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RISULTATI
Valutazione dei livelli intracellulari di cAMP
Effetto di agenti stimolatori (PGE2, FSK, EPI)
E’ stato valutato l’effetto dei due agonisti recettoriali PGE2 ed epinefrina (EPI) e del FSK
(un attivatore diretto della subunità catalitica dell’AC) sulla produzione di cAMP, incubando le
cellule HTR-8/SVneo per 15 min. La scelta del tempo di incubazione è stata effettuata sulla base
dei risultati ottenuti da esperimenti di time-course, effettuati in assenza o in presenza delle suddette
sostanze (dati non riportati). Come mostrato in Fig.1, tutti i composti si sono rivelati in grado di
aumentare la produzione di cAMP in modo dose-dipendente, raggiungendo il plateau attorno a 10 -5
M. I valori di EC50 calcolati sono risultati: 338 nM per PGE2, 690 nM per EPI e 600 nM per FSK. A
plateau l’entità della stimolazione è risultata: 32 volte per PGE2, 15 volte per EPI e 60 volte per
FSK.
Intracellular cAMP levels
(pmoles/10 6 cells/15 min)
400
300
200
100
0
-9 0 -8 -7 -6 -5 -4
Log[compound] M
Figura 1: Effetto di concentrazioni crescenti di PGE2 (), EPI () e FSK () sui livelli intracellulari di cAMP in
cellule HTR-8/SVneo. I livelli basali di cAMP sono pari a 6.3 ± 0.4 pmoli/10 6 cellule/15 min. I dati sono la media ±
SEM di almeno 4 esperimenti, eseguiti in duplicato su diverse colture cellulari.
Effetto dell’agonista inibitorio SRIF
Per valutare l’effetto dell’agonista somatostatina (SRIF), che notoriamente agisce inibendo il
sistema dell’adenilil ciclasi in molteplici modelli sperimentali, sono stati effettuati esperimenti di
time-course, incubando le cellule HTR-8/SVneo in assenza ed in presenza di SRIF, FSK e loro
combinazione. Come atteso (Fig.2), l’aggiunta di FSK (10 -6 M) evoca un enorme incremento dei
livelli di cAMP, massimo a 15 min. SRIF (10 -6 M) non induce alcun effetto sulla produzione basale
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