39 KDa

le isoforme AC3, AC5, AC6, AC7 ed AC9 nelle cellule HTR-8/SVneo, mentre nei villi coriali
abbiamo riscontrato anche l’isoforma AC4 e quella solubile, oltre alle isoforme sopra riportate. In
seguito abbiamo quantificato, nelle stesse cellule, l’espressione genica delle diverse isoforme dalla
ciclasi, mediante la tecnica SQ-RT-PCR. I risultati ottenuti hanno evidenziato la netta
predominanza dell’amplificato per le isoforme AC6 e AC9.
Dati della letteratura riportano che tutte le isoforme dell’AC, compresa quella solubile, sono
espresse sia nel sinciziotrofoblasto che nel citotrofoblasto, anche se nel primo predominano AC4 e
AC8, mentre nel secondo sono maggiormente espresse AC1 e AC2. Nel caso delle cellule
extravillose da noi utilizzate, è importante sottolineare che esse rappresentano un fenotipo ben
diverso (extravilloso) rispetto a quello del sinciziotrofoblasto (villoso), pur derivando entrambi dal
citotrofoblasto. I nostri risultati dimostrano che nelle cellule trofoblastiche extravillose sono
espresse le isoforme AC3, AC5, AC6, AC7, AC9, isoforme che in altri sistemi cellulari sono
coinvolte nei processi di proliferazione e migrazione [123]; l’assenza delle ciclasi coinvolte nel
processo di differenziazione (AC1 AC2) non è sorprendente in quanto le cellule extravillose hanno
un fenotipo già differenziato. L’isoforma maggiormente espressa nelle cellule HTR-8/SVneo è
l’AC6, un’isoforma inibita, come già ricordato, da concentrazioni fisiologiche (nM) di Ca 2+ . Essa
potrebbe avere un ruolo nella modulazione delle funzioni delle cellule trofoblastiche come
proliferazione, migrazione ed invasività. In effetti è stato dimostrato che alcuni agonisti stimolano
la migrazione delle cellule trofoblastiche extravillose attraverso la stimolazione della fosfolipasi C e
conseguente aumento della concentrazione intracellulare del Ca 2+ [141]; d’altra parte è stato
riportato che il cAMP svolge un’azione inibitoria su tale risposta [137]. Pertanto, si può ipotizzare
che la migrazione sia promossa da un aumento di Ca 2+ intracellulare anche attraverso la sua azione
inibitoria a carico della isoforma AC6. Nel nostro studio, l’espressione dell’isoforma solubile
dell’AC è stata riscontrata nei villi coriali, ma non nel trofoblasto extravilloso; si può ipotizzare,
dunque, che questa isoforma non sia più espressa nelle cellule extravillose differenziate e che non
sia coinvolta nella regolazione dei processi di proliferazione, migrazione ed invasività, risposte
tipiche di queste cellule nelle fasi precoci della gravidanza. Tuttavia, il ruolo dell’isoforma solubile
dell’AC nei tessuti gestazionali non è stato ancora definito.
Vista l’interazione funzionale tra la componente catalitica e la proteina G regolatrice nel
sistema ciclasico, dopo aver caratterizzato la subunità catalitica dell’enzima, abbiamo studiato
l’espressione delle subunità della proteina G, mediante RT-PCR abbiamo dimostrato la presenza
dell’mRNA per tutte le isoforme di G da noi indagate, ovvero Gαs, Gαi Gαo e Gαq, nelle cellule
HTR-8/SVneo. Successivamente, abbiamo quantificato la loro espressione mediante la tecnica SQ-
RT-PCR: i risultati dimostrano che l’mRNA delle isoforme Gαs e Gαq è significativamente più
61