giro-tenperaturan, eta berriro ere<br />
PBS-an garbitu ziren. Gero, ebakiak PCNAren<br />
aurkako antigorputz espezifikoan (PC10, 1:1500<br />
PBSan) inkubatu ziren. Laginak PBS-az garbitu<br />
ondoren, Vectastain Elite ABC Kit-aren bitartez eta<br />
abidina-biotina entzima-konplexua erabiliz<br />
antigorputza ikustarazi zen. Laburki, ebakiak, PBS-<br />
an diluitutako saguaren aurkako zaldiaren IgG<br />
antigorputz sekundario biotinilatuan inkubatu ziren,<br />
30 minutuz, eta PBS-an garbitu. Peroxidasa<br />
jarduera 3,3´-diaminobenzidina tetrahidrokloridoa<br />
(DAB) eta %0.03 H 2 O 2 zuen PBS indargetzailea<br />
erabiliz ikustarazi zen. Azkenik, ebakiak
Change language