MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Emaitzak eta eztabaida<br />
(PBS; ingeleraz, Phosphate-Buffered Saline)<br />
garbitu ziren. Peroxidasa jarduera endogenoa<br />
ekiditeko, ebakiak %3 zuen H 2 O 2 -an inkubatu ziren<br />
5 minutuz, eta berriro PBSz garbitu ziren. DNA, 0.1<br />
N HCl-ez desnaturalizatu zen ordu batez, 37°C-tan.<br />
Ebakiak, Vectastain Elite ABC Kit-ak (Vector<br />
Laboratories, Burlingame, California, Amerikako<br />
Estatu Batuak) hornitutako suero blokeatzailean<br />
ordu batez inkubatu ziren giro-tenperaturan eta<br />
berriro ere PBSz garbitu ziren. Gero, ebakiak<br />
BrdUren aurkako antigorputz espezifikoan (Roche,<br />
Basilea, Suitza; %0.1 bovine serum albumine zuen<br />
PBSan 1:10 diluitua) inkubatu ziren. Laginak PBSz<br />
garbitu ziren, eta ondoren, Vectastain Elite ABC Kit-<br />
aren bitartez, abidina-biotina entzima-konplexua<br />
erabiliz antigorputza ikustarazi zen. Laburki,<br />
ebakiak, PBSn diluitutako saguaren aurkako<br />
zaldiaren IgG antigorputz sekundario biotinilatuan<br />
inkubatu ziren, 30 minutuz, eta ondoren PBSn<br />
garbitu ziren. Peroxidasa jarduera ikustarazteko<br />
kromogenoaren disoluzioa (3-amino-9-<br />
etilokarbazola, %0.015 H 2 O 2 zuen sodio azetato<br />
indargetzailean -pH 5.2- disolbatua) erabili zen.<br />
Azkenik, ebakiak hematoxilinaz kontrastatu ziren<br />
(10 s), dabiluretan garbitu eta Kaiser gelatina<br />
glizerolatuan (Merck & Co., Inc, Whitehouse<br />
Station, New Jersey, Amerikako Estatu Batuak)<br />
muntatu ziren. Mikrografiak, Olympus BX50<br />
(Olympus Tokio Japonia) mikroskopioari atxiki<br />
zegoen Olympus PM20 argazki-kameraz erdietsi<br />
ziren.<br />
108<br />
Zelula BrdU-positiboen kuantifikazioa<br />
Zelula BrdU-positiboen kuantifikazioa, argi-<br />
mikroskopioan kontateka zuzenaren bidez burutu<br />
zen. Liseri-epitelioan zelula BrdU-positiboen<br />
proportzioa antzemateko asmoz, 1000 zelula<br />
zenbatu ziren lagin bakoitzean, beste ikerketetan<br />
erabilitako lagin-tamainaren arabera (Okudela et<br />
al., 1999). Aldez aurretik egindako behaketa<br />
histologikoek, liseri-epitelioaren tubulu moduko<br />
ebakidura bakoitzean gutxienez 20-30 zelula<br />
daudela erakutsi zuten. Hori dela eta, eguneroko<br />
lana errazteko asmoz, zelula BrdU-positiboen<br />
zenbaketa aleatorioki hautatutako 40 tubulu<br />
moduko ebakiduretan burutu zen (800-1200 zelula)<br />
liseri-guruin bakoitzean. Halaber, eskuarki konduktu<br />
sekundarioen ebakidura bakoitzean 70-90 zelulak<br />
agertzen direnez gero, zelula BrdU-positiboen<br />
zenbaketa 10 konduktu sekundarioen ebakiduretan<br />
burutu zen (700-900 zelula). Horrek, laginaren<br />
tamaina egoki lortzearen eta konduktu<br />
sekundarioen zeharkako ebakidurak lortzearen<br />
zailtasunaren arteko konpromisozko erabakia<br />
suposatu zuen. Datuak adierazteko momentuan<br />
‰--ra pasatu ziren. Urdailean, kontaketa trantsektu<br />
bat eginez burutu zen, eta guztira 200 zelula<br />
zenbatu ziren epitelioan barrena. Zelula-kopuru<br />
baxuago hori, urdailean jarduera proliferatzailea<br />
oso handia dela egiaztatu ondoren hautatu zen.<br />
Datuak kasu honetan ere ‰-ko balioetan eman<br />
dira, aurrekoekin konparagarriak izan ahal izateko.<br />
Analisi estatistikoak, SPSS/PC+ programa<br />
erabiliz burutu ziren (SPSS, Microsoft). Denboraren<br />
eragina ikusi ahal izateko, faktore bateko ANOVA<br />
burutu zen, eta konparaketa anitzak eginez<br />
parekatutako batezbestekoen artean<br />
desberdintasun esangarriak (p
Change language