Bilirubin Total - Gdsrl.com

Bilirubin Total
REF SA4231 00 - 6x15 + 1x4,5 ml
INTENDED USE
AMS Bilirubin Total is intended for the colorimetric quantitative in vitro
determination of total bilirubin in human serum and plasma using the
AMS Sat-450 Chemistry System.
SUMMARY
A reaction in which bilirubin is coupled with diazotized sulfanilic acid (ρdiazobenzenesulfonic
acid) to produce an azo dye was first described by
Ehrlich in 1884. The color of this derivative is pink in an acid medium
and blue in an alkaline one. The measurement of the blue form has
been more popular because of greater sensitivity.
Two types of serum bilirubin can be distinguished and quantitated by
the diazo reaction. The direct form, consists of conjugated, watersoluble
derivatives and reacts in the absence of an accelerating or
solubilizing agent. The indirect form, consists of free, unconjugated
bilirubin bound to serum albumin. This form only reacts in the presence
of an accelerating agent. The sum of these two forms is termed total
bilirubin. The differentiation between direct and indirect is important in
diagnosing causes of hyperbilirubinemia.
METHOD PRINCIPLE
In the present method (Jendrassik modified) total Bilirubin, in the
presence of Diazosulphanilic acid, forms a coloured compound
(Azobilirubin) which absorbs at 546 nm. The colour intensity is
proportional to the total Bilirubin concentration present in the sample.
COMPOSITION
Reagent 1
Sulphanilic acid 6 mmol/l
DMSO 7 mol/l
Surfactants and preservatives
Reagent 2
Sodium nitrite 20 mmol/l
Preparation
Prepare the Working Solution by adding 750 µl of Reagent 2 into one
vial of Reagent 1. Mix well.
Storage and stability
Store at room temperature (15-25 °C). Do not freeze the reagents! The
reagents are stable up to the expiry date stated on the label when kept
in closed vial.
On board stability of Working Solution: 7 days
SAMPLES
Fresh unhemolysed serum or plasma. Serum samples must be assayed
within 2 hours.
Sample turbidity due to macromolecular aggregates may interfere. In
this case, centrifuge or filtration through a 0.2 µ membrane filter is
suggested. Avoid light exposure.
Specimen collection / Preanalytical factors
It is recommended that specimen collection should be carried out in
accordance with NCCLS protocol H11-A3.
INSTRUMENT TEST PROCEDURE
For the assay procedure refer to the Application Manual and to the
instrument Operator Manual.
CALIBRATION
Use GD-Cal (REF GD8577 00). See calibrator insert sheet for lot specific
concentration and traceability.
Recalibrate the instrument every 24 hours or when a new lot or new
bottle of reagent is used.
QUALITY CONTROL
It is recommended to use controls with known uric acid concentration.
Check that the values obtained are within the reference range provided.
Normal and abnormal controls such as GD-Norm (REF GD8580 00) and
GD-Path (REF GD8582 00) are recommended.
Refer to Westgard et al. (3) for identification and resolution of out of
control situations.
CALCULATION OF RESULTS
Refer to the Application Manual and to the instrument Operator Manual.
Conversion factor
Bilirubin [mg/dl] x 17,1 = Bilirubin [µmol/l].
REFERENCE INTERVALS (1)
Serum:
Males/Femalers: 0,2 - 1,2 mg/dl 3 - 20 µmol/l
Each laboratory should establish reference ranges for its own
patients population.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Precision
Representative data from studies using CLSI protocol NCCLS EP5-A2
are summarized below.
Control Level 1 Level 2
Number of Observations N 76* 76*
Number of Runs N 38 38
Mean mg/dl 0,65 3,93
Within Run %CV 1,4 0,6
Total %CV 3,0 2,4
*Outliers not included in statistical calculation
Linearity
The linearity range, established using CLSI protocol NCCLS EP6-A is
0,1 - 27,5 mg/dl (1,7 - 470,3 µmol/l).
Minimum Detection Limit
The minimum detection limit for the assay, established using CLSI
protocol NCCLS EP17-A, is 0,1 mg/dl (1,7 µmol/l).
Method Comparison
Correlation studies were performed using CLSI protocol NCCLS EP9-A2.
Serum results from this assay on Sat-450 were compared with those
from a commercially available analogous system. Results were as
follows: N = 42, y = 0,993x - 0,04 mg/dl, r = 0,999.
