OPTI-MEM PRODUCT SERU Cov v.4 (Page 2) - Invitrogen

OptiL-IFU
Opti-MEM ®
31985
11058
51985

OPTI-MEM TM
English 2
eskÔ jazyk 4
Dansk 6
Nederlands 8
eesti 10
Suomi 12
Français 14
Deutsch 16
Ελληυικα 18
magyar 20
Íslenka 22
Italiano 24
latviešu 26
lietuviškas 28
polski 30
português 32
SlovenskÔ jazyk 34
Español 36
Svenska 38
Label Symbol Glossary 40

CAUTION: Human origin materials are non-reactive
(donor level) for anti-HIV 1 & 2, anti-HCV and
HBSAg. Handle in accordance with established
bio-safety practices.
Cat. No.: 31985 100 mL with L-Glutamine
500 mL with L-Glutamine
Component-Deficient Media:
Cat. No.: *11058 500 mL without phenol red
51985 500 mL with GlutaMAX‘ I
Storage Condition: 2 to 8°C, in the dark.
Shelf Life: See product label for expiration date.
NOTE: For catalogue number 11058 please also refer to
Component-Deficient Medium
Supplementation below.
Opti-MEM ® I is a versatile, chemically-defined medium,
formulated to reduce significantly the amount of serum
required for cultivating mammalian cells in vitro.
Opti-MEM ® I is a multi-purpose medium that has proven
useful in reducing serum requirements for a wide variety of
cell lines and applications. It has been shown effective in the
growth and maintenance of both adherent and non-adherent
cell lines. When supplemented with 2-4% fetal bovine serum
or alternative sera, Opti-MEM ® I supports proliferative
rates and maximal cell densities comparable to, and in some
cases superior to, conventional media supplemented with
10% fetal bovine serum. Relatively non-fastidious cell lines
may be maintained in long-term culture with even more
substantial serum reduction. If using adherent cell lines and
less than 2% serum supplementation or in an agitated
system such as in roller bottles, the medium should be
further supplemented with 100 mg/L CaCl2.
The versatility of Opti-MEM ® I in the propagation of
various cell types makes this medium the optimal choice for
many cell culture requirements.
The raw materials used to produce Opti-MEM ® I are
screened by GIBCOTM rigorous quality standards. The
complete medium is performance tested to ensure the lotto-lot
consistency required for research and production
applications.
The shelf life of Opti-MEM ® I is comparable to conventional
glutamine-containing formulations. This stability permits
laboratories to stock and maintain inventories of Opti-
MEM ® I compatible with routine laboratory practices.
Formulation
Opti-MEM ® I is a modification of Eagle's Minimal Essential
Medium, buffered with HEPES and sodium bicarbonate, and
supplemented with hypoxanthine, thymidine, sodium
pyruvate, L-glutamine or GlutaMAX, trace elements and
growth factors.The protein level is minimal (15 mg/mL), with
insulin and transferrin being the only protein supplements.
Phenol red is included at a reduced concentration as a pH
indicator. Opti-MEM ® I may be supplemented with 2mercaptoethanol
prior to use. CaCl2 level is reduced to
99.9 mg/L for convenience in working with hybridomas.
2
English
Opti-MEM ® I Reduced Serum Medium modification of MEM (Eagle's)
Instructions for Use
Conversion to Opti-MEM ® I
Converting to Opti-MEM ® I is easy. For most applications,
no weaning procedures are necessary to attain 50%
reduction in serum supplementation when converting to
Opti-MEM ® I. The conversion can be made by simply
centrifuging the cells, decanting the supernatant, and
resuspending them in Opti-MEM ® I with the reduced serum
supplementation. (See the tables in the Applications section
for typical serum supplementation reduction). Additional
serum reduction may be realized with minimal weaning. The
optimal serum supplementation for each specific application
should be determined based on the performance
characteristics expected (growth promotion, secondary
metabolite production, etc.). Extended use of Opti-MEM ® I
in the maintenance of cell lines has shown no loss of viability
or growth rate. Keep Opti-MEM ® I away from direct light.
Use of 2-Mercaptoethanol
2-mercaptoethanol is a reducing agent which has been
shown to enhance growth 1 , plating efficiency 2 and/or
antibody synthesis 3 of specific cell lines.The kinetics of this
phenomenon are not fully understood. Most applications do
not require supplementation with 2-mercaptoethanol.
Since Opti-MEM ® I is functional in a broad range of
applications with numerous cell types, it is prudent to
evaluate the utility of 2-mercaptoethanol supplementation
based on the specific application.
2-mercaptoethanol is available separately as a 1000X
concentrate (5.5x10 -2M) in Dulbecco's Phosphate Buffered
Saline without calcium and magnesium 21985, 50 mL. It may
be added to Opti-MEM ® I immediately prior to use.
Opti-MEM ® I is stable for two months following 2mercaptoethanol
addition, provided that this period does
not exceed the expiration date stated on the Opti-MEM ® I
or 2-mercaptoethanol labels.
If desired, aseptically add 0.5 mL 2-mercaptoethanol (1000X)
to each 500 mL of Opti-MEM ® I. Do not pipette by mouth.
Mix thoroughly by swirling (do not shake). Store unused
portions of 2-mercaptoethanol tightly capped in the original
container. The final concentration of 2-mercaptoethanol in
Opti-MEM ® I will be 5.5x10 -5 M.
Applications Information
Most cells routinely cultured in serum-supplemented
medium may be directly transferred into Opti-MEM ® I with
a minimum of 50% reduction in serum.
Substantial further reduction in serum requirement has been
achieved with various murine myeloma (SP2/0-Ag14, P3X63-
Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) and derived hybridomas.
We have also achieved significant reduction in the amount of
serum required for growing fibroblasts and epithelial cells of
normal and tumor origin. If using adherent cell lines and less
than 2% serum supplementation or in an agitated system
such as in roller bottles, the medium should be further
supplemented with 100 mg/L CaCl2.
GIBCOTM research has established that supplementation

with fetal bovine serum (FBS) may be reduced when using
Opti-MEM ® I, to the levels indicated below for the following
cell lines, while maintaining growth rates comparable to basal
media at higher serum supplementation levels.
Cell Types % FBS in Opti-MEM ® I
Hybridoma Technology - Mouse and Human
Fusion 4
Cloning
Growth and Ab production -
2 - 4
Myelomas and Established Hybridomas 0.5 - 2
Diploid Fibroblast Cell Lines 2 - 4
Primary Fibroblasts 2 - 4
Rat and Hamster Embryo Cell Lines 2
Lymphoblastoid Cell Lines 0.5 - 2
Monkey Kidney Cells 4
Human and Bovine Embryonic Kidney Cells 2 - 4
Supplementation of Opti-MEM ® I with alternative
mammalian sera has also demonstrated impressive results.
Opti-MEM ® I supplemented with 4% alternative sera has
performed comparable to, in some cases superior to, basal
media supplemented with 10% FBS in the following
applications:
Application Cell Line Serum Alternative at 4%
Growth Promotion Sp2/0-Ag14 (Sp2) Calf, Horse
AE-1 (Sp2 derived Hybridoma) Calf, Horse
CHO Horse
BHK-21 Calf, Horse
Cloning Sp2 Calf, Newborn Calf, Horse
P3x63-Ag8.653 (653) Calf, Newborn Calf, Horse
Calf, Horse
Plating 653 Calf, Horse
BHK-21 Calf, Horse
CHO Calf, Newborn Calf
MAb Production AE-1 Calf, Newborn Calf, Horse
In limited studies, electroporation in Opti-MEM ® I has
yielded higher levels of transient gene expression and cell
viability than typical electroporation medium. Opti-MEM ® I,
with 2-mercaptoethanol has been reported to improve
transfection efficiency in CV-1 and COS 1 cells transfected
with a monkey SV-40-like promotion vector. 4,5
It is our intent to update periodically, application of
Opti-MEM ® I for specific cellular requirements. We would
appreciate if researchers using Opti-MEM ® I share their
experiences with GIBCOTM , so that the information gained
can be shared with the scientific community.
Component-Deficient Medium Supplementation
When using a component-deficient variation of Opti-MEM ®
I, the following supplementation concentration will be
consistent with the original formulation:
Cat. No. 11058 phenol red at 0.00160 gm/L
Quality Control
Opti-MEM ® I is subjected to pH, osmolality, endotoxin,
bacterial, fungal, and mycoplasma testing. The endotoxin
level is less than 1.0 EU/mL.
Each lot of Opti-MEM ® I is evaluated utilizing sensitive
quantitative assays for its ability to support cloning efficiency
of a murine myeloma cell line, and growth over multiple
subcultures of an adherent cell line. Test lots of Opti-MEM ®
I at 2% (CHO growth) and 4% (Sp2 cloning) serum
supplementation are compared to a previously approved
Opti-MEM ® I control.
GIBCOTM cell culture liquid products are prepared by an
aseptic process for which each step has been validated to
ensure that all products meet the industry standard sterility
assurance level of 10-3 ; i.e., product that demonstrates a
contamination level of no more than 1 of 1000 units during
the manufacturing process. The highest level of sterility
assurance (equal to or greater than 10-6 ) cannot be achieved
without terminal sterilization which is harmful to the
performance of cell culture products.
Storage
As proper packaging for chemically defined media is of
utmost importance, we recommend the use of the original
containers for full-term storage.
For optimal performance, Opti-MEM ® I should be stored 2
to 8°C in the dark prior to use.
Opti-MEM ® I is also available in economical powdered
form. Refer to the GIBCOTM catalogue or contact your
Invitrogen sales representative for details.
References:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for
Propagation of Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals.
Advances in Biotechnological Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss,
Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a
Serum- Free Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and
Its Application to the Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical
Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension
Cultures. Selected Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
For further information or for technical support on this or
other GIBCOTM products, contact Technical Services at
eurotech@invitrogen.com, or refer to the GIBCOTM products catalogue for local phone numbers in your region.
You may also contact your Invitrogen Sales Representative
or our World Wide Web site at www.invitrogen.com.
For in vitro diagnostic use.
CAUTION: Not for human or animal therapeutic use. Uses
other than the labeled intended use may be a
violation of local law.
*For research use only.
CAUTION: Not intended for human or animal diagnostic
or therapeutic uses.
3

UPOZORNĚNÍ: Materiály lidského původu nejsou reaktivní
(úroveň dárce) k anti-HIV 1 a 2, anti-HCV
a HBsAg. Zpracovávejte v souladu se
zavedenými postupy o bezpečnosti práce s
biologickým materiálem.
Kat. č.: 31985 100 ml s L-glutaminem
500 ml s L-glutaminem
Média s deficitem sloÈky:
Kat. č.: *11058 500 ml bez fenolsulfonftaleinu
51985 500 ml s GlutaMAX‘ I
Podmínky uchovávání: 2 aÈ 8°C, v temnu.
Doba pouÈitelnosti: Datum použitelnosti - viz označení
přípravku.
POZNÁMKA: Pro katalogové číslo 11058 odkazujeme
rovněž na suplementaci média s
deficitem složky níže.
Opti-MEM ® I je mnohostranné, chemicky definované
médium, formulované k vÔznamnému sníÈení mnoÈství séra
nutného pro kultivaci savčích buněk in vitro.
Opti-MEM ® I je mnohoúčelové médium s prokázaným
významem při snižování požadavků na sérum pro široké
spektrum buněčných linií a aplikací. Bylo prokázáno, že látka
je účinná na růst a udržení adherentních a neadherentních
buněčných linií. Při suplementaci 2-4% fetálním hovězím
sérem nebo jiným sérem, Opti-MEM ® I podporuje proliferaci
a hustotu savčích buněk, které jsou srovnatelné a v některých
případech lepší než standardní média obohacená o 10%
fetální hovězí sérum. Relativně nechoulostivé buněčné linie
lze udržet dlouhodobě kultivované i s podstatnějším snížením
séra. Pokud se použijí adherentní buněčné linie a
suplementace méně než 2% sérem, případně v agitovaném
systému, jako např. ve válcovitých lahvích, médium by mělo
být dále doplněno o 100 mg/l CaCl2.
Pro svou mnohostrannost v šíření různých buněčných typů je
médium Opti-MEM ® I optimální volbou pro řadu požadavků
na buněčné kultury..
Suroviny používané k výrobě Opti-MEM ® I jsou prověřovány
přísnými kvalitativními standardy pomocí GIBCO TM .
Kompletní médium je testováno z hlediska účinnosti, aby byla
zajištěna stálost každé šarže, která je nutná pro výzkum a
použití ve výrobě.
Doba pouÈitelnosti Opti-MEM ® I je srovnatelná se
standardními formulacemi obsahujícími glutamin. Tato
stabilita umožňuje laboratořím skladovat a mít rezervy Opti-
MEM ® I srovnatelné s běžnou laboratorní praxí.
Formulace
Opti-MEM ® I je modifikace Eaglova minimálního základního
média, pufrovaného pomocí HEPES a hydrogenuhličitanu
sodného a suplementovaného hypoxantinem, tymidinem,
pyruvátem sodným, L-glutaminem nebo GlutaMAX,
stopovými prvky a růstovými faktory. Koncentrace bílkovin je
minimální (15 mg/ml), přičemž jedinými bílkovinnými doplňky
jsou inzulin a transferin. Fenolsulfonftalein je obsaÈen ve
sníÈené koncentraci jako indikátor pH. Před použitím může
být Opti-MEM ® I doplněn o 2-merkaptoetanol. Koncentrace
CaCl2 je z důvodů pohodlné práce s hybridomy snížena na
99,9 mg/l .
4
eskÔ jazyk
Opti-MEM ® I Redukované sérové médium modifikace MEM (EaglÛv)
Návod k pouÈití
Přeměna na Opti-MEM ® I
Přeměna na Opti-MEM ® I je snadná. U většiny aplikací není
při přeměně na Opti-MEM ® -I zapotřebí odstavení k získání
snížení suplementace séra o 50 % Přeměnu lze provést
jednoduše centrifugací buněk , přelitím supernatantu a jejich
opětovným suspendováním v Opti-MEM ® I se sníženou
suplementací séra. (Viz tabulky v kapitole PouÈití pro typické
sníÈení suplementace séra). DalÌí sníÈení séra lze dosáhnout
s minimálním odstavením. Optimální suplementace sérem pro
každé specifické použití má být stanoveno na základě
očekávaných charakteristik účinnosti (podpora růstu,tvorba
druhotných metabolitů atd.). Bylo prokázáno, že delší
používání Opti-MEM ® I při udržování buněčných linií nevede
ke ztrátě životnosti nebo rychlosti růstu. Uchovávejte Opti-
MEM ® I mimo dosah přímého světla.
PouÈití 2-merkaptoetanolu
2-merkaptoetanol je redukční látka, o níž bylo prokázáno, že
zvyšuje růst 1 ,krycí účinnost 2 a/anebo syntézu protilátek 3
specifických buněčných linií. Kinetika tohoto fenoménu není
zcela objasněna. U většiny aplikací není potřebná
suplementace 2-merkaptoetanolem.
Protože Opti-MEM ® I působí v širokém spektru aplikací s
řadou buněčných typů, je rozumné vyhodnotit užitečnost
suplementace 2-merkaptoetanolem na základě specifické
aplikace.
2-merkaptoetanol je k dispozici odděleně jako 1000násonÔ
koncentrát (5,5x10 -2M) v Dulbeccově roztoku chloridu
sodného s fosfátovým pufrem bez kalcia a magnézia 21985,
50 ml. Může být přidán k Opti-MEM ® I těsně před použitím.
Opti-MEM ® I je stabilní po dobu 2 měsíců po přidání 2merkaptoetanolu,
pokud toto období nepřesáhne dobu
použitelnosti uvedenou na štítku označujícím
Opti-MEM ® I nebo 2-merkaptoetanol.
Na vyžádání přidejte asepticky 0,5 ml 2-merkaptoetanolu
(1000x) ke každým 500 ml Opti-MEM ® I. Neprovádějte
pipetování ústy. Důkladně promíchat rychlým i krouživými
pohyby (netřepat). Nepoužité díly 2-merkaptoetanolu
uchovávejte pevně uzavřeny v originálním obalu. Konečná
koncentrace 2-merkaptoetanolu v Opti-MEM ® I bude
5,5x10 -5 M.
Informace o aplikaci
Většina buněk běžně kultivovaných v sérem
suplementovaném médiu může být přímo přenesena do
Opti-MEM ® I se snížením séra minimálně o 50 %..
Dalšího podstatného snížení potřeby séra bylo dosaženo
různými druhy myšího myelomu (SP2/0-Ag14, P3X63-
Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) a derivovanými hybridomy.
Dosáhli jsme rovněž podstatného snížení množství séra,
které je zapotřebí pro rostoucí fibroblasty a epiteliální buňky
normálního a tumorózního původu. Pokud se použijí
adherentní buněčné linie a suplementace méně než 2%
sérem, případně v agitovaném systému, jako např. ve
válcovitých lahvích, médium by mělo být dále doplněno o
100 mg/l CaCl2.
VÔzkum firmy GIBCO TM zjistil, že suplementace fetálním
hovězím sérem (FBS), pokud se použije Opti-MEM ® I na

