Glicotest HbA1c - Gdsrl.com

Glicotest HbA1c
REF SA5424 00 - 1x30 + 1x9,5 + 1x0,5 ml
INTENDED USE
AMS Glicotest HbA1c is intended for the quantitative in vitro
determination of haemoglobin A1c in human whole blood using the AMS
Sat-450 Chemistry System.
SUMMARY
Glycohemoglobin is produced by non-enzymatic addition of glucose to
amino groups in hemoglobin. HbA1c refers to glucose-modified
hemoglobin A (HbA) specifically at N-terminal valine residues of
hemoglobin beta chains.
This process reflects the average exposure of hemoglobin to glucose
over an extended period.
In diabetic subjects hemoglobin A1c fraction is found to be elevated 2-3
fold over the levels found in normal individuals. Several investigators
have recommended that Hemoglobin A1c serve as an indicator of
metabolic control of the diabetic, since Hemoglobin A1c levels approach
normal values for diabetics in metabolic control; in fact HbA1c is a good
indicator of glycemic control in the preceding 2-3 months. HbA1c test is
used both as an index of mean glycemia and as measure of risk for the
development of diabetes complications (1-4) .
Currently, the HbA1c is recommended for patients with diabetes every
2-3 months as part of the patient Diabetes management program.
METHOD PRINCIPLE
This method utilizes the interaction of antigen and antibody to directly
determine the HbA1c in whole blood. Total hemoglobin and HbA1c have
the same unspecific absorption rate to latex particles. When mouse
antihuman HbA1c monoclonal antibody is added (RB), latex-HbA1cmouse
anti human HbA1c antibody complex is formed. Agglutination is
formed when goat anti-mouse IgG polyclonal antibody interacts with
the monoclonal antibody. The amount of agglutination is proportional to
the amount of HbA1c absorbed on to the surface of latex particles. The
amount of agglutination is measured as absorbance. The HbA1c value is
obtained from a calibration curve.
COMPOSITION
Reagent 1
Latex 0.13%
Glycine buffer 20 mmol/l
Reagent 2A
Glycine buffer 80 mmol/l
Reagent 2B
Anti-HbA1c 0.05 mg/ml
(Mouse anti-human HbA1c monoclonal antibody)
Anti-IgG 0.08 mg/dl
(Goat anti-mouse IgG polyclonal antibody)
Reagent C (lysing reagent)
NaN3
Detergents and stabilizers
< 0.095%
Preparation
The Reagent 1 is ready to use. Prepare the Reagent 2 by adding the
content of one vial of Reagent 2B into one vial of Reagent 2A. Mix well
avoiding foam formation.
Storage and stability
Store at 2-8 °C. Do not freeze the reagents! The reagents are stable up
to the expiry date stated on the label when kept in closed vial.
On board stability: 30 days
SAMPLES
Anti coagulated whole blood.
Hemoglobin A1c in whole blood collected with EDTA is stable for one
week at 2-8 °C. Do not freeze samples! This may lead to a natural
hemolysis. If necessary, store lysed samples at -20 °C instead of whole
blood.
Hemolysate preparation
1. Dispense 1000 µl of hemolysis reagent (Reagent C) into labeled
sample cups. Plastic or glass tubes of appropriate size are
acceptable.
2. Prior to testing, whole blood samples should be mixed by gentle
inversion at least 5 times to resuspend settled erythrocytes.
3. Place 20 µl of well-mixed, fully resuspended whole blood into the
appropriately labeled hemolysis reagent tube. Mix well the solution.
4. Allow to stand for 10 minutes or until complete lysis is evident.
5. Mix well again.
6. The calibrators and controls should be treated exactly as patient
samples.
Specimen collection / Preanalytical factors
It is recommended that specimen collection should be carried out in
accordance with NCCLS protocol H11-A3.
INSTRUMENT TEST PROCEDURE
For the assay procedure refer to the Application Manual and to the
instrument Operator Manual.
CALIBRATION
Use Glicotest HbA1c Calibrator (REF GD5426 00). See calibrator insert
sheet for lot specific concentration and traceability.
Recalibrate the instrument every 15 days or when a new lot or new
bottle of reagent is used.