AMS S.p.A. – Registered Office and Plant Diagnostics Manufacturing
Via E. Barsanti 17/A | 00012 Guidonia (Rome) – Italy Via Galileo Galilei, 38 | Seggiano di Pioltello (MI) - Italy
Ph. +39 0774 354441 | Fax +39 0774 578035 Ph. +39 02 929189.1 | Fax +39 02 929189.39
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Limitations / Interfering Substances
No interferences have been observed from the following substances up
to the below reported concentration:
Hemoglobin > 500 mg/dl
Triglycerides > 2000 mg/dl
For a comprehensive review of interfering substances, refer to the
publication by Young (2) .
PRECAUTIONS AND WARNINGS
The reagents contain inactive components such as preservatives
(Sodium azide or others), surfactants etc. The total concentration of
these components is lower than the limits reported by 67/548/EEC and
88/379/EEC directives about classification, packaging and labelling of
dangerous substances. However, the reagents should be handled with
caution, avoiding swallowing and contact with skin, eyes and mucous
membranes. The use of laboratory reagents according to good
laboratory practice is recommended.
Waste Management
Please refer to local legal requirements.
BIBLIOGRAPHY
1. Gambino, S.R., et al, Bilirubin Assay (Revised), Commission on
Continuing Education, Am. Soc. of Clin. Path., Chicago, (1968).
2. Young D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC
Press, Washington, D.C., 1990.
3. Westgard J., and Barry P., Cost- Effective Quality Control: Managing
the Quality and Productivity of Analytical Processes, AACC Press,
Washington, D.C., 1986.
4. Henry J.B. Clinical Diagnosis and managements.
5. Jendrassik L., Grof P. Biochemistry 297, 81 (1938).
6. Schellong G., Wende U. Klin. Wschr. 38, 703 (1960)
7. NCCLS Document, “Procedures for the collection of arterial blood
specimens”, Approved Standard, 3rd Ed. (1999).
8. EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to
technical progress the principles of good laboratory practice as
specified in Council Directive 87/18/EEC
Met. SA423100.0 Eng
Ed. 10/2012

Bilirubina Totale
REF SA4231 00 - 6x15 + 1x4,5 ml
USO
Il kit AMS Bilirubina Totale viene impiegato per la determinazione
colorimetrica quantitative in vitro della bilirubina totale nel siero e
plasma umano con sistema AMS Sat-450.
SOMMARIO
Un dosaggio in cui la bilirubina reagisce con l’acido solfanilico
diazotizato (acido p-diazobenzenesulfonico) per produrre un composto
colorato è stata descritto per la prima volta nel 1884 da Ehrlich. Il
colore di questo derivato è rosa in ambiente acido e blu in ambiente
alcalino. La misura della forma blu si è diffusa particolarmente offrendo
una maggiore sensibilità.
Tramite la reazione di diazotazione è possibile distinguere due tipi di
bilirubina. La forma diretta è costituita da bilirubina coniugata a
composti che rendono solubile la bilirubina in ambiente acquoso
reagisce con il diazo in assenza di agenti acceleranti. La forma indiretta
è rappresentata dalla bilirubina libera, non-coniugata all’albumina;
quest’ultima reagisce solo in presenza di un agente accelerante
(solubilizzante). La somma delle due forme rappresenta la bilirubina
totale. La differenziazione delle due bilirubine è importante
nell’individuazione delle cause dell’iperbilirubinemia.
PRINCIPIO
Nel presente metodo (Jendrassik modificato) la Bilirubina totale, in
presenza di Acido sulfanilico diazotato, forma un complesso colorato
(Azobilirubina) che assorbe a 546 nm. L'intensità del colore è
proporzionale alla concentrazione di Bilirubina totale presente nel
campione.
COMPOSIZIONE
Reagente 1
Acido solfanilico 6 mmol/l
DMSO 7 mol/l
Detergenti e conservanti
Reagente 2
Sodio nitrito 20 mmol/l
Preparazione
Preparare la Soluzione di Lavoro aggiungendo 750 µl di Reagente 2 ad
un flacone di Reagente 1. Miscelare bene.
Conservazione e Stabilità
Conservare a temperatura ambiente (15-25 °C). Non congelare i
reattivi! I reattivi sono stabili fino alla data di scadenza riportata in
etichetta, se conservati in flacone chiuso.
Stabilità a bordo dello strumento della Soluzione di Lavoro: 7 giorni
CAMPIONI
Siero fresco non emolizzato o plasma. Il siero deve essere analizzato
entro 2 ore.
La torbidità del campione dovuta alla presenza di macromolecole può
interferire. In questo caso, si suggerisce la centrifugazione o la
filtrazione con filtri di membrana 0.2 µ. Evitare l'esposizione alla luce.
Raccolta dei Campioni / Fattori Preanalitici
Si raccomanda di effettuare la raccolta dei campioni in conformità al
Protocollo NCCLS H11-A3.
PROCEDURA DI ANALISI
Per la procedura di analisi fare riferimento all’Application Manual e al
Manuale dell’Operatore dello strumento.