koncentrace uvedené níže pro následující buněčné linie,
přičemž rychlost růstu zůstane srovnatelná se základním
médiem při vyšších hladinách suplementace sérem.
Buněčné typy % FBS v Opti-MEM ® I
Technologie hybridomů - myš a člověk
Fúze 4
Klonování 2 - 4
Růst a tvorba Ab - myelomy a vytvořené hybridomy 0.5 - 2
Diploidní buněčné linie fibroblastů 2 - 4
Primární fibroblasty 2 - 4
Embryonální buněčné linie krys a křečků 2
Lymfoblastoidní buněčné linie 0.5 - 2
Opičí buňky ledvin 4
Lidské a hovězí embryonální buňky ledvin 2 - 4
Suplmentace Opti-MEM ® I jinými savčími séry prokázala
rovněž pozoruhodné výsledky. Opti-MEM ® I doplněný o jiná
4%séra se ukázal jako srovnatelný a v některých případech i
lepší než základní média suplementována 10% FBS v
následujících aplikacích:
Aplikace Buněčná linie Alternativa séra při 4 %
Podpora růstu Sp2/0-Ag14 (Sp2) Tele, kůň
AE-1 (Sp2 derivovan_ Hybridom) Tele, kůň
CHO Kůň
BHK-21 Tele, kůň
Klonování Sp2 Tele, novorozené tele, kůň
P3x63-Ag8.653 (653) Tele, novorozené tele, kůň
Tele, kůň
Krytí 653 Tele, kůň
BHK-21 Tele, kůň
CHO Tele, novorozené tele
Tvorba MAb AE-1 Tele, novorozené tele, kůň
V omezeném počtu studií, elektroporace v Opti-MEM ® I
vedla k vyšší úrovni tranzitorní exprese genů a životnosti
buněk než typické elektroporační médium. Bylo popsáno, že
Opti-MEM ® I s 2-merkaptoetanolem zlepšuje transfekční
účinnost u buněk CV-1 a COS 1 transfektovaných s opičím
podporujícím vektorem podobným SV-40. 4,5
Je naším cílem pravidelně aktualizovat aplikaci Opti-MEM ® I
podle specifických požadavků na buňky. Budeme si vážit,
pokud výzkumní pracovníci používající Opti-MEM ® I se
podělí o své zkušenosti s firmou GIBCOTM ,aby získané
informace mohly být předávány vědecké obci.
Suplementace média s deficitem sloÈky
Při používání varianty Opti-MEM ® I s deficitem složky
budou shodné s původní formulací tyto suplementační
koncentrace::
Kat. Č. 11058 fenolsulfonftalein při koncentraci 0,00160 g/l
Kontrola kvality
Opti-MEM ® I byl testován z hlediska pH, osmolality,
endotoxinů, bakterií, plísní a mykoplasmat. Koncentrace
endotoxinu je menÌí neÈ 1,0 EU/ml.
Každá šarže Opti-MEM ® I je hodnocená pomocí citlivých
kvantitativních analýz z hlediska své schopnosti podporovat
účinnost klonování buněčné linie myšího myelomu a růstu
přes mnohočetné subkultury adherentní buněčné linie.Testy
šarží Opti-MEM ® I při 2% (růst CHO) a 4% (klonování Sp2)
suplementaci séra jsou porovnány s dříve schválenou
kontrolou Opti-MEM ® I.
Tekuté buněčné kultury GIBCOTM jsou připraveny za
aseptických podmínek, při nichž je validován každý krok, aby
bylo zajištěno, že všechny výrobky splňují standardní
zaručenou průmyslovou úroveň sterility 10-3 ; tj., že výrobek
má během výrobního procesu úroveň kontaminace ne větší
než 1 na 1000 jednotek. Nejvyšší úroveň zajištění sterility
(rovná nebo vyšší než 10-6 ) nelze dosáhnout bez konečné
sterilizace, která je však škodlivá z hlediska účinnosti
výrobků buněčných kultur.
Uchovávání
Jelikož řádné balení chemicky definovaných médií má
mimořádný význam, doporučujeme pro použít původní obaly,
aby byla zajištěn uchovávání po celou dobu.
Aby byla zajištěna optimální účinnost, před použitím
uchovávejte Opti-MEM ® I při teplotě 2 - 8°C v temnu.
Opti-MEM ® I je rovněž k dostání v úsporné práškové
formě. Pro podrobnosti odkazujeme na katalog firmy
GIBCOTM , případně se obraťte na prodejní zástupce firmy
Invitrogen.
Literatura:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for
Propagation of Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals.
Advances in Biotechnological Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss,
Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a
Serum- Free Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and
Its Application to the Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytická
biochemie. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. a Mishell R.I., primární imunizace v suspenzních
kulturách. Selected Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. a Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. osobní sdělení (1987).
Pro dalÌí informace nebo pro technickou podporu tÔkající se
tohoto nebo jinÔch vÔrobků GIBCOTM , se obraťte na
oddělení technických služeb na eurotech@invitrogen.com,
případně odkazujeme na katalog výrobků GIBCOTM , kde jsou
uvedena telefonní čísla pro váš region.
Můžete se rovněž obrátit na Vašeho obchodního zástupce
firmy Invitrogen nebo navštivte naši internetovou stránku
www.invitrogen.com.
Pro diagnostické pouÈití in vitro.
UPOZORNĚNÍ: Výrobek není určen pro terapeutické
použití u lidí nebo zvířat. Jiné použití než je
uvedeno ve schválené příbalové informaci
může představovat porušení místních
zákonných předpisů.
*Pouze pro vÔzkumné pouÈití.
UPOZORNĚNÍ: Výrobek není určen pro terepeutické
pouÈití u lidí nebo u zvířat.
5

ADVARSEL: Materialer af human oprindelse er
ureaktive (på donorniveau) for
anti-HIV 1 & 2, anti-HCV og HBsAg.
Skal håndteres ifølge fastlagte regler
for biologisk sikkerhed.
Kat. nr.: 31985 100 ml med L-glutamin
500 ml med L-glutamin
Komponentdeficient medium:
Kat. nr.: *11058 500 ml uden fenolrødt
51985 500 ml med GlutaMAX‘ I
Opbevaringsbetingelser: Mørkt ved 2 til 8°C.
Holdbarhed: Se udløbsdatoen på produktets etiket.
BEMÆRKNING: For katalognumer 11058, se
ligeledes Component-Deficient
Medium Supplementation nedenfor.
Opti-MEM ® I er et alsidigt, kemisk defineret medium
formuleret med henblik på i betydelig grad at reducere
mængden af serum nødvendigt for dyrkning af pattedyrceller
in vitro.
Opti-MEM ® I er et medium til mange formål, der har vist
sig anvendeligt til at reducere krav til serum for en lang
række forskellige cellelinier og i forskellige anvendelser. Det
har vist sig effektivt til dyrkning og vedligeholdelse af både
fritvoksende og kontaktkrævende cellelinier. Når suppleret
med 2-4% føtalt okseserum eller et alternativt serum
understøtter Opti-MEM ® I proliferationshastigheder og
maksimale celletætheder, der er sammenlignelige med og i
visse tilfælde overstiger de tilsvarende for traditionelt
medium suppleret med 10% føtalt okseserum. Relativt
letvoksende cellelinier kan vedligeholdes i langtidskulturer
med endog mere væsentlig serumreduktion. Hvis der
anvendes kontaktkrævende cellelinier og mindre end 2%
serumsupplement, eller et agiteret system som for eksempel
rulleflasker, bør mediet yderligere suppleres med 100 mg/l
CaCl2.
Alsidigheden af Opti-MEM ® I til opformering af forskellige
celletyper gør dette medium til det optimale valg ved mange
celledyrkningskrav.
Råmaterialet anvendt til fremstilling af Opti-MEM ® I er
screenet ifølge GIBCO TM ’s strenge kvalitetsstandarder. Det
komplette mediums ydeevne er testet for at sikre den
konsistens mellem forskellige lot, der er nødvendig til
forsknings- og produktionsanvendelser.
Holdbarheden af Opti-MEM ® I er sammenlignelig med
traditionelle glutaminindeholdende formuleringer. Denne
stabilitet gør det muligt for laboratorier at opbevare og
vedligeholde lagre af Opti-MEM ® I kompatibelt med
rutinemæssig laboratoriepraksis.
Formulering
Opti-MEM ® I er en modifikation af Eagle's Minimal Essential
Medium bufferjusteret med HEPES og natriumbicarbonat og
suppleret med hypoxanthin, thymidin, natriumpyruvat,
L-glutamin eller GlutaMAX, sporstoffer og vækstfaktorer.
Proteinniveauet er minimalt (15 mg/ml), idet der kun er
suppleret med insulin og transferrin. Fenolrødt er inkluderet
i en reduceret koncentration som pH-indikator.
Opti-MEM ® I kan suppleres med 2-mercaptoethanol inden
6
Dansk
Opti-MEM ® I Reduced Serum Medium modifikation af MEM (Eagle's)
brug. CaCl2-niveauet er reduceret til 99,9 mg/l for at gøre
arbejde med hybridomer lettere.
Brugsanvisning
Konvertering til Opti-MEM ® I
Konvertering til Opti-MEM ® I er let.Til de fleste
anvendelser er en afvænningsprocedure til opnåelse af 50%
reduktion af serumsupplementet ikke nødvendig ved
konvertering til Opti-MEM ® I. Konverteringen kan udføres
ved simpelthen at centrifugere cellerne, bortsuge
supernatanten og resuspendere cellerne i Opti-MEM ® I
med reduceret serumsupplement. (Se tabellerne i afsnittet
Anvendelser for typiske reduktioner af serumsupplement).
Yderligere reduktion af serum kan opnås med minimal
afvænning. Det optimale serumsupplement til hver specifikke
anvendelse bør fastlægges på grundlag af de forventede
egenskaber for ydeevnen (fremme af vækst, produktion af
sekundære metaboliter osv.). Langvarig brug af Opti-MEM ® I
til vedligeholdelse af cellelinier har ikke vist noget tab af
celleoverlevelse eller væksthastighed. Hold Opti-MEM ® I
væk fra direkte lys.
Anvendelse af 2-mercaptoethanol
2-mercaptoethanol er et reduktionsmiddel, som er blevet
vist at øge vækst 1 , udstrygningseffektivitet 2 og/eller
antistofsyntese 3 af specifikke cellelinier. Kinetikken af dette
fænomen er ikke fuldt forstået. De fleste anvendelser kræver
ikke supplering med 2-mercaptoethanol.
Da Opti-MEM ® I er funktionelt inden for en lang række
anvendelser med talrige celletyper, er det fornuftigt at
evaluere supplering med 2-mercaptoethanol baseret på den
specifikke anvendelse.
2-mercaptoethanol leveres separat som et 1000 X
koncentrat (5,5x10 -2 M) i Dulbecco's Phosphate Buffered
Saline uden calcium og magnesium 21985, 50 ml. Det kan
eventuelt tilsættes til Opti-MEM ® I umiddelbart inden brug.
Opti-MEM ® I er stabilt i to måneder efter tilsætning af 2mercaptoethanol
under forudsætning af, at denne periode
ikke strækker sig ud over udløbsdatoen angivet på etiketten
for Opti-MEM ® I eller 2-mercaptoethanol.
Hvis ønsket tilsættes 0,5 ml 2-mercaptoethanol (1000X)
aseptisk for hver 500 ml Opti-MEM ® I. Pipetter ikke med
munden. Bland grundigt ved omhvirvling (ryst ikke).
Opbevar ubrugte portioner af 2-mercaptoethanol tæt
tillukket i originalbeholderen. Slutkoncentrationen af 2mercaptoethanol
i Opti-MEM ® I vil være 5,5x10 -5 M.
Anvendelsesinformation
De fleste celler, der rutinemæssigt dyrkes i serumsuppleret
medium, kan overføres direkte til Opti-MEM ® I med mindst
en reduktion på 50% af serum.
En væsentlig yderligere reduktion af krav om serum er
blevet opnået med forskellige murine myelomer (SP2/0-
Ag14, P3X63-Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) og afledte hybridomer.
Ligeledes har vi opnået et betydelig reduceret krav om
serummængde ved dyrkning af fibroblaster og epitelceller af
normal oprindelse eller af tumoroprindelse. Hvis der
anvendes kontaktkrævende cellelinier og mindre end 2%
serumsupplement, eller i et agiteret system som for
eksempel rulleflasker, bør mediet yderligere suppleres med
100 mg/l CaCl2.

GIBCO TM research har fastlagt, at supplering med føtalt
okseserum (FBS) ved anvendelse af Opti-MEM ® I kan
reduceres til niveauerne angivet nedenfor for følgende
cellelinier, idet der opnås væksthastigheder, der er
sammenlignelige med væksthastighederne for basalmedium
suppleret med højere serumniveauer.
Celletyper % FBS i Opti-MEM ® I
Hybridomteknologi – Mus og menneske
Fusion 4
Kloning
Vækst og Ab-produktion –
2 - 4
Myelomer og etablerede hybridomer 0.5 - 2
Diploide fibroblastcellelinier 2 - 4
Primære fibroblaster 2 - 4
Rotte- og hamsterembryoncellelinier 2
Lymfoblastoide cellelinier 0.5 - 2
Abenyreceller 4
Embryonnyreceller fra menneske og okse 2 - 4
Supplering af Opti-MEM ® I med alternative pattedyrsera
har ligeledes demonstreret imponerende resultater.
Opti-MEM ® I suppleret med 4% alternativt serum har været
lige så effektivt og i visse tilfælde markant bedre end
basalmedium suppleret med 10% FBS i følgende anvendelser:
Anvendelse Cellelinie Serumalternativ ved 4%
Vækstfremme Sp2/0-Ag14 (Sp2) Kalv, hest
AE-1 (Sp2-afledt hybridom) Kalv, hest
CHO Hest
BHK-21 Kalv, hest
Kloning Sp2 Kalv, nyfødt kalv, hest
P3x63-Ag8.653 (653) Kalv, nyfødt kalv, hest
Kalv, hest
Udstrygning 653 Kalv, hest
BHK-21 Kalv, hest
CHO Kalv, nyfødt kalv
MAb-produktion AE-1 Kalv, nyfødt kalv, hest
I begrænsede studier har elektroporation i Opti-MEM ® I
givet højere niveauer af transient genekspression og
celleoverlevelse end typisk elektroporationsmedium.
Opti-MEM ® I er med 2-mercaptoethanol blevet rapporteret
at forbedre transfektionseffektiviteten i CV-1- og COS
1-celler transficeret med en abe-SV-40-lignende
promotionvektor. 4,5
Det er vores hensigt periodisk at opdatere anvendelsen af
Opti-MEM ® I til specifikke cellekrav. Vi vil være glade, hvis
forskere, der anvender Opti-MEM ® I, deler deres erfaring
med GIBCOTM , således at den indvundne information kan
deles med det videnskabelige samfund.
Component-Deficient Medium Supplementation
Ved anvendelse af en komponentdeficient variant af
Opti-MEM ® I vil følgende koncentrerede supplement være
konsistent med den originale formulering:
Kat. nr. 11058 fenolrødt ved 0,00160 g/l
Kvalitetskontrol
Opti-MEM ® I er underkastet test for pH, osmolaritet,
endotoksin, bakterier, svampe og mycoplasma.
Endotoksinniveauet er mindre end 1,0 EU/ml.
Hvert lot af Opti-MEM ® I er ved anvendelse af sensitive
kvantitative analyser evalueret for dets evne til at
understøtte kloningseffektiviteten af en murin
myelomcellelinie og vækst over adskillige subkulturer af en
kontaktkrævende cellelinie. Testlot af Opti-MEM ® I ved 2%
(CHO-vækst) og 4% (Sp2-kloning) serumsupplement
sammenlignes med en tidligere godkendt
Opti-MEM ® I-kontrol.
GIBCOTM ’s celledyrkningsprodukter fremstilles ved en
aseptisk proces, i hvilken hvert trin valideres for at sikre, at
alle produkter overholder industristandardens
sterilitetssikringsniveau på 10-3 ; dvs. et produkt, der udviser
et kontamineringsniveau på højst 1 ud af 1000 enheder
under fremstillingsprocessen. Det højeste niveau af
sterilitetssikring (lig med eller højere end 10-6 ) kan ikke
opnås uden afsluttende sterilisering, som vil være skadeligt
for celledyrkningsprodukternes ydeevne.
Opbevaring
Da korrekt emballering af kemisk defineret medium er af
yderste vigtighed, anbefaler vi anvendelse af
originalbeholderne til langtidsopbevaring.
For optimal ydeevne bør Opti-MEM ® I opbevares mørkt
ved 2 til 8°C inden brug.
Opti-MEM ® I fås ligeledes i økonomisk pulverform. Se
GIBCOTM ’s katalog eller kontakt Deres Invitrogen
salgsrepræsentant for detaljer.
Referencer:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for
Propagation of Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals.
Advances in Biotechnological Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss,
Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a
Serum- Free Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and
Its Application to the Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical
Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension
Cultures. Selected Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
For yderligere information eller teknisk service for dette
eller andre GIBCOTM produkter, kontakt Teknisk service på
eurotech@invitrogen.com eller se i GIBCOTM ’s
produktkatalog for lokalt telefonnummer i Deres område.
De kan også kontakte Deres Invitrogen salgsrepræsentant
eller vores World Wide Web site på www.invitrogen.com.
Til in vitro diagnostisk anvendelse.
ADVARSEL: Er ikke beregnet til behandling af mennesker eller
dyr.Anvendelse til andet end det, der er angivet
på etiketten, kan være et brud på lokal lov.
*Kun til forskningsbrug.
ADVARSEL: Er ikke beregnet til diagnostisk eller terapeutisk
anvendelse på mennesker eller dyr.
7

LET OP: Materialen van humane herkomst zijn niet-reactief
(donorniveau) voor anti-HIV 1 & 2, anti-HCV en
HBsAg. Hanteren volgens de
veiligheidsvoorschriften voor het omgaan
met biomateriaal
Cat. nr.: 31985 100 ml bevat L-glutamine
500 ml bevat L-glutamine
Component-deficiënte media:
Cat. nr.: *11058 500 ml zonder fenolrood
51985 500 ml met GlutaMAX‘ I
Bewaarcondities: Donker, 2 tot 8°C.
Houdbaarheid: De houdbaarheidsdatum staat vermeld op het etiket
van dit product.
LET OP: Kijk voor catalogusnummer 11058 ook hieronder
bij Suppletie van component-deficiënt medium.
Opti-MEM ® I is een veelzijdig bruikbaar chemisch
gedefinieerd medium, dat is samengesteld om de hoeveelheid
serum die nodig is voor het in vitro kweken van
zoogdiercellen significant te verminderen.
Opti-MEM ® I is een voor meerdere doeleinden geschikt
medium, waarvan bewezen is dat het kan worden gebruikt
om de benodigde hoeveelheid serum voor een groot aantal
verschillende cellijnen en toepassingen te verminderen. De
effectiviteit ervan is aangetoond voor de groei en het
onderhoud van zowel adherente als niet-adherente cellijnen.
Wanneer 2-4% foetaal bovien serum of ander serum wordt
toegevoegd, ondersteunt Opti-MEM ® I proliferatiesnelheden
en maximale celdichtheden die vergelijkbaar zijn met, en in
sommige gevallen beter zijn dan, conventionele media met
10% foetaal bovien serum. Relatief minder kritische cellijnen
kunnen in langetermijnkweek worden aangehouden met een
nog substantiëlere serumreductie. Bij adherente cellijnen en
toevoeging van minder dan 2% serum, of in een
schudsysteem zoals met rotatieve kweekflessen, moet ook
nog 100 mg/l CaCl2 aan het medium worden toegevoegd.
Door de veelzijdigheid van Opti-MEM ® bij het kweken van
verschillende typen cellen is dit medium de beste keus voor
veel celkweekvereisten.
De grondstoffen die voor de productie van Opti-MEM ® I
worden gebruikt, worden gescreend volgens de strenge
GIBCOTM kwaliteitseisen. De werking van het complete
medium wordt getest om de batch-tot-batch-consistentie te
waarborgen die nodig is voor toepassingen in research en
productie.
De houdbaarheidsperiode van Opti-MEM ® I is vergelijkbaar
met die van conventionele glutamine-bevattende
formuleringen. Deze stabiliteit maakt het voor laboratoria
mogelijk om voorraden van Opti-MEM ® I aan te houden
volgens de standaard laboratoriumpraktijk.
Samenstelling
Opti-MEM ® I is een modificatie van Eagle’s Minimal Essential
Medium, gebufferd met HEPES en natriumbicarbonaat en
aangevuld met hypoxanthine, thymidine, natriumpyruvaat, Lglutamine
of GlutaMAX, sporenelementen en
groeifactoren. Het eiwitgehalte is minimaal (15 mg/ml), en
insuline en transferrine zijn de enige toegevoegde eiwitten.
Fenolrood is in gereduceerde concentratie toegevoegd als
pH-indicator. Vóór gebruik kan 2-mercapto-ethanol aan
8
Nederland
Opti-MEM ® I Reduced Serum Medium modificatie van MEM (Eagle's)
Opti-MEM ® I worden toegevoegd. Het gehalte aan CaCl2
is gereduceerd tot 99,9 mg/l, om ook goed met hybridomen
te kunnen werken.
Instructies voor gebruik
Overgaan naar Opti-MEM ® I
Het overgaan naar Opti-MEM ® I is eenvoudig. Voor de
meeste toepassingen zijn geen ‘weaning procedures’
(speenprocedures) nodig om bij de overgang naar
Opti-MEM ® I een reductie in serumsuppletie van 50% te
verkrijgen. De overgang kan eenvoudig worden gemaakt
door de cellen te centrifugeren, het supernatans af te gieten
en de cellen te resuspenderen in Opti-MEM ® met de
gereduceerde serumsuppletie. (Zie voor typische reducties
in serumsuppletie de tabellen in het gedeelte over
Toepassingen). Een extra serumreductie kan worden
gerealiseerd met minimaal spenen (‘weaning’). De optimale
serumsuppletie voor elke specifieke toepassing dient te
worden bepaald op basis van de verwachte
werkingseigenschappen (groeibevordering, productie van
secundaire metabolieten etc.) Langdurig gebruik van
Opti-MEM ® I voor het aanhouden van cellijnen bleek geen
verlies van viabiliteit of groeisnelheid te geven. Opti-MEM ®
I niet blootstellen aan direct licht.
Gebruik van 2-mercapto-ethanol
2-mercapto-ethanol is een reducerend agens waarvan is
aangetoond dat het de groei 1 , uitplaat-efficiëntie 2 en/of
antilichaamproductie 3 van specifieke cellijnen bevordert. De
kinetiek van dit fenomeen is niet volledig bekend. Voor de
meeste toepassingen is suppletie met 2-mercapto-ethanol
niet nodig.
Omdat Opti-MEM ® I voor een breed scala van toepassingen
werkt, met vele celtypen, is het verstandig om het nut van 2mercapto-ethanol-suppletie
te beoordelen per specifieke
toepassing.
2-mercapto-ethanol is verkrijgbaar als 1000x concentraat
(5,5x10 -2 M), in Dulbecco's fosfaatgebufferd fysiologisch zout
zonder calcium en magnesium (Cat. nr. 21985; 50 ml). Het
kan direct voor gebruik worden toegevoegd aan Opti-
MEM ® I. Opti-MEM ® I is na toevoeging van 2-mercaptoethanol
twee maanden stabiel, mits deze periode de op de
etiketten van de gebruikte Opti-MEM ® I en 2-mercaptoethanol
vermelde houdbaarheidsdatums niet overschrijdt.
Indien gewenst kunt u per 500 ml Opti-MEM ® I steriel 0,5 ml
2-mercapto-ethanol (1000x) toevoegen. Niet met de mond
pipetteren. Meng goed door te zwenken (niet schudden).
Bewaar ongebruikte porties 2-mercapto-ethanol zeer goed
afgesloten in de originele houders. De eindconcentratie 2mercapto-ethanol
in Opti-MEM ® I is 5,5x10 -5 M.
Informatie over toepassingen
De meeste cellen die volgens routinemethoden worden
gekweekt in medium met toegevoegd serum kunnen direct
worden overgezet in Opti-MEM ® I, met een minimale
serumreductie van 50%.
Een substantiële verdere verlaging van de serumbehoefte
werd verkregen met verschillende muizen-myelomen (SP2/0-
Ag14, P3X63-Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) en afgeleide
hybridomen.