QUALITY CONTROL
Normal and abnormal controls such as Enzymatic HbA1c Controls (REF
GD5422 00) are recommended. Check that the values obtained are
within the reference range provided
Refer to Westgard et al. (3) for identification and resolution of out of
control situations.
CALCULATION OF RESULTS
Refer to the Application Manual and to the instrument Operator Manual.
Conversion factor
Historically, haemoglobin A1c has been reported as % of total
haemoglobin (notation used by NGSP, JDS/DSCC and Mono-S
standardizations).
Since June 2011, the way HbA1c values are reported has switched from
a percendage to a measurement in mmol/mol, due to the introduction
of a new IFCC standardization.
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To make sense of the new units and compare these with old units and
vice versa, apply the below reported equations.
National DCM From IFCC to DCM
NGSP (USA) NGSP = 0.09148 IFCC + 2.152
JDS/JSCC (Japan) JDS = 0.09274 IFCC +1 .724
Mono-S (Sweden) Mono-S = 0.09890 IFCC + 0.884
National DCM From DCM to IFCC
NGSP (USA) IFCC = 10.93 NGSP - 23.50
JDS/JSCC (Japan) IFCC = 10.78 JDS - 18.59
Mono-S (Sweden) IFCC = 10.11 Mono-S - 8.94
REFERENCE INTERVALS (1)
IFCC / DCM
Upper level of nondiabetic
reference
range
Clinical Condition
ADA* target for
patients with
diabetes
IFCC 43 mmol/mol 53 mmol/mol
NGSP 6.1% 7.0%
JDS/JSCC 5.7% 6.6%
Mono-S 5.1% 6.1%
ADA*: American Diabetes Association
Each laboratory should establish reference ranges for its own patients
population.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Precision
Representative data from studies using CLSI protocol NCCLS EP5-A2
are summarized below.
Control Level 1 Level 2
Number of Observations N 80 80
Number of Runs N 40 40
Mean mmol/mol 78 106
Within Run %CV 1,6 1,3
Total %CV 5,1 3,3
Linearity
The assay is linear within the calibration limits.
Minimum Detection Limit
The minimum detection limit for the assay, established using CLSI
protocol NCCLS EP17-A, is 2.0 mmol/mol (2.3 %).
Method Comparison
Correlation studies were performed using CLSI protocol NCCLS EP9-A2.
Serum results from this assay on Sat-450 were compared with those
from a commercially available analogous system. Results were as
follows: N = 60, y = 1,102x - 8,25 mmol/mol, r = 0,975.
Met. SA542400.0 Eng
Ed. 10/2012

Glicotest HbA1c
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Limitations / Interfering Substances
1. Serum components at the following concentrations do not interfere
with this analytical method:
Bilirubin 50 mg/dl
Ascorbic Acid 50 mg/dl
Triglycerides 2000 mg/dl
Carbamylated hemoglobin 7.5 mmol/l
Acetylated hemoglobin 5.0 mmol/l
2. It has been reported that results may be inconsistent in patients
who have the following condition: opiate addiction, lead poisoning,
alcoholism, ingest large doses of aspirin.
It has been reported that elevated levels of HbF may lead to
underestimation of HA1c and that uremia does not interfere with
HbA1c determination by immunoassay.
3. It has been reported that Hemoglobin variants HbS and HbA2 are
not detected by immunoassay, leading to possible inaccurate
determination. Also, it has been reported that labile intermediates
(Schiff base) are not detected and do not interfere with HbA1c
determination by immunoassay.
4. Other very rare variants of hemoglobin (e.g. HbE) have not been
assessed
For a comprehensive review of interfering substances, refer to the
publication by Young (2) .
PRECAUTIONS AND WARNINGS
The reagents contain inactive components such as preservatives
(Sodium azide or others), surfactants etc. The total concentration of
these components is lower than the limits reported by 67/548/EEC and
88/379/EEC directives about classification, packaging and labelling of
dangerous substances. However, the reagents should be handled with
caution, avoiding swallowing and contact with skin, eyes and mucous
membranes. The use of laboratory reagents according to good
laboratory practice is recommended.
Waste Management
Please refer to local legal requirements.
BIBLIOGRAPHY
1. American Diabetes Association (ADA). Clinical practice
recommendation: standards of medical care for patients with
diabetes mellitus. Diab Care 22 (supp): S32-41 (1999).