CALIBRAZIONE
Utilizzare GD-Cal (REF GD8577 00). Riferirsi all’inserto del calibratore
per la concentrazione specifica del lotto e la tracciabilità.
Ricalibrare lo strumento ogni 24 ore o quando viene utilizzato un nuovo
lotto o una nuova bottiglia di reagente.
CONTROLLO DI QUALITA’
Si raccomanda l’uso di controlli a titolo noto di acido urico. Verificare
che il valore ottenuto sia all’interno degli intervalli di accettabilità
forniti. Si consiglia l’uso di controlli Normale e Patologico come GD-
Norm (REF GD8580 00) e GD-Path (REF GD8582 00).
Far riferimento a Westgard et al. (3) per l’identificazione e la risoluzione
di problematiche legate ai controlli fuori dai limiti.
CALCOLO DEI RISULTATI
Riferirsi all’Application Manual e al Manuale dell’Operatore dello
strumento.
Fattori di Conversione
Bilirubina [mg/dl] x 17,1 = Bilirubina [µmol/l].
INTERVALLO DI RIFERIMENTO (1)
Siero:
Uomini/Donne: 0,2 - 1,2 mg/dl 3 - 20 µmol/l
Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire i propri valori normali in
funzione della popolazione su cui opera.
PRESTAZIONI ANALITICHE
Precisione
Dati rappresentativi dello studio secondo il protocollo CLSI NCCLS
EP5-A2 sono sotto riportati.
Controllo Livello 1 Livello 2
Numero di Osservazioni N 76* 76*
Numero di Prove N 38 38
Media mg/dl 0,65 3,93
Nella Corsa %CV 1,4 0,6
Totale %CV 3,0 2,4
*Valori fuori limite non inclusi nei calcoli statistici
Linearità
L’intervallo di linearità, stabilito tramite il protocollo CLSI NCCLS EP6-A
è risultato pari a 0,1 - 27,5 mg/dl (1,7 - 470,3 µmol/l).
Limite Minimo di Rivelabilità
Il limite minimo di rilevabilità, stabilito tramite il protocollo CLSI NCCLS
EP17-A, è 0,1 mg/dl (1,7 µmol/l).
Comparazione fra Metodi
Studi di correlazione sono stati effettuati secondo il protocollo CLSI
NCCLS EP9-A2. I risultati dei sieri di questo dosaggio su Sat-450 sono
stati confrontati con un sistema analogo presente in commercio. I
risultati sono stati i seguenti: N = 42, y = 0,993x - 0,04 mg/dl, r =
0,999.
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Limitazioni / Sostanze Interferenti
Nessuna interferenza è stata osservata dalle seguenti sostanze fino alla
concentrazione sotto indicata:
Emoglobina > 500 mg/dl
Trigliceridi > 2000 mg/dl
Per una panoramica completa sulle sostanze interferenti si rimanda alla
pubblicazione di Young (2) .
PRECAUZIONI E AVVERTENZE
I reagenti contengono componenti inattivi, quali i conservanti (Sodio
azide o altri), tensioattivi ecc. La concentrazione totale di questi
componenti è inferiore ai limiti riportati dalle direttive CEE 67/548/EEC
e 88/379/EEC sulla classificazione, l’imballaggio ed etichettatura delle
sostanze pericolose. Tuttavia i reagenti devono essere trattati con
cautela, evitandone l’ingestione, il contatto con la pelle, gli occhi e le
membrane mucose.
Nell’utilizzo dei reagenti di laboratorio si raccomanda di seguire le
norme di buona pratica di laboratorio.
Gestione dei Rifiuti
Attenersi alle norme locali per quanto riguarda lo smaltimento dei
reagenti.
BIBLIOGRAFIA
1. Gambino, S.R., et al, Bilirubin Assay (Revised), Commission on
Continuing Education, Am. Soc. of Clin. Path., Chicago, (1968).
2. Young D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC
Press, Washington, D.C., 1990.
3. Westgard J., and Barry P., Cost- Effective Quality Control: Managing
the Quality and Productivity of Analytical Processes, AACC Press,
Washington, D.C., 1986.
4. Henry J.B. Clinical Diagnosis and managements.
5. Jendrassik L., Grof P. Biochemistry 297, 81 (1938).
6. Schellong G., Wende U. Klin. Wschr. 38, 703 (1960)
7. NCCLS Document, “Procedures for the collection of arterial blood
specimens”, Approved Standard, 3rd Ed. (1999).
8. EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to
technical progress the principles of good laboratory practice as
specified in Council Directive 87/18/EEC
Met. SA4231 00.0 Ita
Ed. 09/2012