Ook hebben we een significante afname van de benodigde
hoeveelheid serum bereikt bij groeiende fibroblasten en
epitheelcellen uit normaal weefsel en tumorweefsel. Bij
adherente cellijnen en toevoeging van minder dan 2% serum,
of in een schudsysteem zoals met rotatieve kweekflessen,
moet ook nog 100 mg/l CaCl2 aan het medium worden
toegevoegd.
GIBCOTM research heeft vastgesteld dat suppletie met
foetaal bovien serum (FBS) bij gebruik van Opti-MEM ® I kan
worden teruggebracht tot het hieronder vermelde gehalte
voor de volgende cellijnen, waarbij de groeisnelheid
vergelijkbaar blijft met die in basale media met
serumsuppleties in hogere concentraties.
Celtypen % FBS in Opti-MEM ® I
Hybridoma-techniek - muizen en humaan
Fusie 4
Klonering 2 - 4
Groei en Ab-productie - myelomen en stabiele hybridomen 0,5 - 2
Diploïde fibroblasten-cellijnen 2 - 4
Primaire fibroblasten 2 - 4
Ratten- en hamster-embryo-cellijnen 2
Lymfoblastaire cellijnen 0,5 - 2
Apen-niercellen 4
Humane en boviene embryonale niercellen 2 - 4
Met suppletie van Opti-MEM ® I met alternatieve
zoogdiersera zijn ook indrukwekkende resultaten behaald.
Opti-MEM ® I, met toevoeging van 4% alternatief serum, had
een vergelijkbare, en in sommige gevallen betere, werking
dan basale media met 10% FBS, bij de volgende toepassingen:
Toepassing Cellijn Serum-alternatief, 4%
Groeibevordering Sp2/0-Ag14 (Sp2) Kalf, paard
AE-1 (Sp2-afgeleid hybridoma) Kalf, paard
CHO Paard
BHK-21 Kalf, paard
Klonering Sp2 Kalf, pasgeboren kalf, paard
Uitplaten (‘plating’)
P3x63-Ag8.653 (653) Kalf, pasgeboren kalf, paard
Kalf, paard
653
Kalf, paard
BHK-21 Kalf, paard
CHO Kalf, pasgeboren kalf
Mab-productie AE-1 Kalf, pasgeboren kalf, paard
In beperkt onderzoek had elektroporatie in Opti-MEM ® I
hogere opbrengsten van transiënte genexpressie en
celviabiliteit dan standaard elektroporatiemedium. Er is
beschreven dat Opti-MEM ® -I met 2-mercapto-ethanol de
transfectie-efficiëntie verhoogde in CV-1 en COS 1-cellen
die werden getransfecteerd met een apen-SV-40-achtige
promotievector. 4,5
Wij zijn van plan om periodieke updates te geven over
toepassingen van Opti-MEM ® I voor specifieke cellulaire
vereisten. Wij stellen het op prijs wanneer onderzoekers
die Opti-MEM ® I gebruiken hun bevindingen met GIBCOTM willen delen, zodat de verkregen informatie met de
wetenschappelijke gemeenschap kan worden gedeeld.
Suppletie van component-deficiënte media:
Wanneer u een component-deficiënte variant van
Opti-MEM ® I gebruikt, komt de volgende concentratie van
de suppletie overeen met de originele samenstelling:
Cat. nr. 11058 Fenolrood: 0,00160 g/l
Kwaliteitscontrole
Opti-MEM ® I wordt getest op pH, osmolaliteit,
endotoxinen, bacteriën, schimmels en mycoplasma. Het
gehalte aan endotoxinen is lager dan 1,0 EU/ml.
Elke batch Opti-MEM ® I wordt met behulp van gevoelige
kwantitatieve assay’s beoordeeld wat betreft zijn capaciteit
om de kloneringsefficiëntie van een muizen-myeloma-cellijn
en de groei gedurende meerdere subkweken van een
adherente cellijn te ondersteunen. Test-hoeveelheden
Opti-MEM ® I met 2% (CHO-groei) en 4% (Sp2-klonering)
serumsuppletie worden vergeleken met een eerder
goedgekeurde Opti-MEM ® I-controle.
GIBCOTM vloeibare celkweekproducten worden aseptisch
geproduceerd in een proces waarvan elk stap is gevalideerd;
dit verzekert dat alle producten voldoen aan een Sterility
Assurance Level (SAL) van 10-3 , dat wil zeggen, bij het
product komt gedurende het productieproces een
besmettingsniveau van niet meer dan 1 op 1000 eenheden
voor. Het hoogste niveau van gegarandeerde steriliteit
(hoger dan of gelijk aan 10-6 ) kan niet worden bereikt
zonder een totale sterilisatie; dit is echter schadelijk voor de
prestatie van celkweekproducten.
Opslag
Omdat een juiste verpakking van chemisch gedefinieerde
media van het uiterste belang is, raden wij aan om
gedurende de hele opslagperiode de originele houders te
gebruiken.
Voor een optimale werking moet Opti-MEM ® I voor
gebruik in het donker worden bewaard bij 2 tot 8°C.
Opti-MEM ® I is ook leverbaar in voordelige poedervorm.
Zie voor gedetailleerde gegevens de GIBCOTM catalogus of
neem contact op met de vertegenwoordiger van Invitrogen.
Referenties:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Voor aanvullende informatie of technische ondersteuning voor dit of andere
GIBCOT producten kunt u contact opnemen met de Technische Dienst
via eurotech@invitrogen.com; zie ook de GIBCO productcatalogus voor
lokale telefoonnummers binnen de betreffende regio.
U kunt ook contact opnemen met de Invitrogen
handelsvertegenwoordiger of via onze internetsite
www.invitrogen.com.
Voor diagnostisch gebruik in vitro.
LET OP: Niet voor humaan of dierlijk therapeutisch gebruik.
Ander gebruik dan aangegeven op het label kan strijdig
zijn met de geldende wetgeving.
*Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden.
LET OP: Niet voor humaan of dierlijk diagnostisch of
therapeutisch gebruik.
9

ETTEVAATUST: Inimorganismist pärinevad materjalid ei
reageeri (doonori tasemel) anti-HIV 1 ja 2,
anti HCV ja HBsAg-ga. Käsitsege toodet
vastavalt väljakujunenud
bioohutuse tavadele.
Katalooginumber: 31985 100 mL L-glutamiiniga
500 mL L-glutamiiniga
Vähendatud komponentide hulgaga sööde:
Katalooginumber: *11058 500 mL ilma fenoolpunaseta
51985 500 mL GlutaMAX‘ I-iga
Säilitamistingimused: temperatuuril + 2 kuni + 8 °C pimedas
ja kuivas kohas.
Säilivusaeg: vt tooteetiketilt kõlblikkustähtaega.
TÄHELEPANU: Allkirjeldatud vähendatud komponentide
hulgaga söötme puhul palun pidage ühtlasi
silmas ka lisandit, mille katalooginumber
on 11058.
Opti-MEM ® I on mitmeotstarbeline keemiliselt määratletud
sööde, mis muudab tänu oma koostisele võimalikuks
imetajarakkude in vitro kultiveerimiseks vajaliku seerumi
koguse tunduva vähendamise.
Opti-MEM ® I on mitmekesiste kasutamisvõimalustega
sööde, mis on tõestanud oma suutlikkust seerumivajaduse
vähendamisel väga mitmesuguste rakuliinide ja rakenduste
puhul. See sööde on osutunud tõhusaks nii liibuvate kui ka
mitteliibuvate rakuliinide kasvatamisel ja säilitamisel.
Opti-MEM ® I toetab kõigest 2–4% veiselooteseerumi või
mõne muu sellesarnase seerumiga varustatuna sellist
proliferatsioonikiirust ja maksimaalset rakkude tihedust, mis
on võrreldavad 10% veiselooteseerumilisandiga varustatud
tavaliste söötmete abil saavutatud näitajatega, mõnel juhul
aga isegi ületavad neid. Suhteliselt vähenõudlikke rakuliine on
võimalik säilitada pikaajalise kultuurina isegi seerumikoguse
veelgi suuremal vähendamisel. Kasutamisel liibuvate
rakuliinidega ja vähem kui 2% seerumilisandiga või mõnes
pöörlevate pudelite sarnases segamissüsteemis tuleb
söötmele lisada täiendavalt 100 mg/L CaCl2.
Tänu Opti-MEM ® I mitmekülgsusele erinevate rakutüüpide
paljundamisel on see sööde parim valik terve rea
rakukultuuride vajaduste rahuldamiseks.
Opti-MEM ® I valmistamiseks kasutatavaid toormaterjale
kontrollitakse Invitrogeni rangete standardite alusel.
Valmissöötmete tõhusust testitakse, et tagada kõikide
tootepartiide ühetaolisus, mis on vajalik söötme kasutamisel
teaduslikes ja tootmisrakendustes.
Opti-MEM ® I säilivusaeg on võrreldav tavaliste glutamiini
sisaldavate söötmete säilivusajaga. Selline stabiilusus annab
laboratooriumidele võimaluse soetada ja säilitada igapäevase
laboritöö jaoks vajalikul hulgal Opti-MEM ® I varusid.
Koostis
Opti-MEM ® I kujutab endast Eagle'i MEMi
(miinimumpõhisöötme) modifikatsiooni, mida on
puhverdatud HEPESe ja naatriumvesinikkarbonaadiga ning
millele on lisatud hüpoksantiini, tümidiini, naatriumpüruvaati,
L-glutamiini või glutamaksi, mikroelemente ja kasvufaktoreid.
Proteiinide tase on minimaalne (15 Ķg/mL), sest ainsad
valgulised lisandid on insuliin ja transferriin. pH indikaatorina
on lisatud vähendatud kontsentratsioonis fenoolpunast.
10
eesti
Opti-MEM ® Vähendatud seerumivajadusega sööde Eagle'I MEMi modifikatsioon
Opti-MEM ® I võib enne kasutamist lisada 2merkaptoetanooli.
Et hõlbustada töötamist hübridoomidega,
on CaCl2 tase vähendatud 99,9 mg/L.
Kasutamisjuhised
Üleminek Opti-MEM ® I kasutamisele
Üleminek Opti-MEM ® I kasutamisele on hõlbus. Suurema
osa rakenduste puhul ei ole Opti-MEM ® I üleminekuks ja
seega seerumlisandi koguse 50% vähendamiseks vaja
teostada mitte mingisuguseid võõrutamistoiminguid.
Ülemineku võib läbi viia lihtsalt rakke tsentrifuugides ja
tõstes need pärast supernatandi ärakallamist vähendatud
koguse seerumlisandiga varustatud Opti-MEM ® I söötmesse.
(Vt rakenduste osa tabeleid seerumlisandi koguse
tüüpvähendamise kohta). Minimaalse võõrutamise abil on
võimalik seerumlisandi kogust veelgi vähendada. Iga
konkreetse rakenduse puhul tuleb lisatava seerumi
optimaalse koguse kindlaksmääramisel võtta arvesse
soovitud näitajaid (kasvu ergutamine, sekundaarsete
metaboliitide teke jne). Opti-MEM ® I pikaajalisel kasutamisel
rakuliinide säilitamiseks ei ole täheldatud rakkude elujõu ega
kasvukiiruse vähenemist. Ärge hoidke söödet otsese
päevavalguse käes.
2-merkaptoetanooli kasutamine
2-merkaptoetanool on redutseeriv agent, mis on ilmutanud
teatavate rakuliinide puhul võimet suurendada kasvu 1 ,
plaatkülvi tulemusrikkust 2 ja/või antikehade sünteesi 3 . Sellise
nähtuse kineetika ei ole veel täiesti arusaadav. Suurema osa
rakenduste puhul ei ole 2-merkaptoetanooli lisamine vajalik.
Kuna Opti-MEM ® I saab kasutada väga mitmesugustes
rakendustes ja suure arvu rakutüüpidega, oleks õige anda
hinnang 2-merkaptoetanooli lisamise kasulikkusele lähtudes
antud konkreetsest rakendusest.
2-merkaptoetanool on saadaval eraldi 1000X
kontsentraadina (5,5 x 10 -2 M) Dulbecco fosfaatpuhvriga
soolalahuses (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline) ilma
kaltsiumi ja magneesiumita (katalooginumber 21985) 50 mL
mahutites. 2-merkaptoetanooli võib lisada Opti-MEM ® I
vahetult enne söötme kasutamist. Pärast 2-merkaptoetanooli
lisamist jääb Opti-MEM ® I stabiilseks kaheks kuuks, kui selle
aja jooksul ei jõua kätte Opti-MEM ® I või 2merkaptoetanooli
tooteetiketile märgitud kõlblikkusaja
lõppkuupäev.
Soovi korral lisage 500 mL Opti-MEM ® I kohta aseptiliselt
0,5 mL 2-merkaptoetanooli (1000X). Ärge pipeteerige suu
abil! Segage söödet hoolikalt (aga ärge raputage). 2merkaptoetanooli
kasutamata jäänud osa säilitage tihedasti
suletud originaalmahutis. 2-merkaptoetanooli
lõppkontsentratsioon Opti-MEM ® I peab olema 5,5x10 -5 M.
Informatsioon rakenduste kohta
Valdavat osa tavapärasel seerumilisandiga söötmel
kultiveeritavaid rakke on võimalik viia vahetult üle
Opti-MEM ® I, millega kaasneb seerumikoguse vähenemine
vähemalt 50% ulatuses.
Seerumivajaduse veelgi suuremat vähenemist on täheldatud
mitmesuguste hiirlaste müeloomide (SP2/0-Ag14, P3X63-
Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) ja tuletislike hübridoomide puhul.
Ühtlasi oleme saavutanud seerumikoguse tunduva
vähendamise normaalsete ja kasvajatest pärinevate

