MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
MOLUSKUEN LISERI-GURUINEKO EPITELIOAREN ... - Euskara
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
MATERIAL ETA METODOAK<br />
Erreaktibo kimikoak<br />
Erabilitako erreaktibo kimiko guztiak maila<br />
analitikokoak eta Sigma-Aldrich (St. Louis,<br />
Missouri, Amerikako Estatu Batuak), merkatal-<br />
etxekoak dira besterik agertu ezean.<br />
Laginak eta prozedura esperimentala<br />
Gutxi gorabehera 35-45 mm-ko luzerako<br />
maskorra zuten mareazpiko M. galloprovincialis<br />
(Lmk) muskuiluak Plentzian (Bizkaiko Golkoa<br />
43°24'I, 2°56'M) hartu ziren, uztailan eta goizerdiko<br />
itsasbeheran (10:12 a.m.). Laginketa mareazpiko<br />
muskuiluetara mugatu zen, itsasaldien zikloa eta<br />
fotoperiodoaren arteko elkarrekintza ekiditeko<br />
asmoz. Muskuiluak (n=80) laborategira garraiatu<br />
ziren eta 15 l-ko polietilenozko akuario batean<br />
mantendu ziren 15°C-tan eta etengabeko<br />
aireztapenaz. Itsas-ura argi ultramorea erabiliz<br />
esterilizatu zen, eta karbono aktiboz zein beirazko<br />
zuntzetan zehar iragazi egin zen; esperimentuak<br />
iraun bitartean itsas-ura ordezkatu ez zelarik.<br />
Muskuiluei, ornogabe itsastarrentzako jaki<br />
komertziala (Marine Invertebrate Diet, Carolina,<br />
Burlington, North Carolina, Amerikako Estatu<br />
Batuak) egunero eman zitzaien, goizeko 12:00-tan.<br />
Baldintza horietan, muskuiluak BrdU-tratamendu<br />
pean 2 egunez mantendu ziren. Hasieran, itsas-<br />
uretan 4 mg BrdU/l-ko pultsua aplikatu zitzaien, eta<br />
gerora 2 mg/l-ko pultsuak 4 orduro aplikatu ziren,<br />
maila zitotoxikoetara heltzeke BrdUren<br />
eskuragarrita-suna etengabe ziurtatu ahal izateko.<br />
Horrela, saiakuntza-denboran zehar BrdUren<br />
Zelulen proliferazioaren aldamolde zirkamareala muskuiluaren liseri-guruinean<br />
galerarik gertatuko ez balitz ere, uretan metatutako<br />
gehiegizko BrdUren kontzentrazioa 20 mg/l baino<br />
baxuagoa izango litzateke. Ornogabe itsastarrekin<br />
egindako pultsu-esperimentuetan BrdUren<br />
kontzentrazioak 500 mg/l-ko bezain altuak erabili<br />
dituzte beste ikertzaileek (Candia Carnevali et al.,<br />
1997; Goergen et al., 2002). Hala ere, guk BrdU<br />
kontzentrazio askoz baxuagoa aplikatzea erabaki<br />
genuen honako arrazoi hauengatik: (1) muskuiluak<br />
laborategian egoera egokian mantentzeko ur<br />
bolumen handia ezinbestekoa zen, (2) 20-40 mg<br />
BrdU/l baino kontzentrazio altuagoek, muskuiluen<br />
ehunen zelulen berriztapena inhibi dezakete<br />
(Martínez-Expósito et al., 1994); eta (3) aurreneko<br />
ikerketek, 4 mg BrdU/l-ko kontzentrazioa liseri-<br />
guruineko epitelioan BrdU-markaketa konspikuoa<br />
erdiesteko nahikoa dela adierazi baitziguten.<br />
Muskuiluak denbora-tarte desberdinetan sakrifikatu<br />
ziren, BrdU-markaketaren fluktuazio-erritmoak<br />
identifikatu ahal izateko.<br />
Zelula BrdU-positiboen immunohistokimika<br />
Liseri-guruinaren zati txikiak Carnoy fixatzailean<br />
(%60 etanol absolutua, %30 kloroformoa eta %10<br />
azido azetikoa) fixatu ziren ordu batez 4°C-tan.<br />
Fixatu ondoren, laginak goranzko graduazioko<br />
etanolezko bainu-serie batean deshidratatu ziren<br />
eta parafinan inkluditu ziren 60°C-tan. Ebakiak (3-<br />
4 µm-ko lodiera) American Optical mikrotomoan<br />
ebaki ziren eta aldez aurretik (3-amino propil<br />
trietoxisilanoz) silanizatutako portaobjektuetan jaso<br />
ziren. Ondoren, laginak xilenoz desparafinatu ziren,<br />
beheranzko graduazioko etanolezko bainu-serie<br />
batean hidratatu eta fosfato indargetzaile salinoz<br />
107
Change language