2. Young D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC
Press, Washington, D.C., 1990.
3. Westgard J., and Barry P., Cost- Effective Quality Control:
Managing the Quality and Productivity of Analytical Processes,
AACC Press, Washington, D.C., 1986.
4. Trivelli, L.A., Ranney, H.M. and Lai, H.T., New Eng. J. Med.
284,353 (1971).
5. Gonen. B., and Rubenstein, A.H. Diabetologia 15,1 (1978).
6. Gabbay, K.H., Hasty K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F.,
and Gallop, P.M., J. Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).
7. Bates, H.M., Lab.Mang., Vol 16 (Jan 1978).
8. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B.
Saunders Company, p.794-795 (1999).
9. Corielo, A., et al., Diabetologia 22, p.379 (1962).
10. Goldstein, D.E., et all. Clin. Chem. 32, pp. 364-370 (1985).
11. Fluckinger, R., et al., Med Intelligence 304 pp. 823-827 (1981).
12. Nathan, D.M., et al., Clin. Chem. 29, pp.466-469 (1983).
13. Engbaek, F., et al. Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
14. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations
(Position Statement), Diabetes Care 24 (suppl.1): S33-S55,
(2001).
15. NCCLS Document, “Procedures for the collection of arterial
blood specimens”, Approved Standard, 3rd Ed. (1999).
16. EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to
technical progress the principles of good laboratory practice as
specified in Council Directive 87/18/EEC.
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Ed. 10/2012

Glicotest HbA1c
REF SA5424 00 - 1x30 + 1x9,5 + 1x0,5 ml
USO
Il kit AMS Glicotest HbA1c viene impiegato per la determinazione
quantitative in vitro della emoglobina A1c nel sangue intero umano con
sistema AMS Sat-450.
SOMMARIO
L’emoglobina glicata è prodotta dall’aggiunta non enzimatica di glucosio
ai gruppi amminici presenti nell’emoglobina. La frazione HbA1c si
riferisce in modo specifico ai residui N-terminali della valina nelle catene
beta dell’emoglobina A (HbA).
Questo processo riflette l’esposizione media dell’emoglobina al glucosio
nel lungo periodo.
Nei soggetti diabetici la frazione A1c dell’emoglobina è 2-3 volte più
elevata rispetto a soggetti non diabetici. Parecchi studi hanno
dimostrato che il dosaggio dell’emoglobina glicata è un importante
indicatore del controllo metabolico dei diabetici, poiché i livelli di
glicoemoglobina si approssimano a quelli normali in soggetti sotto
controllo metabolico; difatti l’HbA1c è un ottimo indicatore del controllo
glicemico nei 2-3 mesi precedenti al dosaggio.
Il dosaggio dell’HbA1c è sfruttato sia come indice del valore medio della
glicemia, sia come misura del rischio di insorgenza di complicanze
diabetiche (1-4) .
Allo stato dell’arte, il dosaggio dell’HbA1c è raccomandato ai pazienti
diabetici ogni 2-3 mesi come parte del protocollo terapeutico.
PRINCIPIO
Questa procedura utilizza una reazione tra antigeni ed anticorpi per
determinare direttamente la concentrazione di HbA1c nel sangue intero
emolizzato.
L’emoglobina totale e l’emoglobina glicosilata HbA1c si legano alle
particelle di latex alla stessa concentrazione (come rapporto) presente
nell’emolizzato.
Quando alla reazione viene aggiunto il reagente RB, l’anticorpo
monoclonale di topo anti HbA1c umana si lega a HbA1c.
L’agglutinazione rilevabile strumentalmente si forma quando questo
anticorpo reagisce con l’anticorpo policlonale anti IgG di topo.
L’agglutinazione è proporzionale alla concentrazione di HbA1c presente
nel campione ed è misurabile in assorbanza. Attraverso una curva di
calibrazione si ottiene il valore di HbA1c del campione.
