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Analisi della calcio-dipendenza dell’adenilil ciclasi in cellule HTR-8/SVneo
Alla luce degli evidenti effetti esercitati dallo ione Ca 2+ sull’attività adenilil ciclasica in diversi
tessuti [144], abbiamo valutato l’effetto di differenti concentrazioni del catione, dopo aver depletato
le membrane delle cellule HTR-8/SVneo dal calcio endogeno mediante trattamento con il chelante
EGTA (0.5 mM). Come mostrato in Fig.23A, in seguito all’aggiunta nel mezzo di incubazione di
concentrazioni fisiologiche di Ca 2+ (10 -7 M), l’attività basale dell'adenilil ciclasi è di 75.2±5.0
pmoli/mg proteina/10 min. Nelle stesse condizioni sperimentali ed in presenza dell’analogo non
idrolizzabile del GTP, GTPS (1 M), attivatore della subunità α della proteina Gαs, si osserva una
stimolazione del 253% rispetto al valore basale. FSK (1 M) evoca una stimolazione del 302%. In
presenza di EGTA ed in assenza di calcio esogeno, l’attività basale dell’adenilil ciclasi è di circa 70
volte più elevata di quella misurata in presenza di concentrazioni fisiologiche di Ca 2+ ; GTPS e FSK
stimolano l’attività enzimatica del 260% e 320%, rispettivamente (Fig.23B). Quando il catione è
stato aggiunto al mezzo alla concentrazione di 10 -3 M, si riduce drasticamente l’attività basale
(25.3±1.8 pmoli/mg proteina/10 min) ed in modo evidente quella stimolata dagli attivatori (192%
per GTPS e 216% per FSK) (Fig.23C).
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