fibroblastide ja epiteelirakkude kasvatamisel. Kasutamisel
liibuvate rakuliinidega ja vähem kui 2% seerumilisandiga või
mõnes pöörlevate pudelite sarnases segamissüsteemis tuleb
söötmele lisada täiendavalt 100 mg/L CaCl 2.
Invitrogeni teostatud uuringute käigus on kindlaks tehtud, et
Opti-MEM ® I kasutamisel on võimalik teatavate rakuliinide
puhul vähendada veiselooteseerumi lisandite kogust
alljärgnevas tabelis esitatud tasemeni, säilitades samal ajal
rakkude kasvukiiruse, mis on võrreldav suurema
seerumilisandiga alussöötme kasutamisel saavutatava
kasvukiirusega.
Rakutüübid % veiselooteseerumit Opti-MEM ® I kogusest
Hübridoomtehnoloogia – hiire- ja inimrakud
Fusioon 4
Kloonimine
Kasvu- ja antikehade toodang –
2 – 4
müeloomid ja tuvastatud hübridoomid 0,5–2
Diploidfibroblastide rakuliinid 2–4
Primaarsed fibroblastid 2–4
Rottide ja hamstrite looterakuliinid 2
Lümfoblastoidide rakuliinid 0,5–2
Ahvineerurakud 4
Inim- ja veiseloote neerurakud
Ka teiste imetajate seerumite lisamisel Opti-MEM
2–4
® I on
saavutatud tähelepanuväärseid tulemusi. Opti-MEM ® I,
millele on lisatud 4 % mõnda alternatiivset seerumit, on
osutunud alljärgnevate rakenduste puhul sama tõhusaks või
mõnel juhul veelgi tõhusamaks kui alussööde, millele on
lisatud 10 % veiselooteseerumit:
Rakendus Rakuliin Alternatiivne seerum 4%
Kasvusoodustaja Sp2/0-Ag14 (Sp2) Vasikas, hobune
AE-1 (Sp2-tekkeline hübridoom) Vasikas, hobune
CHO Hobune
BHK-21 Vasikas, hobune
Kloonimine Sp2 Vasikas, vastsündinud vasikas, hobune
P3x63-Ag8.653 (653) Vasikas, vastsündinud vasikas, hobune
Külvamine 653 Vasikas, hobune
BHK-21 Vasikas, hobune
Monokloonsete
CHO Vasikas, vastsündinud vasikas
antikehade tootmine AE-1 Vasikas, vastsündinud vasikas, hobune
Mõningatel uuringutel on Opti-MEM ® I andnud
elektroporatsioonil tulemuseks suurema siirdegeeni
ekspressiooni ja raku eluvõime kui tüüpilised
elektroporatsioonisöötmed. Opti-MEM ® I koos 2merkaptoetanooliga
parandab uurimistulemuste kohaselt
transfektsiooni efektiivsust CV-1 ja COS 1 rakkudel, mida on
transfereeritud ahvi SV-40-saranaste promootorvektoritega. 4,5
Meil on kavas korrapäraselt ajakohastada informatsiooni selle
kohta, millised on Opti-MEM ® I kasutamise tingimused
erinevates rakendustes konkreetsete rakuliinide puhul. Me
oleksime Opti-MEM ® I kasutavatele uurijatele tänulikud, kui
nad edastaksid oma kogemused Invitrogenile, nii et hangitud
informatsiooni saaks teadlaste hulgas levitada.
Lisandid vähendatud komponentide hulgaga söötme kasutamisel
Opti-MEM ® I vähendatud komponentide hulgaga variandi
kasutamisel saavutatakse originaalkoostisele vastav lisandi
kontsentratsioon juhul, kui kasutatakse:
Katalooginumber 11058: fenoolpunane 0,00160 gm/L
Kvaliteedi kontrollimine
Opti-MEM ® I puhul kontrollitakse pH-d, osmolaalsust,
endotoksiinide, bakterite, seente ja mükoplasma sisaldust.
Endotoksiinide tase on alla 1,0 EU/mL.
Kõikidele Opti-MEM ® I tootepartiidele antakse hinnang
tundlike kvantitatiivsete meetodite abil, et teha kindlaks
söötme suutlikkus toetada mõne hiiremüeloomi rakuliini
kloonimist ja liibuvate rakuliinide kasvu üle mitme
subkultuuri. Opti-MEM ® I testitavaid partiisid, millele on
lisatud 2% (CHO kasvatamisel) ja 4% (Sp2 kloonimisel)
seerumit, võrreldakse eelnevalt heaks kiidetud Opti-MEM ® I
kontollpartiidega.
GIBCOTM vedeltooteid rakukultuuride jaoks valmistatakse
aseptilise tootmisprotsessiga, mille kõikide etappide puhul on
kantud hoolt selle eest, et tooted vastaksid tööstusharu
standardi 10. steriilsustasemele-3 – st toote reostumisaste ei
tohi olla valmistamise käigus suurem kui 1/1000.Veelgi
kõrgemat steriilsustaset (10-6 või sellest kõrgem) ei ole
võimalik saavutada ilma lõppsteriliseerimiseta, see aga võib
kahjustada rakukultuuritoodete efektiivsust.
Säilitamine
Kuna õige pakendamine on keemiliselt määratletud söötmete
puhul ülimalt suure tähtsusega, soovitame kasutada toote
pikaajaliseks säilitamiseks originaalmahuteid.
Säilitage söötme optimaalse efektiivsuse saavutamiseks
Opti-MEM ® I enne kasutamist pimedas ja temperatuuril + 2
kuni 8 °C.
Opti-MEM ® I on saadaval ka ökonoomsel pulbrilisel kujul.
Üksikasjadega tutvuge GIBCOTM tootekataloogi kaudu või
pöörduge Invitrogeni müügiesindaja poole.
Viited:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Täiendava informatsiooni või tehnilise abi saamiseks seoses
selle või mõne teise GIBCOTM tootega võtke ühendust
tehnilise teeninduse osakonnaga meiliaadressil
eurotech@invitrogen.com või otsige GIBCOTM tootekataloogist üles firma teie piirkonna telefoninumbrid.
Võite astuda ühendusse ka oma Invitrogeni müügiesindajaga
või vaadata meie veebisaiti aadressil www.invitrogen.com
Diagnostiliseks kasutamiseks in vitro.
ETTEVAATUST: Toode ei ole mõeldud kasutamiseks
inimeste või loomade ravimisel. Kasutamine
mõnel muul otstarbel peale nende, mis on
märgitud tooteetiketile, võib olla vastuolus
kohalike seadustega.
* Ainuüksi uurimisotstarbeks
ETTEVAATUST: Toode ei ole mõeldud kasutamiseks
inimeste või loomade haiguste
diagnoosimisel või nende ravimisel.
11

HUOMAUTUS: Ihmislähtöiset materiaalit eivät reagoi
(luovuttajatasolla) HIV 1 & 2 -vasta
aineisiin, HCV-vasta-aineeseen, eivätkä
HBsAg-antigeeniin. Käsiteltävä
vakiintuneiden bioturvallisuuskäytäntöjen
mukaisesti.
Luettelonro.: 31985 100 ml sisältää L-glutamiinia
Komponenttivajeiset mediumit:
500 ml sisältää L-glutamiinia
Luettelonro.: *11058 500 ml ilman fenolipunaa
51985 500 ml sisältää GlutaMAX‘ I:tä
Säilytysolosuhteet: 2–8°C pimeässä.
Käyttöikä: Katso tuotteen etiketistä viimeinen käyttöpäivä.
HUOMAA: Luettelonumeron 11058 osalta pitää myös
katsoa alla olevaa kohtaa
komponenttivajeisen mediumin
suplementoinnista.
Opti-MEM ® I on monipuolinen, kemiallisesti määritelty
mediumi, jonka koostumus vähentää huomattavasti
nisäkässolujen in vitro -viljelyyn tarvittavan seerumin määrää.
Opti-MEM ® I on monikäyttöinen mediumi, joka on
osoittautunut hyödylliseksi seerumin tarpeen vähentämisessä
monenlaisia solulinjoja ja sovelluksia käytettäessä. Se on
osoittautunut tehokkaaksi sekä adherenttien että eiadherenttien
solulinjojen kasvattamisessa ja ylläpidossa. Kun
siihen lisätään 2-4 prosenttia naudan sikiön seerumia tai
vaihtoehtoisia seerumeja, Opti-MEM ® I tukee
lisääntymisnopeuksia ja enimmäissolutiheyksiä, jotka ovat
vertailukelpoisia ja joissain tapauksissa parempia kuin
tavanomaisilla mediumeilla, joihin on lisätty 10 % naudan
sikiön seerumia. Suhteellisen helppokasvuisia solulinjoja
voidaan ylläpitää pitkäaikaisessa viljelyssä vielä
huomattavammalla seerumin vähennyksellä. Jos käytetään
adherentteja solulinjoja ja alle 2 prosentin seerumilisäystä, tai
sekoitusjärjestelmiä kuten kiertopulloja, mediumiin pitää
lisätä vielä 100 mg/l CaCl2.
Opti-MEM ® I:n monipuolisuus eri solutyyppien
kasvatuksessa tekee tästä mediumista ihanteellisen valinnan
moniin soluviljelytarpeisiin.
Opti-MEM ® I:n tuotantoon käytetyt raaka-aineet on
seulottu GIBCOTM :n tinkimättömien laatuvaatimusten
mukaisesti. Lopullisen mediumin toimivuus on testattu sen
varmistamiseksi, että tutkimus- ja tuotantosovelluksiin
vaadittava erien välinen yhtenäisyys säilyy.
Opti-MEM ® I:n käyttöikä on vertailukelpoinen tavanomaisiin
glutamiinia sisältäviin formulaatioihin.Tämä stabiilius sallii
laboratorioiden säilyttää ja ylläpitää OPTI-MEM I varastoja,
jotka vastaavat laboratorion rutiinikäytäntöjä.
Koostumus
Opti-MEM ® I on Eaglen MEM-liuoksen muunnos, joka on
puskuroitu HEPESillä ja natriumbikarbonaatilla ja johon on
lisätty hypoksantiinia, tymidiiniä, natriumpyruvaattia, Lglutamiinia
tai GlutaMAXia, hivenaineita ja kasvutekijöitä.
Proteiinitaso on vähäinen (15 mg/ml) insuliinin ja
transferriinin ollessa ainoat proteiinilisät. Fenolipunaa on
sisällytetty vähäisenä väkevyytenä pH indikaattoriksi.
Opti-MEM ® I:een voidaan lisätä 2-merkaptoetanolia ennen
12
Suomi
Opti-MEM ® vähäseeruminen mediumi MEM:n (Eaglen) muunnos
käyttöä. CaCl2 taso vähenee 99,9 mg/l hybridoomien kanssa
työskentelyä helpottamaan.
Käyttöohjeet
Siirtyminen Opti-MEM ® I:een
Opti-MEM ® I:een siirtyminen on helppoa. Useimmissa
sovelluksissa ei tarvita vieroitustoimenpiteitä siirryttäessä
Opti-MEM ® I:een, jolloin seerumilisäyksen tarve vähenee 50
prosentilla.. Siirtyminen voidaan suorittaa yksinkertaisesti
sentrifugoimalla solut, kaatamalla supernatantti pois, ja
suspensoimalla ne uudestaan alhaisempaa seerumilisää
tarvitsevaan Opti-MEM ® I:een. (Katso Sovellukset osan
taulukkoja, joista näkyy tyypillisiä seerumilisän vähennyksiä).
Seerumia voidaan vähentää vielä lisää, vähäisellä
vieroituksella. Kunkin sovelluksen optimaalinen seerumilisä
pitää määritellä odotettujen toimintaominaisuuksien
perusteella (kasvun edistäminen, toisiometaboliitin tuotanto,
jne.) Opti-MEM ® I:n pitkällinen käyttö solulinjojen
ylläpidossa ei ole osoittanut viabiliteetin tai kasvunopeuden
heikentymistä. Pidä Opti-MEM ® I pois suorasta valosta.
2-merkaptoetanolin käyttö
2-merkaptoetanoli on pelkistysaine, jonka on osoitettu
parantavan tiettyjen solulinjojen kasvua1 ,
leviämistehokkuutta2 ja/tai vasta-aineiden synteesiä3 .Tämän
ilmiön kinetiikkaa ei ymmärretä vielä täysin. Useimpiin
sovelluksiin ei tarvita 2-merkaptolietanolin lisäystä.
Koska Opti-MEM ® I toimii monenlaisissa sovelluksissa
lukuisilla solutyypeillä, on järkevää arvioida 2merkaptoetanolin
lisäyksen hyödyllisyyttä tiettyyn
sovellukseen.
2-merkaptolietanolia on saatavana erikseen 1000x tiivisteenä
(5,5x10 -2M) Dulbeccon fosfaattipuskuroidussa
suolaliuoksessa ilman kalsiumia ja magnesiumia 21985, 50 ml.
Sitä voidaan lisätä Opti-MEM ® I:een välittömästi ennen
käyttöä. Opti-MEM ® I on 2-merkaptoetanolin lisäyksen
jälkeen stabiili kaksi kuukautta sillä ehdolla, ettei tämä aika
ylitä Opti-MEM ® I:n eikä 2-merkaptoetanolin etikettiin
merkittyä viimeistä käyttöpäivää.
Haluttaessa lisätään 0,5 ml 2-merkaptoetanolia (1000x)
aseptisesti kuhunkin 500 ml:aan Opti-MEM ® I:ä. Älä pipetoi
suulla. Sekoita perusteellisesti huljuttamalla (älä ravista).
Säilytä käyttämättömät 2-merkaptoetanolin annokset tiiviisti
suljettuina alkuperäisessä astiassa. 2-merkaptoetanolin
lopullinen konsentraatio on 5,5x10 -5 M.
Tietoa sovelluksista
Useimmat rutiininomaisesti seerumilla suplementoidussa
mediumissa viljellyt solut voidaan siirtää suoraan
Opti-MEM ® I:een, jolloin seerumin määrä laskee vähintään 50%.
Seerumin tarvetta on saatu vähennettyä vielä huomattavasti
enemmän erilaisilla hiiren myeloomilla (SP2/0-Ag14, P3X63-
Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) sekä niistä johdetuilla hybridoomilla.
Olemme myös saavuttaneet merkittäviä normaali- ja
tuumorialkuperäisten fibroblasti- ja epiteliaalisolujen
kasvatukseen tarvittavien seerumimäärien vähennyksiä. Jos
käytetään adherentteja solulinjoja ja alle 2 prosentin
seerumilisäystä, tai sekoitusjärjestelmiä kuten kiertopulloja,
mediumiin pitää lisätä vielä 100 mg/l CaCl2.

GIBCOTM :n tutkimukset ovat todenneet, että seuraavilla
solulinjoilla naudan sikiön seerumin (FBS) lisäystä voidaan
vähentää Opti-MEM ® I:tä käytettäessä alla ilmoitettuihin
tasoihin asti, samalla säilyttäen kasvunopeuksia, jotka
vastaavat suuremmilla seerumimäärillä käytettäviä
perusmediumeja.
Solutyypit % FBS Opti-MEM ® I:ssä
Hybridooma-teknologia – Hiiri ja ihminen
Fuusio 4
Kloonaus
Kasvu ja vasta-ainetuotanto –
2 - 4
Myeloomat ja vakiintuneet hybridoomat 0,5 - 2
Diploidien fibroblastien solulinjat 2 - 4
Ensiöfibroblastit 2 - 4
Rottien ja hamsterien alkioiden solulinjat 2
Lymfoblastoidit solulinjat 0,5 - 2
Apinan munuaissolut 4
Ihmisen ja naudan alkion munuaissolut 2 - 4
Vaihtoehtoisten nisäkässeerumien lisäys Opti-MEM ® I:een
on myös antanut vaikuttavia tuloksia. Opti-MEM ® I, johon
on lisätty 4 % vaihtoehtoisia seerumeja, on toiminut
vastaavasti ja eräissä tapauksissa paremmin kuin
perusmediumit, joihin on lisätty 10 % FBS:a, seuraavissa
sovelluksissa:
Sovellus Solulinja 4 % vaihtoehtoista seerumia
Kasvun edistäminen Sp2/0-Ag14 (Sp2) Vasikka, Hevonen
AE-1 (Sp2.sta johdettu hybridooma) Vasikka, Hevonen
CHO Hevonen
BHK-21 Vasikka, Hevonen
Kloonaus Sp2 Vasikka,Vastasyntynyt vasikka, Hevonen
P3x63-Ag8.653 (653) Vasikka,Vastasyntynyt vasikka, Hevonen
Vasikka, Hevonen
Leviäminen 653 Vasikka, Hevonen
BHK-21 Vasikka, Hevonen
CHO Vasikka,Vastasyntynyt vasikka
MAb:n tuotanto AE-1 Vasikka,Vastasyntynyt vasikka, Hevonen
Rajoitetuissa tutkimuksissa Opti-MEM ® I:n elektroporaatio
on tuottanut parempia transienttigeenien ilmentymistuloksia
ja solujen viabiliteettia kuin tyypillisten
elektroporaatiomediumien käyttö. Opti-MEM ® I:n, jota on
käytetty 2-merkaptoetanolin kanssa, on ilmoitettu lisäävän
transfektion tehokkuutta CV-1 ja COS 1 soluissa, jotka on
transfektoitu apinan SV-40:n kaltaisella edistämisvektorilla.
4,5
Tarkoituksenamme on päivittää ajoittain Opti-MEM ® I:n
sovelluksia tiettyihin soluviljelytarpeisiin.Arvostaisimme sitä,
jos Opti-MEM ® I.tä käyttävät tutkijat kertoisivat
kokemuksistaan GIBCOTMlle, jotta saavutetut tiedot voidaan
antaa koko tiedeyhteisön käyttöön.
Komponenttivajeisen mediumin suplementointi
Käytettäessä Opti-MEM ® I:n komponenttivajeista
muunnosta seuraava lisäaineen konsentraatio vastaa
alkuperäistä koostumusta:
Luettelo nro. 11058 fenolipuna 0,00160 gm/l
Laadunvalvonta
Opti-MEM ® I käy läpi pH-, osmolaliteetti-, endotoksiini-,
bakteeri-, sieni- ja mykoplasmatestit. Endotoksiinin taso on
alle 1,0 EU/ml.
Kunkin Opti-MEM ® I:n erän kyky tukea hiiren myelooman
solulinjan kloonaustehokkuutta sekä adherentin solulinjan
useiden alaviljelyjen kasvua arvioidaan herkkiä kvantitatiivisia
kokeita käyttämällä. Opti-MEM ® I:n 2 prosentin (CHO:n
kasvatus) ja 4 prosentin (Sp2:n kloonaus) seerumilisäystä
käyttäviä testieriä verrataan aiemmin hyväksyttyyn
Opti-MEM ® I kontrollierään.
GIBCOTMn soluviljelynestetuotteet valmistetaan aseptisella
prosessilla, jonka jokainen vaihe on validoitu sen
varmistamiseksi, että kaikki tuotteet täyttävät alan
steriiliyden vakiovarmistustason 10-3 ; eli tuotteiden
kontaminaatiotason voidaan osoittaa olevan vähemmän kuin
1 per 1000 yksikköä valmistusprosessin aikana. Steriiliyden
varmistuksen korkeinta tasoa (sama tai suurempi kuin 10-6 )
ei voi saavuttaa ilman loppusterilointia, mikä on haitallista
soluviljelytuotteiden toimivuudelle.
Säilytys
Koska kemiallisesti määriteltyjen mediumien kunnollinen
pakkaus on äärimmäisen tärkeää, suosittelemme
alkuperäisten astioiden käyttöä kokoaikaiseen säilytykseen.
Optimitoimivuuden varmistamiseksi ennen käyttöä
Opti-MEM ® I:tä pitää säilyttää 2 – 8°C:ssa pimeässä.
Opti-MEM ® I on myös saatavana edullisessa
pulverimuodossa. Katso lisätietoja GIBCOTMn luettelosta tai
kysy Invitrogenin myyntiedustajalta.
Kirjallisuusviitteet:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for
Propagation of Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals.
Advances in Biotechnological Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss,
Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a
Serum- Free Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and
Its Application to the Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical
Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension
Cultures. Selected Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Lisätietojen tai teknisen tuen saamiseksi tälle tai muille
GIBCOTM tuotteille, ota yhteyttä teknisen palvelun osastoon
osoitteessa eurotech@invitrogen.com, tai katso GIBCOTMn tuoteluettelosta alueesi paikalliset yhteyspuhelinnumerot.
Voit myös ottaa yhteyttä Invitrogen-myyntiedustajaan tai
käydä verkkosivustollamme osoitteessa www.invitrogen.com.
In vitro -diagnostiseen käyttöön.
HUOMAUTUS: Ei ihmisten tai eläinten terapeuttiseen
käyttöön. Muu kuin etiketin mukainen
käyttö voi loukata paikallisia lakeja.
*Vain tutkimuskäyttöön.
HUOMAUTUS: Ei tarkoitettu ihmisten tai eläinten
diagnostiseen tai terapeuttiseen käyttöön.
13