COMPOSIZIONE
Reagente 1
Lattice 0.13%
Tampone glicina 20 mmol/l
Reagente 2A
Tampone glicina 80 mmol/l
Reagente 2B
Anti-HbA1c 0.05 mg/ml
(Anticorpo monoclonale murino anti HbA1c umana)
Anti-IgG 0.08 mg/dl
(Anticorpo policlonale di capra anti IgG di topo)
Reagente C (reagente emolizzante)
NaN3
Detergenti e stabilizzanti
< 0.095%
Preparazione
Il reagente 1 è pronto all’uso. Preparare il reagente 2 versando il
contenuto di un flacone di reagente 2B in un flacone di reagente 2A.
Miscelare bene evitando la formazione di schiuma.
Conservazione e Stabilità
Conservare a 2-8 °C. Non congelare i reattivi! I reattivi sono stabili fino
alla data di scadenza riportata in etichetta, se conservati in flacone
chiuso.
Stabilità a bordo dello strumento: 30 giorni
CAMPIONI
Sangue intero anticoagulato.
L’emoglobina A1c in campioni di sangue intero EDTA è stabile per una
settimana a 2-8 °C. Non congelare i campioni! Questo potrebbe
determinare una lisi naturale. Se necessario, conservare i campioni
lisati a -20 °C al posto del sangue intero.
Preparazione dell’emolisato
1. Dispensare 1000 µl di reattivo emolizzante (RC) in coppette porta
campione adeguatamente identificate. Provette di plastica o di vetro
sono accettabili.
2. Prima del dosaggio, i campioni di sangue intero devono essere
miscelati invertendo delicatamente la provetta per almeno 5 volte
per risospendere gli eritrociti sedimentati.
3. Dispensare 20 µl di sangue intero ben miscelato e omogeneo nella
rispettiva coppetta porta campione. Miscelare bene la soluzione.
4. Attendere 10 minuti o fino a che la completa emolisi sia evidente.
5. Miscelare nuovamente.
6. I calibratori e i controlli devono essere trattati esattamente come i
campioni dei pazienti.
Raccolta dei Campioni / Fattori Preanalitici
Si raccomanda di effettuare la raccolta dei campioni in conformità al
Protocollo NCCLS H11-A3.
PROCEDURA DI ANALISI
Per la procedura di analisi fare riferimento all’Application Manual e al
Manuale dell’Operatore dello strumento.
CALIBRAZIONE
Utilizzare Glicotest HbA1c Calibrator (REF GD5426 00). Riferirsi
all’inserto del calibratore per la concentrazione specifica del lotto e la
tracciabilità.
Ricalibrare lo strumento ogni 15 giorni o quando viene utilizzato un
nuovo lotto o una nuova bottiglia di reagente.
CONTROLLO DI QUALITA’
. Si consiglia l’uso di controlli Normale e Patologico come Enzymatic
HbA1c Controls (REF GD5422 00). Verificare che il valore ottenuto sia
all’interno degli intervalli di accettabilità forniti
Far riferimento a Westgard et al. (3) per l’identificazione e la risoluzione
di problematiche legate ai controlli fuori dai limiti.
CALCOLO DEI RISULTATI
Riferirsi all’Application Manual e al Manuale dell’Operatore dello
strumento.
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Fattori di Conversione
Storicamente, l’emoglobina A1c veniva riportata come % della
emoglobina totale (notazione adottata dalle standardizzazioni NGSP,
JDS/DSCC e Mono-S).
A partire da giugno 2011, il sistema di espressione dei risultati è
cambiato dalla percentuale alla misura in mmol/mol, a causa
dell’introduzione di una nuova standardizzazione IFCC.
Per potere meglio interpretare i nuovi risultati e confrontare la nuove
unità con quelle vecchie, è necessario applicare le equazioni sotto
riportate.
DCM Da IFCC a DCM
NGSP (USA) NGSP = 0.09148 IFCC + 2.152
JDS/JSCC (Japan) JDS = 0.09274 IFCC +1 .724
Mono-S (Sweden) Mono-S = 0.09890 IFCC + 0.884
DCM Da DCM a IFCC
NGSP (USA) IFCC = 10.93 NGSP - 23.50
JDS/JSCC (Japan) IFCC = 10.78 JDS - 18.59
Mono-S (Sweden) IFCC = 10.11 Mono-S - 8.94
VALORI DI RIFERIMENTO (1)
IFCC / DCM
Estremo superiore
per pazienti non
diabetici
Condizione Clinica
target ADA per
pazienti diabetici
IFCC 43 mmol/mol 53 mmol/mol
NGSP 6.1% 7.0%
JDS/JSCC 5.7% 6.6%
Mono-S 5.1% 6.1%
ADA*: American Diabetes Association
Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire i propri valori normali in
funzione della popolazione su cui opera.
