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SOMMARIO INTRODUZIONE .........................................................................................................................3 Placentazione .................................................................................................................................3 Trofoblasto extravilloso.................................................................................................................7 Regolazione paracrina ed autocrina dell’attività del trofoblasto .............................................................. 8 Ormoni della placenta ............................................................................................................................. 9 Adenilil ciclasi..............................................................................................................................11 Regolazione mediata dallo ione calcio................................................................................................... 13 Regolazione mediata dalla PKC ............................................................................................................ 13 Regolazione tipo specifica ..................................................................................................................... 14 cAMP e gravidanza ............................................................................................................................... 14 Le Proteine G...............................................................................................................................16 Subunità α e complesso delle proteine G ........................................................................................... 17 La famiglia Gαs ..................................................................................................................................... 18 La famiglia Gαi/o.................................................................................................................................... 18 La famiglia Gαq ..................................................................................................................................... 19 Proteine G e trofoblasto......................................................................................................................... 20 Le prostaglandine ........................................................................................................................21 I recettori della PGE2 ............................................................................................................................ 23 Prostanoidi e trofoblasto ....................................................................................................................... 23 Modulazione della risposta cellulare ..................................................................................................... 24 La somatostatina..........................................................................................................................25 I recettori della SRIF............................................................................................................................. 26 SRIF e Trofoblasto................................................................................................................................. 28 Modulazione della risposta cellulare ..................................................................................................... 28 SCOPO DELLA TESI.................................................................................................................29 MATERIALI e METODI............................................................................................................31 Materiali ............................................................................................................................................... 31 Colture cellulari .................................................................................................................................... 31 Determinazione dei livelli intracellulari di cAMP .................................................................................. 31 Incorporazione della 5’-bromo-3’ deossiuridina.................................................................................... 32 Curve di crescita ................................................................................................................................... 32 Esperimenti di migrazione ..................................................................................................................... 32 Immunocitochimica ............................................................................................................................... 33 RT-PCR................................................................................................................................................. 33 1
SQ-RT-PCR........................................................................................................................................... 37 Western blotting .................................................................................................................................... 39 Determinazione dell’attività dell’enzima adenilil ciclasi ........................................................................ 39 Analisi statistica .................................................................................................................................... 39 RISULTATI.................................................................................................................................40 Valutazione dei livelli intracellulari di cAMP......................................................................................... 40 Valutazione della proliferazione cellulare.............................................................................................. 42 Valutazione della migrazione cellulare .................................................................................................. 45 Identificazione dei sottotipi recettoriali per PGE2 e SRIF....................................................................... 46 Identificazione dei componenti del sistema del cAMP in cellule HTR-8/SVneo ....................................... 48 Implementazione della tecnica SQ-RT-PCR ........................................................................................... 49 Analisi della calcio-dipendenza dell’adenilil ciclasi in cellule HTR-8/SVneo.......................................... 56 DISCUSSIONE............................................................................................................................58 CONCLUSIONI ..........................................................................................................................63 BIBIOGRAFIA............................................................................................................................64 2
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BIBIOGRAFIA [1] Alsat E., Malassin
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[53] Bray P., Carter A., Simons C.,
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[100] Ito H, Duxbury M, Benoit E, C
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