ATTENTION: Les matières d’origine humaine sont non
réactives (au niveau du donneur) vis-à-vis des
anticorps anti-VIH 1 et 2, anti-HCV et des
antigènes HBs. Manipuler conformément aux
pratiques de biosécurité établies.
N° de catalogue : 31985 100 ml avec de la L-glutamine
500 ml avec de la L-glutamine
Milieux privés d’un élément :
N° de catalogue : *11058 500 ml sans rouge de phénol
51985 500 ml avec GlutaMAX‘
Conditions de conservation : entre 2 et 8°C, dans l’obscurité. Durée
de conservation :Voir la date de péremption inscrite sur l’étiquette.
REMARQUE : Pour le numéro de catalogue11058, veuillez
vous référer à Supplémentation d’un milieu
privé d’un élément, ci-dessous.
Le milieu Opti-MEM ® I est un milieu à usages multiples,
chimiquement défini, formulé pour réduire de façon significative la
quantité de sérum nécessaire pour la culture in vitro de cellules de
mammifères.
Le milieu Opti-MEM ® I est un milieu multi usages dont l’utilité a été
démontrée dans le cadre de la réduction des besoins en sérum d’un
grand nombre de lignées cellulaires et d’applications. Son efficacité a
été montrée lors de la culture et de l’entretien des lignées cellulaires
adhérentes et non adhérentes. Lorsqu’il est additionné de 2 à 4 % de
sérum fœtal bovin ou d’autres sérums, le milieu Opti-MEM ® I
permet des vitesses de prolifération et des densités cellulaires
maximales comparables, et dans certains cas supérieures, à celles
obtenues avec des milieux conventionnels additionnés de 10 % de
sérum fœtal bovin. Les lignées cellulaires relativement exigeantes
peuvent être conservées dans des cultures à long terme avec une
réduction encore plus importante des besoins en sérum. Lors de
l’utilisation de lignées cellulaires adhérentes et d’une supplémentation
en sérum inférieure à 2 % ou d’un système d’agitation de type flacons
roulants, le milieu doit être additionné de CaCl2 100 mg/l.
La diversité des usages du milieu Opti-MEM ® I dans le cadre de la
propagation de divers types cellulaires, fait que ce milieu répond de
façon optimale aux besoins de nombreuses cultures cellulaires.
Les matières premières utilisées lors de la production du milieu
Opti-MEM ® I font l’objet d’un dépistage conforme aux standards de
qualité rigoureux de GIBCOTM . Les performances du milieu complet
sont testées afin de garantir l’homogénéité entre lots nécessaire aux
applications de recherche et de production.
La durée de conservation du milieu Opti-MEM ® I est comparable à
celle des formulations conventionnelles contenant de la glutamine.
Cette stabilité permet aux laboratoires de stocker et de conserver
des quantités de milieu Opti-MEM ® I compatibles avec une
utilisation en routine.
Formulation
Le milieu Opti-MEM ® I est une modification du Milieu Essentiel
Minimal de Eagle, tamponné par du HEPES et du bicarbonate de sodium,
et additionné d’hypoxanthine, de thymidine, de pyruvate de sodium, de
L-glutamine ou de GlutaMAX, d’oligo-éléments et de facteurs de
croissance. La concentration en protéines est minimale (15 µg/ml),
l’insuline et la transferrine étant les deux seules protéines ajoutées. Du
rouge de phénol est incorporé à faible concentration pour servir
d’indicateur de pH. Le milieu Opti-MEM ® I peut être additionné de
2-mercaptoéthanol avant emploi. La concentration en CaCl2 est réduite
à 99,9 mg/l pour s’adapter au travail avec des hybridomes.
14
Français
Milieu Opti-MEM ® I à apport en sérum réduit modification du MEM (Eagle)
Instructions d’utilisation
Passage à Opti-MEM ® I
Le passage à Opti-MEM ® I est facile. Pour la plupart des
applications, aucune procédure de sevrage n’est nécessaire pour
parvenir à une réduction de 50 % de la supplémentation en sérum lors
du passage à Opti-MEM ® I. Le passage se réalise simplement par
centrifugation des cellules, décantation du surnageant et remise en
suspension dans le milieu Opti-MEM ® I avec une supplémentation
en sérum réduite (voir la réduction classique de la supplémentation en
sérum dans les tableaux de la section Applications). Une réduction
additionnelle de la supplémentation en sérum peut être obtenue avec
un sevrage minime. La supplémentation en sérum optimale, adaptée à
chaque application spécifique, doit être déterminée sur la base des
performances attendues (stimulation de la croissance, production de
métabolites secondaires, etc.). L’emploi à long terme du milieu Opti-
MEM ® I dans le cadre de l’entretien de lignées cellulaires n’a laissé
apparaître aucune diminution de la viabilité ou de la vitesse de
croissance. Conserver le milieu Opti-MEM ® I à l’abri de la lumière
directe.
Emploi du 2-mercaptoéthanol
Le 2-mercaptoéthanol est un agent réducteur qui permet d’améliorer
la croissance1 , l’efficacité de l’étalement2 et/ou la synthèse d’anticorps3 de lignées cellulaires spécifiques. La cinétique de ce phénomène n’est
pas encore totalement connue. La plupart des applications ne
nécessitent pas une supplémentation en 2-mercaptoéthanol.
Dans la mesure où le milieu Opti-MEM ® I est utilisable dans une
vaste gamme d’applications avec de nombreux types cellulaires, il est
prudent d’évaluer, pour une application donnée, l’utilité d’une
supplémentation en 2-mercaptoéthanol.
Le 2-mercaptoéthanol est disponible séparément, sous la forme d’un
concentré 1000X (5,5 x 10 –2 M) dans une solution saline tampon
phosphate de Dulbecco exempte de calcium et de magnésium, code
21985, 50 ml. Il peut être ajouté au milieu Opti-MEM ® I
immédiatement avant emploi. Le milieu Opti-MEM ® I est stable
pendant deux mois après addition du 2-mercaptoéthanol, à condition
qu’au cours de cette période les dates de péremption figurant sur les
étiquettes du milieu Opti-MEM ® I ou du 2-mercaptoéthanol ne
soient pas dépassées.
Au besoin, ajouter de façon aseptique 0,5 ml de 2-mercaptoéthanol
(1000X) pour 500 ml de milieu Opti-MEM ® I. Ne pas pipeter avec
la bouche. Mélanger soigneusement par rotation (ne pas agiter).
Conserver le 2-mercaptoéthanol inutilisé dans son récipient d’origine
bien fermé. La concentration finale en 2-mercaptoéthanol dans le
milieu Opti-MEM ® I sera de 5,5x10 –5 M.
Informations relatives aux applications
La plupart des cellules cultivées en routine sur des milieux
supplémentés en sérum peuvent être directement transférées sur le
milieu Opti-MEM ® I avec une réduction de la supplémentation en
sérum d’au minimum 50 %.
Une importante réduction supplémentaire des besoins en sérum a été
obtenue avec divers myélomes murins (SP2/0-Ag14, P3X63-Ag8.653,
P3-NS1-Ag4-1) et hybridomes dérivés.
Nous avons également obtenu une réduction significative des quantités
de sérum nécessaires aux fibroblastes et aux cellules épithéliales en
croissance, d’origine normale ou tumorale. Lors de l’utilisation de
lignées cellulaires adhérentes et d’une supplémentation en sérum
inférieure à 2 % ou d’un système d’agitation de type flacons roulants, le

milieu doit être additionné de CaCl2 100 mg/l.
Les services de recherche GIBCOTM ont établi que la supplémentation
avec du sérum fœtal bovin (FBS) pouvait être réduite aux
concentrations indiquées ci-dessous pour les lignées cellulaires
suivantes en utilisant le milieu Opti-MEM ® I tout en conservant des
vitesses de croissance comparables à celles obtenues avec un milieu
basal supplémenté avec des concentrations en sérum plus élevées.
Types de cellules % de FBS dans le milieu Opti-MEM ® I
Technologie de l’hybridome – Souris et être humain
Fusion 4
Clonage
Croissance et production d’Ac –
2 - 4
Myélomes et hybridomes établis 0,5 - 2
Lignées cellulaires de fibroblastes diploïdes 2 - 4
Fibroblastes primaires 2 - 4
Lignées cellulaires d’embryon de rat et de hamster 2
Lignées cellulaires lymphoblastoïdes 0,5 - 2
Cellules rénales de singe 4
Cellules rénales embryonnaires humaines et bovines 2 - 4
La supplémentation du milieu of Opti-MEM ® I avec des sérums
d’autres espèces de mammifères a également donné des résultats
remarquables. Le milieu Opti-MEM ® I supplémenté avec 4 % de
sérums d’autres espèces de mammifères a donné des résultats
comparables, et dans certains cas supérieurs, à ceux d’un milieu basal
supplémenté avec 10 % de FBS pour les applications suivantes:
Application Lignée cellulaire Autre sérum à 4 %
Promotion de la croissance Sp2/0-Ag14 (Sp2) Veau, cheval
AE-1 (hybridome dérivé Sp2) Veau, cheval
CHO Cheval
BHK-21 Veau, cheval
Clonage Sp2 Veau, veau nouveau-né, cheval
P3x63-Ag8.653 (653) Veau, veau nouveau-né, cheval
Veau, cheval
Etalement 653 Veau, cheval
BHK-21 Veau, cheval
CHO Veau, veau nouveau-né
Production d’AcM AE-1 Veau, veau nouveau-né, cheval
Lors d’études limitées, l’électroporation dans le milieu Opti-MEM ® I
a conduit à des niveaux plus élevés de l’expression génétique
transitoire et de la viabilité cellulaire par rapport à un milieu
d’électroporation classique. Le milieu Opti-MEM ® I, supplémenté en
2-mercaptoéthanol, améliore l’efficacité de la transfection dans les
cellules CV-1 et COS 1 transfectées à l’aide d’un vecteur de
promotion de type SV-40 de singe. 4,5
Nous comptons mettre à jour périodiquement les applications du
milieu Opti-MEM ® I aux besoins cellulaires spécifiques. Nous
apprécierions que les chercheurs qui utilisent le milieu Opti-MEM ®
I partagent leurs expériences avec GIBCOTM afin que ces informations
puissent être mises à la disposition de la communauté scientifique.
Supplémentation des milieux privés d’un élément :
Lors de l’utilisation d’une variante du milieu Opti-MEM ® I privée
d’un élément, la concentration de la supplémentation suivante sera
cohérente avec la formulation d’origine :
Cat. N° 11058 Rouge de phénol à 0,00160 mg/l
Contrôle de qualité
Le milieu Opti-MEM ® I a été soumis à des contrôles de pH, de
l’osmolalité, de la présence d’endotoxines, des contrôles bactériens et
fongiques et de la présence de mycoplasmes. La concentration en
endotoxine est inférieure à 1,0 UE/ml.
Tous les lots de milieu Opti-MEM ® I sont évalués à l’aide de
dosages quantitatifs sensibles afin de garantir leur capacité à permettre
le clonage efficace d’une lignée cellulaire de myélome murin et la
croissance de sous-cultures multiples d’une lignée cellulaire adhérente.
Les lots de milieu Opti-MEM ® I testés pour des supplémentations
en sérum de 2 % (croissance CHO) et 4 % (clonage Sp2) sont
comparés à un lot de contrôle Opti-MEM ® I préalablement agréé.
Les produits liquides GIBCOTM pour cultures cellulaires sont préparés
selon un procédé aseptique dont chaque étape a été validée pour
garantir que tous les produits soient conformes au niveau 10-3 du
standard industriel de stérilité, c’est-à-dire que les produits ne
présentent un niveau de contamination que dans 1 cas sur 1000 au
cours du processus de fabrication. Le niveau le plus élevé en matière
de stérilité (supérieur ou égal à 10-6 ) ne peut pas être atteint sans
stérilisation terminale, cette dernière étant nuisible pour les
performances de ces produits pour culture cellulaire.
Conservation
Le conditionnement des milieux chimiquement définis étant de la plus
grande importance, nous recommandons l’emploi des récipients
d’origine pour une conservation à long terme.
Pour permettre des performances optimales, le milieu Opti-MEM ® I
doit être conservé à 2-8 °C, dans l’obscurité, avant emploi.
Le milieu Opti-MEM ® I est également disponible sous forme de
poudre, plus économique. Pour plus de détails, veuillez-vous référer
au catalogue GIBCOTM ou prendre contact avec votre
représentant Invitrogen.
Références
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Pour de plus amples informations ou pour une assistance technique
sur ce produit ou d’autres produits GIBCOTM ,veuillez prendre contact
les Services techniques à l’adresse eurotech@invitrogen.com, ou vous
référer au catalogue des produits GIBCOTM où figurent les numéros de
téléphone de votre région.
Il est également possible de prendre contact avec vos représentants
Invitrogen ou notre site web à l’adresse www.invitrogen.com.
Pour utilisation diagnostique in vitro
ATTENTION: Ne pas utiliser dans un but thérapeutique
humain ou animal
Un emploi hors du cadre des indications précisées
sur l’étiquette est susceptible de tomber sous le
coup de la loi.
*Utiliser uniquement dans le cadre de recherches.
ATTENTION: Ne pas utiliser dans un but thérapeutique ou
diagnostique humain ou animal.
15

VORSICHT: Materialien menschlichen Ursprungs reagieren nicht auf
Anti-HIV 1 & 2,Anti-HCV und HBSAg (Spenderspiegel).
Umgang muss gemäß erprobter Biosicherheitspraktiken
erfolgen.
Kat. Nr.: 31985 100 ml mit L-Glutamin
500 ml mit L-Glutamin
Komponentenarme Medien:
Kat. Nr.: *11058 500 ml ohne Phenolrot
51985 500 ml mit GlutaMAX‘ I
Lagerbedingungen: Im Dunkeln bei 2 bis 8°C.
Lagerfähigkeit:Verfallsdatum siehe Produktetikett.
HINWEIS: Für Katalognummer 11058 siehe auch Supplementierung
mit komponentenarmen Medien weiter unten.
Opti-MEM ® I ist ein vielseitiges, chemisch definiertes
Medium, das zur signifikanten Reduzierung der für die
In-vitro-Kultivierung von Säugetierzellen erforderlichen
Serummenge formuliert wurde.
Opti-MEM ® I ist ein Mehrzweckmedium, das sich bei der
Reduzierung der Serumanforderungen einer großen Auswahl
von Zelllinien und Anwendungen hilfreich erwiesen hat. Es
hat sich beim Wachstum und bei der Pflege sowohl
adhärenter als auch nicht adhärenter Zelllinien als
wirkungsvoll gezeigt.Wenn es mit 2-4% fötalem Rinderserum
oder alternativen Seren supplementiert wird, unterstützt
Opti-MEM ® I die Proliferationsraten und die maximalen
Zelldichten in vergleichbarem Maße wie bei konventionellen
Medien, die mit 10% fötalem Rinderserum supplementiert
werden; in einigen Fällen ist es diesen konventionellen
Medien sogar überlegen. Relativ anspruchslose Zelllinien
können sogar bei noch substanziellerer Serumreduktion in
Langzeitkulturen erhalten werden. Bei der Verwendung
adhärenter Zelllinien und weniger als 2%
Serumsupplementierung oder bei einem angeregten System,
wie z.B. in Roller-Kulturflaschen, sollte das Medium weiterhin
mit 100mg/l CaCl2 supplementiert werden.
Die Vielseitigkeit von Opti-MEM ® I bei der Fortpflanzung
unterschiedlicher Zelltypen macht dieses Medium zur
optimalen Wahl für die Erfüllung vieler
Zellkulturanforderungen.
Die zur Herstellung von Opti-MEM ® I verwendeten
Rohmaterialien werden gemäß der strengen
Qualitätsnormen von GIBCOTM geprüft. Das vollständige
Medium wird einem Leistungstest unterzogen, um die für
Forschungs- und Produktionsapplikationen erforderliche
Konsistenz von Los zu Los zu gewährleisten.
Die Lagerfähigkeit von Opti-MEM ® I ist mit konventionellen
glutaminhaltigen Formulierungen vergleichbar. Diese
Stabilität erlaubt den Laboren, einen Lagerbestand an
Opti-MEM ® I vorrätig zu halten, der routinemäßigen
Laborpraktiken entspricht.
Formulierung
Opti-MEM ® I ist eine Modifikation des Minimal Essential
Medium von Eagle, die mit HEPES und Natriumbikarbonat
gepuffert und mit Hypoxanthin,Thymidin, Natriumpyruvat, L-
Glutamin oder GlutaMAX, Spurenelementen und
Wachstumsfaktoren supplementiert ist. Der Proteingehalt ist
minimal (15 mg/ml), wobei Insulin und Transferrin die
einzigen Proteinsupplementierungen sind. Phenolrot ist in
reduzierter Konzentration als pH-Wert-Indikator enthalten.
Opti-MEM ® I kann vor dem Gebrauch mit 2-
Mercaptoethanol supplementiert werden. Der CaCl2-Gehalt
16
Deutsch
Opti-MEM ® I Reduced Serum Medium Modifikation von Eagle’s MEM
ist zur Erleichterung der Arbeit mit Hybridomen auf 99,9
mg/l reduziert worden.
Gebrauchsanweisung
Umstellung auf Opti-MEM ® I
Die Umstellung auf Opti-MEM ® I ist einfach. Bei den
meisten Anwendungen sind keine Entwöhnungsverfahren
erforderlich, um bei der Umstellung auf Opti-MEM ® I eine
50%-Reduzierung bei der Serumsupplementierung zu
erreichen. Die Umstellung kann einfach durch Zentrifugieren
der Zellen, Dekantieren des Überstands und Resuspension
der Zellen in Opti-MEM ® I mit der reduzierten
Serumsupplementierung erfolgen (Typische Reduzierungen
bei der Serumsupplementierung siehe Tabellen im Abschnitt
Anwendungsinformationen). Eine zusätzliche Serumreduktion
kann mit minimaler Entwöhnung erzielt werden. Die
optimale Serumsupplementierung für jede spezifische
Anwendung muss auf der Grundlage der erwarteten
Leistungseigenschaften (Wachstumsförderung, sekundäre
Metabolitenproduktion usw.) bestimmt werden. Der
umfassende Einsatz von Opti-MEM ® I bei der Pflege von
Zelllinien hat keinerlei Verlust bei der Lebensfähigkeit oder
der Wachstumsrate gezeigt. Opti-MEM ® I muss vor direkter
Lichteinstrahlung geschützt werden.
Verwendung von 2-Mercaptoethanol
2-Mercaptoethanol ist ein Reduktionsmittel, von dem
nachgewiesen wurde, dass es Wachstum 1 , Effizienz beim
Anlegen von Plattenkulturen 2 und/oder Antikörpersynthese 3
spezifischer Zelllinien fördert. Die Kinetik dieses Phänomens
ist noch nicht vollständig verstanden. Die meisten
Anwendungen erfordern keine Supplementierung mit 2-
Mercaptoethanol.
Da Opti-MEM ® bei einer großen Auswahl von Anwendungen
mit zahlreichen Zelltypen wirkungsvoll ist, ist es sinnvoll, die
Nützlichkeit der Supplementierung mit 2-Mercaptoethanol auf
der Grundlage der spezifischen Anwendung zu bestimmen.
2-Mercaptoethanol ist separat als 1000X-Konzentrat (5,5x10
-2M) in phosphatgepufferter Kochsalzlösung von Dulbecco
ohne Kalzium und Magnesium (Kat. Nr. 21985) in Mengen
von 50 ml erhältlich. Es kann zu Opti-MEM ® I unmittelbar
vor dem Gebrauch hinzugegeben werden. Opti-MEM ® I ist
nach dem Hinzufügen von 2-Mercaptoethanol zwei Monate
lang unter der Voraussetzung stabil, dass dieser Zeitraum
nicht das auf den Etiketten von Opti-MEM ® I oder 2-
Mercaptoethanol angegebene Verfallsdatum überschreitet.
Falls erwünscht, können zu jeweils 500 ml Opti-MEM ® I 0,5
ml 2-Mercaptoethanol (1000X) aseptisch hinzugefügt
werden. Nicht mit dem Mund pipettieren. Durch Rühren
gründlich mischen (nicht schütteln). Unbenutztes 2-
Mercaptoethanol im Originalbehälter fest verschlossen
aufbewahren. Die endgültige Konzentration von 2-
Mercaptoethanol in Opti-MEM ® I beträgt 5,5x10 -5 mol/l.
Anwendungsinformationen
Die meisten routinemäßig in mit Serum supplementiertem
Medium kultivierten Zellen können bei einer
Mindestserumreduktion von 50% direkt in Opti-MEM ® I
übertragen werden.
Eine substanzielle weitere Reduzierung der
Serumsanforderungen wurde bei verschiedenen murinen
Myelomen (SP2/0-Ag14, P3X63-Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) und
Hybridomderivaten erzielt.