PRESTAZIONI ANALITICHE
Precisione
Dati rappresentativi dello studio secondo il protocollo CLSI NCCLS
EP5-A2 sono sotto riportati.
Controllo Livello 1 Livello 2
Numero di Osservazioni N 80 80
Numero di Prove N 40 40
Media mmol/mol 78 106
Nella Corsa %CV 1,6 1,3
Totale %CV 5,1 3,3
Linearità
Il dosaggio è lineare nell’intervallo di calibrazione.
Limite Minimo di Rivelabilità
Il limite minimo di rilevabilità, stabilito tramite il protocollo CLSI NCCLS
EP17-A, è 2.0 mmol/mol (2.3 %).
Met. SA542400.0 Ita
Ed. 10/2012

Glicotest HbA1c
REF SA5424 00 - 1x30 + 1x9,5 + 1x0,5 ml
Comparazione fra Metodi
Studi di correlazione sono stati effettuati secondo il protocollo CLSI
NCCLS EP9-A2. I risultati dei sieri di questo dosaggio su Sat-450 sono
stati confrontati con un sistema analogo presente in commercio. I
risultati sono stati i seguenti: N = 60, y = 1,102x - 8,25 mmol/mol, r =
0,975.
Limitazioni / Sostanze Interferenti
1. Componenti serici con i seguenti valori non interferiscono con
questo metodo analitico:
Bilirubina 50 mg/dl
Acido Ascorbico 50 mg/dl
Trigliceridi 2000 mg/dl
Emoglobina carbamilata 7.5 mmol/l
Emoglobina acetilata 5.0 mmol/l
2. Si possono ottenere risultati non attendibili in pazienti con
tossicomania oppioide, saturnismo, alcolismo o che hanno ingerito
quantità elevate di acido acetil salicilico (aspirina).
3. E’ stato riscontrato che livelli di HbF elevati possono portare ad
una sottostima di HbA1c e che l’uremia non interferisce con la
determinazione di HbA1c con metodica immunologia.
4. È stato riscontrato che le varianti emoglobiniche HbS e HbA2 non
sono determinabili con metodiche immunologiche in quanto non
danno risultati affidabili. Le basi di Schiff non sono rilevate da
questo metodo quindi non interferiscono con la determinazione di
HbA1c.
5. Non sono state accertate altre rare varianti di Emoglobina Hbe.
Per una panoramica completa sulle sostanze interferenti si rimanda alla
pubblicazione di Young (2) .
PRECAUZIONI E AVVERTENZE
I reagenti contengono componenti inattivi, quali i conservanti (Sodio
azide o altri), tensioattivi ecc. La concentrazione totale di questi
componenti è inferiore ai limiti riportati dalle direttive CEE 67/548/EEC
e 88/379/EEC sulla classificazione, l’imballaggio ed etichettatura delle
sostanze pericolose. Tuttavia i reagenti devono essere trattati con
cautela, evitandone l’ingestione, il contatto con la pelle, gli occhi e le
membrane mucose.
Nell’utilizzo dei reagenti di laboratorio si raccomanda di seguire le
norme di buona pratica di laboratorio.
Gestione dei Rifiuti
Attenersi alle norme locali per quanto riguarda lo smaltimento dei
reagenti.
BIBLIOGRAFIA
1. American Diabetes Association (ADA). Clinical practice
recommendation: standards of medical care for patients with
diabetes mellitus. Diab Care 22 (supp): S32-41 (1999).
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(Position Statement), Diabetes Care 24 (suppl.1): S33-S55,
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blood specimens”, Approved Standard, 3rd Ed. (1999).
16. EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to
technical progress the principles of good laboratory practice as
specified in Council Directive 87/18/EEC.
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Via E. Barsanti 17/A | 00012 Guidonia (Roma) – Italia Via Galileo Galilei, 38 | Seggiano di Pioltello (MI) - Italia
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