Wir haben außerdem eine signifikante Reduzierung bei der
für die Züchtung von Fibroblasten und Epithelzellen aus
normalem und Tumorgewebe erforderlichen Serummenge
beobachtet. Bei der Verwendung adhärenter Zelllinien und
weniger als 2% Serumsupplementierung oder bei einem
angeregten System, wie z.B. in Roller-Kulturflaschen, sollte
das Medium weiterhin mit 100mg/l CaCl2 supplementiert
werden.
Die GIBCO TM -Forschung hat herausgefunden, dass bei der
Verwendung von Opti-MEM ® I die Supplementierung mit
fötalem Rinderserum (FBS) unter Beibehaltung von
Wachstumsraten, die denen von Basalmedien mit höheren
Supplementierungsgraden entsprechen, auf die unten für die
folgenden Zelllinien angegebenen Konzentrationen reduziert
werden kann.
Zelltypen % FBS in Opti-MEM ® I
Hybridom-Technologie – Maus und Mensch
Fusion 4
Klonierung 2 - 4
Wachstum und Ab-Produktion – Myelome und nachgewiesene Hybridome 0,5 - 2
Diploide Fibroblastenzelllinien 2 - 4
Primäre Fibroblasten 2 - 4
Ratten- und Hamster-Embryozelllinien 2
Lymphoblastoide Zelllinien 0,5 - 2
Affen-Nierenzellen 4
Humane und Rinderembryonen-Nierenzellen 2 - 4
Die Supplementierung von Opti-MEM ® I mit alternativen
Säugetierseren hat ebenfalls eindrucksvolle Ergebnisse
gezeigt. Bei mit 4% alternativen Seren supplementiertem
Opti-MEM ® I wurde bei den folgenden Anwendungen eine
mit 10% FBS supplementierten Basalmedien vergleichbare
Leistung, in einigen Fällen sogar eine bessere Leistung,
nachgewiesen:
Anwendung Zelllinie Serumalternative (4%)
Wachstumsförderung Sp2/0-Ag14 (Sp2) Kalb, Pferd
AE-1 (Sp2- abgeleitetes Hybridom) Kalb, Pferd
CHO Pferd
BHK-21 Kalb, Pferd
Klonierung Sp2 Kalb, neugeborenes Kalb, Pferd
P3x63-Ag8.653 (653) Kalb, neugeborenes Kalb, Pferd
Kalb, Pferd
Anlegen v. Plattenkulturen 653 Kalb, Pferd
BHK-21 Kalb, Pferd
CHO Kalb, neugeborenes Kalb
MAb-Produktion AE-1 Kalb, neugeborenes Kalb, Pferd
In begrenzten Studien hat die Elektroporation in Opti-MEM ®
I höhere Grade der transienten Genexprimierung und
Zelllebensfähigkeit als bei typischen Elektroporationsmedien
ergeben. Es ist festgestellt worden, dass Opti-MEM ® I mit 2-
Mercaptoethanol die Transfektionseffizienz von mit einem
Affen-SV-40-ähnlichen Promotionsvektor transfizierten CV-1und
COS 1-Zellen verbessert. 4,5
Wir beabsichtigen, die Anwendungsinformationen für
Opti-MEM ® I bezüglich spezifischer Zellanforderungen
regelmäßig zu aktualisieren.Wir würden uns freuen, wenn
Forscher, die Opti-MEM ® I verwenden, ihre Erfahrungen
GIBCO TM mitteilen, damit die erlangten Informationen den
wissenschaftlichen Fachkreisen mitgeteilt werden können.
Supplementierung mit komponentenarmen Medien
Bei der Verwendung einer komponentenarmen Variation von
Opti-MEM ® I entspricht die folgenden Konzentration der
ursprünglichen Formulierung:
Kat. Nr. 11058 0,00160 g/l Phenolrot
Qualitätskontrolle
Opti-MEM ® I wird auf pH-Wert, Osmolalität, Endotoxine,
Bakterien, Pilze und Mykoplasmen untersucht. Der
Endotoxingehalt beträgt weniger als 1,0 EU/ml.
Jedes Los Opti-MEM ® I wird unter Verwendung
empfindlicher quantitativer Assays auf seine Fähigkeit zur
Förderung der Klonierungseffizienz einer murinen
Myelomzelllinie und des Wachstums über mehrere
Subkulturen einer adhärenten Zelllinie überprüft. Testlose
von Opti-MEM ® I mit 2% (CHO-Wachstum) und 4% (Sp2-
Klonierung) Serumsupplementierung werden mit einer zuvor
genehmigten Opti-MEM ® I-Kontrolle verglichen.
GIBCOTM-Zellkultur-Flüssigprodukte werden in einem
aseptischen Prozess hergestellt, bei dem jeder Schritt
validiert worden ist, um sicherzustellen, dass alle Produkte
den Branchenstandard bei der Sterilitätsgarantie von 10-3 erfüllen, d.h. das Produkt zeigt einen Kontaminationsgrad von
nicht mehr als 1 von 1000 Einheiten während des
Herstellungsverfahrens. Der höchste Grad der
Sterilitätsgarantie (gleich oder größer 10-6 ) kann nicht ohne
abschließende Sterilisierung erreicht werden, die einen
schädlichen Einfluss auf die Leistung der
Zellkulturprodukte besitzt.
Lagerung
Da für chemisch definierte Medien die richtige Verpackung
äußerst wichtig ist, empfehlen wir zur Lagerung über die
gesamte Haltbarkeitsdauer die Verwendung der
Originalbehälter.
Für eine optimale Leistung muss Opti-MEM ® I vor dem
Gebrauch bei 2 bis 8°C im Dunkeln aufbewahrt werden.
Opti-MEM ® I ist auch in ökonomische Pulverform erhältlich.
Weitere Einzelheiten können Sie dem GIBCOTM-Katalog entnehmen oder von Ihrem Invitrogen-Verkaufsvertreter
erhalten.
Literatur
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals.Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30.Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Weitere Informationen zu diesem oder anderen GIBCOTM Produkten
erhalten Sie bei unserem Technischen Kundendienst
(eurotech@invitrogen.com). Die örtlichen Telefonnummern für Ihre
Region finden Sie im GIBCOTM-Produktkatalog. Sie können sich auch an Ihren Invitrogen-Verkaufsvertreter wenden
oder unsere Internetsite unter www.invitrogen.com besuchen.
Für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.
VORSICHT: Nicht für die therapeutische Anwendung bei
Menschen oder Tieren bestimmt.Andere
Anwendungen als der ausgewiesene
Verwendungszweck können einen Verstoß
gegen lokales Recht darstellen.
*Nur zu Forschungszwecken bestimmt.
VORSICHT: Nicht für die diagnostische oder therapeutische
Anwendung bei Menschen oder Tieren bestimmt.
17

18
Ελληυικα Opti-MEM ® I Reduced Serum Medium modification of MEM (Eagle's)
MQOROVG: Sa tkij amhqpimgy emai lg
amsidqarsij (eppedo dsg) cia so amsi-GIV 1 & 2,
amsi-GCV jai GBsAg. Veiqferse rluxma le
jahieqxlmey pqajsijy bioarukeiay

%FBS re Opti-MEM ® I
4
2-4
0,5-2
2-4
2-4
2
0,5 -2
4
2-4
uaqlocg Jtpaqij reiq Oqy emakkajsijy re
rtcjmsqxrg 4%
Emrvtag sgy Sp2/0-Ag14 (Sp2) Lorvqi, ppoy
amptgyn AE-1 (paqcxco tbqdxla Sp2) Lorvqi, ppoy
CHO ppoy
BHK-21 Lorvqi, ppoy
Jkxmopogrg Sp2 Lorvqi, meocmmgso lorvqi, ppoy
P3x63-Ag8.653 (653) Lorvqi, meocmmgso
lorvqi, ppoy
Lorvqi, ppoy
Eprsqxrg 653 Lorvqi, ppoy
BHK-21 Lorvqi, ppoy
CHO Lorvqi,meocmmgso lorvqi
Paqacxc MAb AE-1 Lorvqi, meocmmgso lorvqi, ppoy
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for
Propagation of Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals.
Advances in Biotechnological Processes. vol 5, pp. 1-30.Alan R. Liss, Inc.
New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a
Serum- Free Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and
Its Application to the Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical
Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension
Cultures. Selected Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
19

FIGYELEM: Az anti-HIV 1 & 2-re, anti-HCV-re és HBsAg
re (donor szinten) nem reaktív, humán
eredet· anyagok. Kezelés az elfogadott
biológiai biztonsági szabályok alkalmazásával.
Kat. No.: 31985 100 mL L-Glutaminnal
Komponens hiányos táptalajok:
500 mL L-Glutaminnal
Kat. No.: *11058 500 mL fenolvörös nélkül
51985 500 mL GlutaMAX‘ I-gyel
Tárolási feltételek: 2-8°C közötti hœmérsékleten, sötét helyen.
Eltarthatóság:A lejárati idœt ld. a címkén.
MEGJEGYZÉS: Az 11058 katalógusszámú termék esetén
kérjük vegye figyelembe az alábbi, Komponens
hiányos táptalajok adalékolása c. részt is.
Az Opti-MEM ® I sokoldalú, kémialag definiált táptalaj, melyet
az emlœs sejtek in vitro tenyésztése során felhasznált vérsavó
mennyiségének szignifikáns csökkentése érdekében
fejlesztettek ki.
Az Opti-MEM ® I többcélú táptalaj, mely bizonyítottan jól
alkalmazható számos sejtvonal és egyéb alkalmazások
vérsavó igényének csökkentésére. Bizonyítottan egyaránt
hatékonyabbá teszi az adherens és nem adherens sejtvonalak
növekedését és fenntartását.A 2-4% szarvasmarha magzati
vérsavóval, vagy egyéb vérsavókkal adalékolt Opti-MEM ® I a
hagyományos, 10% szarvasmarha magzati vérsavóval
adalékolt táptalajjal összehasonlítható, egyes esetekben azt
meghaladó túlélési arányt és maximális sejt s·r·séget
biztosít.A viszonylag kevésbé érzékeny sejtvonalak hosszú
távú kultúrái még ennél nagyobb mértékben csökkentett
vérsavó tartalom mellett is fenntarthatók.Adherens
sejtvonalak és 2% alatti vérsavó adalék mellett, vagy
kevertetett berendezésekben (Pl. görgœkre helyezett
fermentor) a táptalajba további adalékként 100 mg/L CaCl2ot
kell bevinni..
A különbözœ sejtek tenyésztése során mutatott
sokoldalúsága miatt az Opti-MEM ® I az optimális választás
számos sejtkultúra esetén.
Az Opti-MEM ® I elœállítása során felhasznált nyersanyagokat
a GIBCOTM szigorú minœségi elœírásai alapján vizsgálták.A
gyártási tételek kutatási és gyártási alkalmazások esetén
mutatott egyenletes hatékonyságának biztosítása céljából a
kész táptalajon hatékonyságvizsgálatot végeztek.
Az Opti-MEM ® I eltarthatósága összehasonlítható a
hagyományos, glutamintartalmú készítményekkel. Ez a
stabilitás lehetœvé teszi a laboratórumok számára, hogy az
Opti-MEM ® I-bœl a rutin laboratóriumi gyakorlatban
szokásos raktárkészletet építsék ki és tartsák fenn.
Összetétel
Az Opti-MEM ® I az Eagle-féle minimális alapvetœ táptalaj
módosított változata, melyet HEPES-szel és nátriumbikarbonáttal
puffereztek, továbbá hipoxantinnal, thimidinnel,
nátrium-piruváttal, L-glutaminnal, vagy GlutaMAX-szal,
nyomelemekkel és növekedési faktorkkal adalékoltak.A
fehérje szint minimális (15 mg/mL), a fehérjéket kizárólag
inzulinnal és transzferrinnel adalékolták.A fenolvörös
csökkentett koncentrációban, pH indikátorként van jelen. Az
Opti-MEM ® I felhasználás elœtt 2-merkaptoetanollal
20
magyar
Opti-MEM ® I csökkentett vérsavó tartalmú táptalaj az Eagle-féle MEM módosított változata
adalékolható.A hybridoma sejtekkel végzett munka
kényelmesebbé tétele céljából a CaCl2 szintet 99.9 mg/L-re
csökkentettük.
Felhasználási utasítás
Opti-MEM ® I-gyé történœ átalakítás
Az Opti-MEM ® I-gyé történœ átalakítás könny·.A legtöbb
alkalmazás esetén nem szükséges elválasztási m·veleteket
alkalmazni a vérsavó adalék 50%-os csökkentésének
eléréséhez az Opti-MEM ® I-gyé történœ átalakítás során.Az
átalakítás egyszer·en elvégezhetœ a sejtek lecentrifugálása, a
felülúszó dekantálása, majd a sejtek csökkentett vérsavó
tartalmú Opti-MEM ® I-ben történœ újraszuszpendálása
útján. (A tipikus vérsavó adalék csökkentési adatok az
Alkalmazások rész táblázatában találhatók) Elválasztási
m·veletek minimális alkalmazásával továbbil vérsavó
csökkentés érhetœ el.Az egyes alkalmazások optimális
vérsavó adalék szintjét a várt hatékonysági jellemzœk
(növekedés fokozás, szekunder metabolit termelés, stb.)
alapján kell meghatározni.Az Opti-MEM ® I-nek a sejtvonalak
fenntartása során való nagyobb mérték· felhasználása esetén
nem tapasztaltak életképességet, vagy növekedési sebességet
károsító hatást. Óvjuk az
Opti-MEM ® I-et a közvetlen fényhatásoktól.
2-Merkaptoetanol használata
A 2-merkaptoetanol olyan redukálószer, mely fokozza
bizonyos sejtvonalak növekedését1 ,bevonási hatékonyságát2 és/vagy antitest szintézisét3 . Ezen jelenség kinetikája nem
teljesen ismert.A legtöbb alkalmazás nem igényli a 2merkaptoetanol
adalék alkalmazását.
Mivel az Opti-MEM ® I számos sejt típusra vonatkozó
nagyszámú alkalmazásban használható, érdemes a 2merkaptoetanol
adalék hasznosságát az adott alkalmazás
esetén egyedileg kiértékelni.
A 2-merkaptoetanol egyedileg rendelhetœ Dulbecco-féle
foszfátpufferes, kálcium- és magnézium mentes sóoldatban
1000X hígitásban (5.5x10 -2M), 50 mL-es kiszerelésben a
21985 katalógus számon.Az Opti-MEM ® I-hez közvetlenül
felhasználás elœtt adható hozzá.Az Opti-MEM ® I a 2merkaptoetanol
hozzáadása után két hónapig stabil, feltéve,
hogy ez a periódus nem az Opti-MEM ® I, vagy a 2merkaptoetanol
címkéjén feltüntetett lejárati idœ után telik le.
Ha szükséges, aszeptikusan adjunk 0.5 mL 2-merkaptoetanol
(1000X)-t az Opti-MEM ® I minden 500 mL-éhez. Ne
pipettázzuk szájjal.Alaposan keverjük át at oldatot (ne
rázzuk).A fel nem használt 2-merkaptoetanol részleteket
tároljuk a szorosan visszazárt eredeti csomagolásban.A 2merkaptoetanol
végsœ koncentrációja az Opti-MEM ® I-ben
5.5x10 -5 M lesz.
Alkalmazási Információ
A legtöbb olyan sejt, mely rutinszer·en tenyészthetœ
vérsavóval adalékolt táptalajon közvetlenül átvihetœ legalább
50% -kal csökkentett vérsavótartalmú Opti-MEM ® I-re.
A vérsavó szükségletet sikerült jelentœsen tovább
csökkenteni különféle rágcsáló myeloma sejtek (SP2/0-Ag14,
P3X63-Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) és leszármaztatott
hybridoma sejtek esetén.

Szintén szignifikáns vérsavó szint csökkentést értünk el
közönséges és tumor eredet· fibroblasztikus és hámsejtek
esetén.Adherens sejtvonalak és 2% alatti vérsavó adalék
mellett, vagy kevertetett berendezésekben (Pl. görgœkre
helyezett fermentor) a táptalajba további adalékként 100
mg/L CaCl2--ot kell bevinni.
A GIBCOTM kutatói megállapították, hogy a szarvasmarha
magzati vérsavó (FBS) adalék az alábbiakban megadott
értékre csökkenthetœ a megadott sejtvonalakra Opti-MEM ®
I alkalmazásával, a magasabb vérsavó koncentrációjú alap
táptalajokkal összehasonlítható növekedési sebesség
fenntartása mellett.
Sejt típus % FBS az Opti-MEM ® Hybridoma technológia - egér és emberi
I-ben
Fúzió 4
Klónozás
Növekedés és antitest termelés -
2 - 4
myelomák és kifejlett hybridomák 2 - 4
Primer kötœszövetek 2 - 4
Patkány és hörcsög embrió sejtvonalak 2
Lymphoblastoid sejtvonalak 0.5 - 2
Majomvese sejtek 4
Emberi és szarvasmarha embrió vese sejtek 2 - 4
Az Opti-MEM ® I alternatív emlœs vérsavókkal történœ
adalékolása során szintén látványos eredményeket sikerült
elérni.A 4% alternatív vérsavóval adalékolt Opti-MEM ® I a
10% FBS-sel adalékolt alap táptalajjal összehasonlítható, egyes
esetekben azt meghaladó hatékonyságot mutatott az alábbi
alkalmazások esetén:
Alkalmazás Sejtvonal 4% Alternatív Vérsavó
Növekedés fokozás Sp2/0-Ag14 (Sp2) borjú, ló
AE-1 (Sp2 leszármazott Hybridoma) borjú, ló
CHO ló
BHK-21 borjú, ló
Klónozás Sp2 borjú, újszülött borjú, ló
P3x63-Ag8.653 (653) borjú, újszülött borjú, ló
borjú, ló
Bevonás 653 borjú, ló
BHK-21 borjú, ló
CHO borjú, újszülött borjú
MAb termelés AE-1 borjú, újszülött borjú, ló
Egyes korlátozott vizsgálatok során az Opti-MEM ® I-ben
végzett electroporáció hatására megnœtt a tranziens gén
expresszió szintje és a sejtek életképessége a tipikus
electroporációs táptalajhoz képest.A közölt adatok alapján a
2-merkaptoetanollal adalékolt Opti-MEM ® I megnövelte a
transfekciós hatékonyságot a segítœ vektorként majom SV 40
sejtekkel transfekcionált CV-1 és COS 1 sejtekben. 4,5
Rendszeresen aktualizálni fogjuk az Opti-MEM ® I speciális
sejtekre vonatkozó felhasználási eredményeit. Hálásak
lennénk, ha az Opti-MEM ® I-et használó kutatók
megosztanák tapasztalataikat a GIBCOTM-val, és az így nyert
információ hozzáférhetœvé válna a tudományos közösség
számára. Komponens hiányos táptalaj adalékolás
Az Opti-MEM ® I komponens hiányos változatának
használata esetén az alábbi adalék koncentráció felel meg az
eredeti összetételnek:
Kat. No. 11058 0.00160 gm/L fenolvörös
Minœségellenœrzés
Az Opti-MEM ® I-en pH, ozmolaritás, endotoxin, baktérium-,
gombaszám- és endotoxin meghatározást végeznek.Az
endotoxin szint kisebb mint 1.0 EU/mL.
Az Opti-MEM ® I valamennyi gyártási tételének rágcsáló
myeloma sejtvonal klónozási hatékonyságának és többszörös
szubkultúrák adherens sejtvonalon történœ növekedésének
támogatására irányuló képességét érzékeny quantitatív
elemzések során értékelik ki.Az Opti-MEM ® I 2% (CHO
növekedés) és 4% (Sp2 klónozás) vérsavóval adalékolt
vizsgálati mintáit elœzetesen jóváhagyott Opti-MEM ® I
kontrol mintákkal mérik össze.
A GIBCOTM sejttenyészeti folyadék termékek olyan
aszeptikus eljárás során készülnek, melynek valamennyi
lépését validálták annak biztosítása céljából, hogy valamennyi
termék kielégítse a gyógyszeripari standard sterilitási szintet,
ami 10-3 , vagyis olyan terméket szolgáltasson, melynek
szennyezettségi szintje a gyártás során nem lehet magasabb,
mint 1 az 1000 egységbœl.A legmagasabb sterilitási szint,
(nagyobb, vagy egyenlœ, mint 10-6 ) nem érhetœ el
végsterilizálás nélkül, mely a sejt tenyészeti termékek
hatékonyságára káros hatást gyakorol.
Tárolás
Mivel a kémiailag definiált táptalajok megfelelœ csomagolása
rendkívül fontos, javasoljuk az eredeti csomagolás használatát
a tárolás teljes ideje alatt.
Az optimális hatékonyság elérése céljából az Opti-MEM ® Iet
felhasználás elœtt 2 - 8°C-on, sötétben kell tárolni..
Az Opti-MEM ® I gazdaságos por fomában is rendelkezésre
áll. Keresse a GIBCOTM katalógusban, vagy forduljon az
Invitrogen helyi kereskedelmi képviselœjéhez részletes
információkért.
Hivatkozások:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30.Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Ezen, vagy egyéb GIBCOTM termékkel kapcsolatos
információ szerzése, vagy technikai támogatás kérése
céljából, kérjük, vegye fel a kapcsolatot a Technikai
Szolgálattal a eurotech@invitrogen.com, e-mail címen, vagy a
GIBCOTM katalógusban közölt helyi telefonszámon. .
Kapcsolatba léphet az Ön Invitrogen kereskedelmi
képviselœjével, vagy felkeresheti Web helyünket az alábbi
címen: www.invitrogen.com.
In vitro diagnosztikai felhasználásra. .
FIGYELEM: Nem alkalmazható humán-, vagy állatterápiás
célokra. A címkén feltüntetettœl eltérœ
felhasználás sértheti a helyi törvényeket. .
*Kizárólag kutatási célokra használható.
FIGYELEM: Nem alkalmazható humán-, vagy diagnosztikai,
vagy terápiás célokra.
21

Varúapple: Efni upprunnin frá fólki hvarfast ekki (á gjafastigi) viapple
anti-HIV 1 og 2, anti-HCV og HBSAg. Meapplehöndlist í samræmi
viapple viappleurkenndar líffræappleilegar öryggisreglur.
Vörunúmer: 31985 100 ml meapple L-glútamíni
Skert æti:
500 ml meapple L-glútamíni
Vörunúmer: *11058 500 ml án fenólrautt
51985 500 ml meapple GlutaMAX‘ I
Geymsluskilyrapplei: 2 til 8°C, variapple ljósi.
GeymsluÚol: Sjá skráapplea fyrningu á pakkningu.
ATHUGI∫: Leitiapple frekari upplÔsinga í kaflanum um íblöndun í
skert æti hér aapple neapplean fyrir vörunúmer 11058.
Opti-MEM ® I er fjölhæft æti, efnafræappleilega skilgreint,
samsett til aapple draga marktækt úr Úví magni sem Úarf af sermi
til aapple rækta spendÔrafrumur „in vitro“.
Opti-MEM ® I er fjölnota æti, sem hefur reynst nytsamlegt til
aapple draga úr Úörf á sermi í Ômiss konar frumulínum og
notkunum. SÔnt hefur veriapple fram aapple Úaapple er áhrifaríkt viapple
ræktun og viapplehald bæapplei viappleloappleandi og ekki-viappleloappleandi
frumulína. Íblandaapple meapple 2-4% sermi úr nautgripafóstrum eapplea
öappleru sermi, eykur Opti-MEM ® I viapplekomuhraapplea og hámarks
frumuÚéttni, álíka og í sumum tilvikum meira en venjuleg æti
íblönduapple 10% sermi úr nautgripafóstrum. Hægt er aapple láta
hlutfallslega óvandlátar frumulínur haldast í langtíma-ræktun
Úrátt fyrir jafnvel enn frekari minnkun sermis. Ef notaapplear eru
viappleloappleandi frumulínur og minna en 2% íblöndun sermis eapplea
ef ræktunarílátiapple er hrist eins og í veltiflöskum, ætti aapple
íblanda ætiapple frekar meapple 100 mg/l CaCl2. Fjölhæfni Opti-MEM ® I viapple tímgun Ômissa gerapplea frumna
gerir Úetta æti hagstæappleasta kostinn viapple margar
frumuræktanir.
Hráefnin sem notuapple eru viapple framleiappleslu á Opti-MEM ® I eru
skimuapple samkvæmt hinum ströngu gæappleastöapplelum GIBCOTM .
Fullgert ætiapple er prófaapple meapple tilliti til virkni til aapple tryggja
samkvæmni milli framleiappleslulota, sem er nauapplesynleg Úegar
Úaapple er notaapple til rannsókna eapplea framleiappleslu.
GeymsluÚol Opti-MEM ® I er sambærilegt viapple venjulegar
samsetningar sem innihalda glútamín. Òessi stöappleugleiki veldur
Úví aapple rannsóknarstofur geta átt og viapplehaldiapple birgappleum af
Opti-MEM ® I sem hæfa kerfisbundnum
rannsóknarstofuvenjum.
Samsetning
Opti-MEM ® I er aapplelagaapple Eagle’s Minimal Essential Medium,
bufferaapple meapple HEPES og natríumbíkarbónati og íblandaapple meapple
hÔpóxantíni, tÔmidíni, natríum pÔrúvati, L-glútamíni eapplea
GlutaMAX, snefilefnum og vaxtarÚáttum. Próteinstyrkur er
í lágmarki (15 míkróg/ml), Úar sem insúlín og transferrín eru
einu prótein íblöndunarefnin. Fenólrautt er einnig til staapplear í
lágum styrk sem sÔrustigslitvísir. Íblanda má Opti-MEM ® I
meapple 2-merkaptóetanóli fyrir notkun. CaCl2 styrkur er
minnkaappleur í 99,9 mg/l til hægapplearauka viapple vinnu meapple
frumublendinga.
22
Íslenka
Opti-MEM ® I Skert sermisæti Aapplelaga apple úr MEM (Eagle’s)
Notkunarleiapplebeiningar
Skipti í Opti-MEM ® I
Auapplevelt er aapple skipta yfir í Opti-MEM ® I.Til flestra nota er
ekki Úörf fyrir neinar aapplelögunaraapplegerappleir til aapple ná 50%
minnkun á íblöndum sermis Úegar skipt er yfir í
Opti-MEM ® I. Hægt er aapple gera skiptinguna meapple Úví
einfaldlega aapple skilja frumurnar í skilvindu, hella vökvanum
ofan af og mynda n_ja sviflausn meapple Úeim í Opti-MEM ® I
meapple minnkaappleri íblöndun sermis. (Sjá töflurnar í kaflanum um
notkun fyrir dæmigerapplea minnkun íblöndunar sermis). Hægt
er aapple ná enn meiri minnkun sermis meapple lágmarksaapplelögun.
Kjöríblöndun sermis fyrir hverja sérstaka notkun ætti aapple
ákvarapplea eftir Úví viapple hvaapplea árangri er búist (vaxtaraukning,
framleiapplesla fylgi-umbrotsefna o.s.frv.). Framlengd notkun
Opti-MEM ® I í viapplehaldi frumulína hefur ekki leitt í ljós
minnkaapplean lífvænleika eapplea vaxtarhraapplea. Geymiapple Opti-MEM ®
I variapple beinu ljósi.
Notkun 2-merkaptóetanóls
2-merkaptóetanól er afoxunarefni sem sÔnt hefur veriapple fram
á aapple örvar vöxt1 , skilvirkni húappleunar2 og/eapplea
mótefnaframleiappleslu3 , sértækra frumulína. Hvarfafræapplei Úessa
fyrirbæris er ekki fyllilega útskÔrapple.Í flestum notkunartilfellum
er ekki Úörf íblöndunar 2-merkaptóetanóls.
Òar sem Opti-MEM ® I virkar til fjölbreyttra nota meapple
mörgum frumutegundum, er skynsamlegt aapple meta notkun 2merkaptóetanóls
til íblöndunar eftir hverri notkun.
2-merkaptóetanól fæst sér sem 1000X Úykkni (5,5x10-2 M) í
Dulbecco’s fosfat bufferaappleri saltlausn án kalsíums og
magnesíums.Vörunúmer 21985, 50 ml. Òví má bæta í
Opti-MEM ® I strax fyrir notkun. Opti-MEM ® I er stöappleugt í
2 mánuapplei eftir aapple 2-merkaptóetanóli hefur veriapple bætt í, svo
fremi aapple Úessi tími fari ekki fram úr fyrningardagsetningu
sem kemur fram á umbúappleum Opti-MEM ® I eapplea 2merkaptóetanóls.
Ef Úess er óskaapple er 0,5 ml 2-merkaptóetanól (1000X) bætt
meapple smitgát í hverja 500 ml af Opti-MEM ® I. Sjúgiapple ekki
upp í pípettuna meapple munninum. Blandiapple vandlega meapple Úví aapple
Úyrla lausninni í glasinu (hristist ekki). Geymiapple ónotaapple 2merkaptóetanól
í upprunalegu umbúappleunum Úétt lokuappleum.
Endanlegur styrkur 2-merkaptóetanóls í Opti-MEM ® I
verappleur 5,5x10-5 M.
UpplÔsingar um notkun
Flestar frumur sem eru ræktaapplear kerfisbundiapple í æti
íblönduappleu sermi má flytja beint í Opti-MEM ® I meapple a.m.k.
50% minnkun sermis.
Náapplest hefur verluleg frekari minnkun á sermisÚörf meapple
Ômsum músa-mergæxla (SP2/0-Ag14, P3X63-Ag8,653, P3-
NS1-Ag4-1) og afleiddum frumublendingum.
Viapple höfum einnig náapple marktækri minnkun á magni sermis
sem Úarf til ræktunar trefjakímfrumna og Úekjufrumna bæapplei
venjulegra og krabbameinsuppruna. Ef notaapplear eru
viappleloappleandi frumulínur og minna en 2% íblöndun sermis eapplea
ef ræktunarílátiapple er hrist eins og í velti-flöskum, ætti aapple

íblanda ætiapple frekar meapple 100 mg/l CaCl2.
GIBCOTM rannsóknavörufyrirtækiapple hefur sÔnt fram á aapple
minnka megi íblöndun meapple sermi úr kálfafóstrum (FBS)
Úegar Opti-MEM ® I er notaapple aapple Úví magni sem sÔnt er hér
aapple neapplean fyrir eftirtaldar frumulínur og viapplehalda samt
vaxtarhraapplea sambærilegum Úeim sem er í grunnæti meapple
íblöndun meira sermis.
Frumugerappleir % FBS í Opti-MEM ® I
Frumublendinga tækni – músa og fólks
Samruni 4
Einræktun
Ræktun og Ab framleiapplesla –
2 - 4
Mergæxli og hefapplebundnir frumublendingar 0.5-2
Tvílitna trefjakímfrumu frumulínur 2 - 4
Frum trefjakímfrumur 2 - 4
Frumulínur úr rottu- og hamstrafóstrum 2
Eitilkímfrumu frumulínur 0.5 - 2
NÔrnafrumur úr öpum 4
NÔrnafrumur úr manna- og nautgripafóstrum 2 - 4
Íblöndun Opti-MEM ® I meapple sermi úr öapplerum spendÔrum
hefur einnig sÔnt áhrifaríkan árangur. Opti-MEM ® I íblandaapple
meapple 4% sermi úr öapplerum spendÔrum hefur sÔnt árangur sem
jafnast á viapple og í sumum tilfellum betri en grunnæti íblandaapple
meapple 10% FBS í eftirfarandi notkunartivikum:
Notkun Frumulína Sermisvalkostur 4%
Vaxtaraukning Sp2/0-Ag14 (Sp2) Kálfar, hross
AE-1 (Sp2 afleiddir frumublendingar) Kálfar, hross
CHO Hross
BHK-21 Kálfar, hross
Einræktun Sp2 Kálfar, nÔbornir kálfar, hross
P3x63-Ag8.653 (653) Kálfar, nÔbornir kálfar, hross
Kálfar, hross
Húappleun 653 Kálfar, hross
BHK-21 Kálfar, hross
CHO Kálfar, nÔbornir kálfar
MAb framleiapplesla AE-1 Kálfar, nÔbornir kálfar, hross
Rafgötun í Opti-MEM ® I hefur gefiapple meiri tímabundna
genatjáningu og lífvænleika, í takmörkuappleum fjölda rannsókna,
en dæmigerapple rafgötunaræti. SkÔrt hefur veriapple frá Úví aapple
Opti-MEM ® I meapple 2-merkaptóetanóli hefur bætt skilvirkni
genefnafærslu í CV-1 og COS 1 frumum innleiddum meapple apa
SV-40-líkri hvatandi genaferju.4,5
Òaapple er ætlun okkar aapple uppfæra reglubundiapple notkun
Opti-MEM ® I til sérhæfapplera frumunota.Viapple værum Úakklát ef
vísindamenn sem nota Opti-MEM ® I myndu deila reynslu
sinni meapple GIBCOTM ,svo hægt sé aapple deila Úeim upplÔsingum
meapple vísindasamfélaginu.
Íblöndun í skert æti
Òegar notaapple er skert afbrigapplei Opti-MEM ® I, er eftirfarandi
íblöndunarstyrkur í samræmi viapple upprunalegu samsetninguna:
Vörunúmer: 11058 fenólrautt 0,00160 g/l
Gæappleaeftirlit
SÔrustigs, osmósuÚéttni, endotoxín, bakteríu, sveppa og
mÔkóplasma prófanir eru framkvæmdar á Opti-MEM ® I.
Magn endótoxína er minna en 1,0 EU/ml.
Sérhver framleiappleslulota Opti-MEM ® I er metin meapple næmum
magngreiningaraappleferappleum Úar sem mældur er hæfileikinn til
aapple styappleja einræktunar skilvirkni músa-mergæxla frumulína og
vöxt í fjölda undirræktana viappleloappleandi frumulínu. Prufulotur
Opti-MEM ® I meapple 2% sermis íblöndun (CHO vöxtur) og
4% (Sp2 einræktun) eru bornar saman viapple staapplelaapple
Opti-MEM ® I sem áappleur hefur veriapple samÚykkt.
GIBCOTM vökvar til frumuræktunar eru framleiddir meapple
smitgát, Úar sem hvert stig hefur hlotiapple gildingu, til aapple tryggja
aapple allar vörur uppfylli staapplela iapplenaapplearins um
dauapplehreinsunarstigiapple 10-3 ; Ú.e. vara Úar sem sÔnt er fram á
mengunarstig ekki hærra en 1 fyrir hverjar 1000 einingar í
framleiapplesluferlinu. Ekki er hægt aapple ná hæsta stigi
dauapplehreinsunar (jafnt eapplea hærra en 10-6 ) án Úess aapple beitt sé
loka dauapplehreinsun sem er skaappleleg virkni Úessara vara til
frumuræktunar.
Geymsla
Òar sem viappleeigandi umbúappleir eru mjög miklvægar Úegar um
efnafræappleilega skilgreint æti er aapple ræapplea, mælum viapple meapple Úví
aapple upprunalegar umbúappleir séu ávallt notaapplear.
Fyrir kjör-árangur, ætti aapple geyma Opti-MEM ® I viapple 2-8°C
variapple ljósi fyrir notkun.
Opti-MEM ® I fæst einnig í hagkvæmu duftformi. Leitiapple
upplÔsinga í GIBCOTM vörulistanum eapplea hafiapple samband viapple
sölufulltrúa Invitrogen til aapple fá nánari upplÔsingar.
Tilvísanir:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Ef frekari upplÔsinga eapplea tæknilegrar aapplestoapplear er óskaapple fyrir
Úessa eapplea aapplerar GIBCOTM vörur, er bent á tæknideild á
eurotech@invitrogen.com, eapplea á símanúmer fyrir viappleeigandi
svæapplei í GIBCOTM vörulistanum.
Einnig er hægt aapple hafa samband viapple sölufulltrúa Invitrogen
eapplea heimasíappleu okkar www.invitrogen.com.
Til „in vitro“ sjúkdómsgreininga.
VARÚ∫: Ekki ætlaapple mönnum eapplea dÔrum í lækningaskyni.
Notkun önnur en sú sem er fyrirskrifuapple getur
brotiapple í bága viapple gildandi lög.
*Eingöngu til nota viapple rannsóknir.
VARÚ∫: Ekki ætlaapple mönnum eapplea dÔrum í
sjúkdómsgreiningar- eapplea lækningaskyni.
23

ATTENZIONE: I materiali di origine umana sono non reattivi (a
livello donatore) per anti-HIV 1 e 2, anti-HCV e
HBsAg. Maneggiare secondo la prassi consolidata
di sicurezza biologica.
N. di catalogo: 31985 100 mL con L-glutamina
500 mL con L-glutamina
Terreni carenti di componenti:
N. di catalogo: *11058 500 mL senza rosso fenolo
51985 500 mL con GlutaMAX‘ I
Condizioni di conservazione: 2 - 8 °C, al buio.
Periodo di validità: Per la data di scadenza, vedere l’etichetta del prodotto.
NOTA: Per il prodotto con numero di catalogo 11058,
consultare anche di seguito il paragrafo
“Arricchimento del terreno carente di componenti”.
Opti-MEM ® I è un terreno versatile, chimicamente definito,
formulato per ridurre significativamente la quantità di siero
richiesto per la coltivazione in vitro delle cellule di
mammifero.
Opti-MEM ® I è un terreno polivalente dimostratosi efficace
nel ridurre la richiesta di siero per una grande varietà di
linee cellulari e di applicazioni. Si è dimostrato efficace nella
crescita e nel mantenimento sia delle linee di cellule
aderenti, sia di quelle non aderenti. Quando arricchito con il
2-4% di siero fetale di bovino o di sieri alternativi,
Opti-MEM ® I favorisce i tassi proliferativi e le massime
densità cellulari al pari, e in alcuni casi in misura maggiore,
rispetto ai terreni convenzionali arricchiti con il 10% di siero
fetale di bovino. Le linee cellulari relativamente non esigenti
possono essere mantenute in coltura a lungo termine con
una riduzione del siero ancora più consistente. Se si usano
linee di cellule aderenti con un arricchimento del siero
minore del 2%, oppure in un sistema di agitazione quale le
bottiglie rotanti, il terreno va ulteriormente arricchito con
100 mg/L di CaCl2.
La versatilità di Opti-MEM ® I nella propagazione di
numerosi tipi cellulari, fa di questo terreno la scelta ottimale
per le richieste di molte colture cellulari.
Le materie prime usate per la produzione di Opti-MEM ® I
vengono selezionate mediante i rigorosi standard qualitativi
di GIBCOTM La performance del terreno completo viene
testata allo scopo di garantire la costanza qualitativa da lotto
a lotto richiesta per le applicazioni di ricerca e di
produzione.
Il periodo di validità di Opti-MEM ® I è comparabile a quello
delle formulazioni convenzionali a base di glutamina.Tale
stabilità consente ai laboratori di conservare e mantenere
delle scorte di Opti-MEM ® I compatibili con la prassi
routinaria di laboratorio.
Formulazione
Opti-MEM ® I è una modificazione dell’Eagle's Minimal
Essential Medium, tamponato con HEPES e sodio
bicarbonato, e arricchito con ipoxantina, timidina, piruvato di
sodio, L-glutamina o con GlutaMAX, elementi in tracce e
fattori di crescita. Il livello proteico è minimo (15 mg/mL):
l’insulina e la trasferrina costituiscono l’unico arricchimento
proteico. Il rosso fenolo è presente a concentrazione ridotta
come indicatore di pH. Opti-MEM ® I può essere arricchito
24
Italiano
Opti-MEM ® I Terreno a contenuto ridotto di siero modificazione del MEM (Eagle’s)
prima dell’uso con 2-mercaptoetanolo. Il livello di CaCl2 è
ridotto a 99,9 mg/L per una maggiore convenienza nel lavoro
con gli ibridomi.
Istruzioni per l’uso
Conversione a Opti-MEM ® I
La conversione a Opti-MEM ® I è semplice. La maggior parte
delle applicazioni non richiede, nella conversione a
Opti-MEM ® I, procedure di adattamento per ottenere il
50% di riduzione dell’arricchimento del siero. La conversione
può essere effettuata semplicemente centrifugando le cellule,
decantando il surnatante e risospendendo le cellule in
Opti-MEM ® I con l’arricchimento ridotto del siero. (Per una
riduzione tipica dell’arricchimento del siero, vedere le tabelle
nella sezione “Applicazioni”). Un’ulteriore riduzione del siero
può essere realizzata con un adattamento minimo.
L’arricchimento ottimale del siero per ogni specifica
applicazione va determinato in base alle caratteristiche di
performance attese (stimolazione della crescita, produzione
di metaboliti secondari ecc.). L’uso esteso di Opti-MEM ® I
nel mantenimento delle linee cellulari non ha evidenziato
diminuzioni di vitalità o del tasso di crescita.Tenere
Opti-MEM ® I lontano dalla luce diretta.
Uso del 2-mercaptoetanolo
Il 2-mercaptoetanolo è un agente riducente che ha mostrato
di migliorare la crescita1 , l’efficienza di “plating” 2 e/o la sintesi
anticorpale3 di determinate linee cellulari. La cinetica di
questo fenomeno non è del tutto chiara. La maggior parte
delle applicazioni non richiede l’arricchimento con 2mercaptoetanolo.
Siccome Opti-MEM ® I è utile in un gran numero di
applicazioni con numerosi tipi cellulari, è opportuno valutare
l’utilità dell’arricchimento con 2-mercaptoetanolo a seconda
della specifica applicazione.
Il 2-mercaptoetanolo è disponibile separatamente come
concentrato 1000X (5,5x10-2 M) in 50 mL di soluzione salina
tamponata al fosfato di Dulbecco senza calcio e magnesio
(catalogo n. 21985). Può essere aggiunto a Opti-MEM ® I
subito prima dell’uso. Opti-MEM ® I è stabile per due mesi
dopo l’aggiunta di 2-mercaptoetanolo, quando questo
periodo non superi la data di scadenza riportata
sull’etichetta di Opti-MEM ® I o del 2-mercaptoetanolo.
Se lo si desidera, si possono aggiungere in condizioni di
asepsi 0,5 mL di 2-mercaptoetanolo (1000X) per ogni 500
mL di Opti-MEM ® I. Non pipettare con la bocca. Mescolare
a fondo agitando delicatamente (non scuotere). Conservare
le quote non usate di 2-mercaptoetanolo nella confezione
originale, chiudendo bene il cappuccio. La concentrazione
finale di 2-mercaptoetanolo in Opti-MEM ® I sarà di 5,5x10-5M. Informazioni sulle applicazioni
La maggior parte delle cellule coltivate di routine in terreno
arricchito con siero può essere direttamente trasferita in
Opti-MEM ® I con un minimo del 50% di riduzione del siero.
Un’ulteriore consistente riduzione della richiesta di siero è
stata raggiunta con vari mielomi murini (SP2/0-Ag14, P3X63-
Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) e ibridomi derivati.

Abbiamo anche ottenuto una significativa riduzione della
quantità di siero richiesta per i fibroblasti e per le cellule
epiteliali in crescita di origine normale e tumorale. Se si
usano linee di cellule aderenti con un arricchimento del
siero minore del 2%, oppure in un sistema di agitazione
quale le bottiglie rotanti, il terreno va ulteriormente
arricchito con 100 mg/L di CaCl2.
La ricerca GIBCOTM ha stabilito che l’arricchimento con
siero fetale di bovino (FBS) può essere ridotto usando
Opti-MEM ® I, fino ai livelli indicati di seguito per le linee
cellulari seguenti, mantenendo tassi di crescita comparabili a
quelli dei terreni basali con livelli superiori di arricchimento
con siero.
Tipi cellulari % di FBS in Opti-MEM ® I
Tecnologia degli ibridomi – Murini e umani
Fusione 4
Clonazione 2 - 4
Crescita e produzione anticorpale –
Mielomi e ibridomi stabili 0,5 - 2
Linee cellulari fibroblastiche diploidi 2 - 4
Fibroblasti primari 2 - 4
Linee cellulari embrionali di ratto e di criceto 2
Linee cellulari linfoblastoidi 0,5 - 2
Cellule renali di scimmia 4
Cellule renali embrionali umane e bovine 2 - 4
Anche l’arricchimento di Opti-MEM ® I con sieri alternativi
di mammifero ha mostrato risultati sorprendenti.
Opti-MEM ® I arricchito con il 4% di sieri alternativi si è
comportato al pari, e in alcuni casi meglio, dei terreni di base
arricchiti con il 10% di FBS nelle seguenti applicazioni:
Applicazione Linea cellulare Siero alternativo al 4%
Stimolazione della crescita Sp2/0-Ag14 (Sp2) Vitello, cavallo
AE-1 (ibridomi derivati da Sp2) Vitello, cavallo
CHO Cavallo
BHK-21 Vitello, cavallo
Clonazione Sp2 Vitello, vitello neonato, cavallo
P3x63-Ag8.653 (653)Vitello, vitello neonato, cavallo
Vitello, cavallo
Plating 653 Vitello, cavallo
BHK-21 Vitello, cavallo
CHO Vitello, vitello neonato
Produzione di Ac monoclonali AE-1 Vitello, vitello neonato, cavallo
In un numero limitato di studi, l’elettroporazione in
Opti-MEM ® I ha prodotto livelli più alti di espressione
transgenica e di vitalità cellulare, rispetto al tipico terreno di
elettroporazione. È stato riportato che Opti-MEM ® I con 2mercaptoetanolo
aumenta l’efficienza di transfezione nelle
cellule CV-1 e COS 1 transfettate con un vettore di
stimolazione simile al virus SV-40 di scimmia.4,5
È nostra intenzione aggiornare periodicamente l’applicazione
di Opti-MEM ® I per specifiche richieste cellulari. Saremmo
grati ai ricercatori che usano Opti-MEM ® I, qualora
volessero condividere le loro esperienze con GIBCOTM , allo
scopo di mettere a disposizione della comunità scientifica
tutte le informazioni ricavate.
Arricchimento del terreno carente di componenti
Usando una variazione di Opti-MEM ® I carente di
componenti, la concentrazione di arricchimento seguente
sarà conforme alla formulazione originale:
Catalogo N. 11058 rosso fenolo a 0,00160 mg/L
Controllo qualità
Opti-MEM ® I è sottoposto a test per il pH, l’osmolalità, le
endotossine, i batteri, i funghi e i micoplasmi. Il livello di
endotossine è inferiore a 1,0 EU/mL.
Ogni lotto di Opti-MEM ® I viene valutato mediante saggi
quantitativi di sensibilità riguardanti la sua capacità di
supportare l’efficienza di clonazione di una linea cellulare di
mieloma murino e la crescita su sottocolture multiple di una
linea di cellule aderenti. I lotti testati di Opti-MEM ® I al 2%
(crescita delle cellule CHO) e al 4% (clonazione Sp2) di
arricchimento sierico vengono comparati a un controllo
Opti-MEM ® I precedentemente approvato.
I prodotti liquidi di colture cellulari GIBCOTM ,vengono
preparati mediante un processo asettico, ogni fase del quale
è stata validata per assicurare che tutti i prodotti soddisfino
il livello di sicurezza di sterilità industriale standard di 10-3 ;
cioè prodotti che dimostrino un livello di contaminazione
non superiore a 1 su 1000 unità, durante il processo
produttivo. Il livello massimo di sicurezza di sterilità (uguale
o maggiore a 10-6 ), non può essere raggiunto senza
sterilizzazione conclusiva, che non compromette la
performance dei prodotti a base di colture cellulari.
Conservazione
Siccome il corretto imballaggio di un terreno definito
chimicamente è della massima importanza, si raccomanda
l’uso dei contenitori originali per la conservazione fino al
termine.
Per una performance ottimale, Opti-MEM ® I va conservato
prima dell’uso a 2 - 8°C al buio.
Opti-MEM ® I è disponibile anche nella pratica forma in
polvere. Per ulteriori informazioni, consultare il catalogo
GIBCOTM oppure rivolgersi al rappresentante di vendita
Invitrogen.
Riferimenti bibliografici:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry.130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Per ulteriori informazioni o per l’assistenza tecnica su
questo o su altri prodotti GIBCOTM , rivolgersi al Servizio
tecnico eurotech@invitrogen.com, oppure ricercare il
numero telefonico della propria zona nel catalogo dei
prodotti GIBCOTM .
Inoltre, è possibile rivolgersi al proprio rappresentante
vendite Invitrogen, oppure consultare il nostro sito internet
www.invitrogen.com.
Per uso diagnostico in vitro.
ATTENZIONE: Non destinato all’uso in terapia umana o veterinaria.
L’utilizzazione diversa dall’uso previsto indicato può
costituire violazione delle norme locali.
*Solo per uso sperimentale.
ATTENZIONE: Non destinato all’uso in diagnostica e terapia umana
o veterinaria.
25

UZMANæBU: Cilv≥ku izcelsmes materißli nereaª≥ (donora
lømenis) attiecøbß uz anti-HIV 1 un 2, anti-HCV
un HBSAg. Jßrøkojas saska…ß ar vispßrpie…emto
biodroÌøbas praksi.
Kat. Nr.: 31985 100 ml ar L-glutamønu
Barotnes ar iztr›kstoÌu komponentu:
500 ml ar L-glutamønu
Kat. Nr.: *11058 500 ml bez fenolsarkanß
51985 500 ml ar GlutaMAX‘ I
UzglabßÌanas nosacøjumi: uzglabßt temperat›rß no 2 lødz 8°C, tumÌß
vietß.
GlabßÌanas laiks: skatøt derøguma termi…u uz produkta mar‰≥juma.
PIEZæME: Kataloga Nr. 11058 gadøjumß skatøt arø turpmßk
min≥to Component-Deficient Medium
Supplementation (Barotnes ar tr›kstoÌu
komponentu papildinßjumu)
Opti-MEM ® I ir daudzpusøga, ‰ømiska barotne, kuras formula
ºauj stipri samazinßt seruma daudzumu, kas vajadzøgs zødøtßju
Ì›nu audz≥Ìanai in vitro.
Opti-MEM ® I ir daudzfunkcionßla barotne, ko lieto, lai
samazinßtu vajadzøgo seruma daudzumu plaÌam Ì›nu løniju
klßstam un aplikßcijßm.Tß ir izrßdøjusies efektøva gan
adherentu, gan neadherentu Ì›nu løniju audz≥Ìanß un
uztur≥Ìanß. Ja to papildina ar 2-4% govs embrija serumu vai
alternatøviem serumiem, Opti-MEM ® I veicina Ì›nu
vairoÌanßs ßtrumu un maksimßlo Ì›nu bløvumu, kas atbilst
tradicionßlajßm barotn≥m, kuras papildinßtas ar 10% govs
embrija serumu, un daudzos gadøjumos pat pßrsp≥j tßs.
Relatøvi neizv≥løgas Ì›nu lønijas var uztur≥t ilgtermi…a kult›rß,
pat v≥l vairßk samazinot seruma daudzumu. Ja lieto
adherentas Ì›nu lønijas un mazßk nekß 2% seruma
papildinßjumu vai arø maisøjumu sist≥mu, piem≥ram,
veltnøÌpudeles, barotne jßpapildina ar 100 mg/l CaCl2.
Tß kß Opti-MEM ® I ir plaÌi izmantojama daÈßdu tipu Ì›nu
pavairoÌanß,tß ir optimßls risinßjums daudzu Ì›nu kult›ru
audz≥Ìanß.
Opti-MEM ® I ra,oÌanß izmantotßs izejvielas pßrbauda,
izmantojot stingrus GIBCOTM kvalitßtes standartus. Lai
preparßta partijas b›tu viendabøgas (tas ir svarøgi
zinßtniskajos p≥tøjumos uz raÈoÌanß), pßrbauda gatavßs
barotnes efektivitßti.
Opti-MEM ® I glabßÌanas laiks ir salødzinßms ar tradicionßlo
glutamøna preparßtu glabßÌanas laiku. Ïø stabilitßte dod
iesp≥ju laboratorijßm uzkrßt un uztur≥t Opti-MEM ® I
krßjumus atbilstoÌi laboratorijas darba vajadzøbßm.
Preparßts
Opti-MEM ® I ir Eagle's Minimal Essential Medium
modifikßcija, kurß par buferu izmantots HEPES un nßtrija
bikarbonßts un kas papildinßta ar hipoksantønu, timidønu,
nßtrija pirovßtu, L-glutamønu vai GlutaMAX,
mikroelementiem un augÌanas faktoriem. Proteøna lømenis ir
minimßls (15 mg/ml), un vienøgie proteøna papildinßjumi ir
insuløns un transferøns. Kß pH indikators ir pievienots
fenolsarkanais samazinßtß koncentrßcijß. Opti-MEM ® I pirms
26
latviešu
Opti-MEM ® I barotne ar samazin‚tu seruma daudzumu MEM modifik‚cija (Eagle's)
lietoÌanas var papildinßt ar 2-merkaptoetanolu. Lai atvieglotu
darbu ar hibridomßm, CaCl2 lømeni samazina lødz 99,9 mg/l.
Lieto anas pamßcøba
Pßreja uz Opti-MEM ® I
Pßreja uz Opti-MEM ® I notiek vienkßrÌi. Lielßkajai daºai
aplikßciju nav nepiecieÌama atradinßÌana, lai par 50%
samazinßtu seruma papildinßjumu, kad veic pßreju uz
Opti-MEM ® I. Pßreju var veikt, vienkßrÌi centrifug≥jot Ì›nas,
nolejot centrifugßtu un atkßrtoti suspend≥jot tßs Opti-
MEM ® I ar samazinßtu seruma papildinßjumu. (Sk.Aplikßciju
iedaºas tabulas - tipisks seruma papildinßjuma samazinßjums).
Papildu seruma samazinßjumu var panßkt, veicot minimßlu
atradinßÌanu. Optimßlo seruma papildinßjumu katrai
konkr≥tajai aplikßcijai nosaka, pamatojoties uz paredzamajiem
efektivitßtes rßdøtßjiem (augÌanas veicinßÌana, sekundßrß
metaboløtu raÈoÌana u.c.). Opti-MEM ® I plaÌßka izmantoÌana
Ì›nu løniju uztur≥Ìanß nav mazinßjusi Ì›nu dzøvotsp≥ju vai
augÌanas ßtrumu.
Opti-MEM ® I nedrøkst tur≥t tieÌß apgaismojumß.
2-Merkaptoetanola lieto_ana
2-merkaptoetanols ir reduc≥joÌs aªents, kas uzlabo
augÌanu1 ,veªetatøvo Ì›nu vairoÌanßs efektivitßti 2 un/vai
antivielu sint≥zi 3 konkr≥tßs Ì›nu lønijßs. Ïøs parßdøbas
kin≥tika nav pilnøbß noskaidrota.Vairumam aplikßciju nav
vajadzøgs 2-merkaptoetanola papildinßjums.
Tß kß Opti-MEM ® I ir izmantojams plaÌam aplikßciju klßstam
ar vairßkiem Ì›nu tipiem, ieteicams nov≥rt≥t 2merkaptoetanola
papildinßjuma lietderøbu, …emot v≥rß
konkr≥to aplikßciju.
2-merkaptoetanols ir pieejams atsevỉi kß 1000X
koncentrßts (5.5x10 -2M) Dulbecco's Phosphate Buffered
Saline formß bez kalcija un magnija 21985, 50 ml.To var
pievienot Opti-MEM ® I tieÌi pirms lietoÌanas. Opti-MEM ® I
ir stabils divus m≥neÌus p≥c 2-merkaptoetanola
pievienoÌanas ar noteikumu, ka Ìis laikposms nepßrsniedz
derøguma termi…u, kas norßdøts uz Opti-MEM ® I vai 2merkaptoetanola
mar‰≥juma.
Ja v≥las, aseptiskß veidß var pievienot 0,5 ml 2merkaptoetanola
(1000X) uz katriem 500 ml Opti-MEM ® I.
IevadøÌanu veikt ar pipeti, nes›cot ar muti. R›pøgi sajaukt
skalojot (nekratøt). Neizlietotßs 2-merkaptoetanola devas
uzglabßt cieÌi nosl≥gtß oriªinßlß iepakojumß.2merkaptoetanola
galøgß koncentrßcija Opti-MEM ® I sastßvß
b›s 5.5x10 -5 M.
Informßcija par aplikßcijßm
Lielßko daºu Ì›nu,ko parasti kultiv≥ barotn≥, kas papildinßta
ar serumu, var tieÌi pßrnest uz Opti-MEM ® I ar minimßlu
50% seruma samazinßÌanu.
Turpmßka b›tiska seruma daudzuma samazinßÌana ir panßkta
ar daÈßdßm murønmielomßm (SP2/0-Ag14, P3X63-Ag8.653,
P3-NS1-Ag4-1) un atvasinßtßm hibridomßm.
M≥s esam panßkuÌi b›tisku seruma daudzuma samazinßjumu,
kas vajadzøgs normßlas un audz≥ja izcelsmes fibroblastu un

epit≥lijÌ›nu audz≥Ìanai. Ja izmanto adherentas Ì›nu lønijas un
mazßk nekß 2% seruma papildinßjumu vai maisøjuma sist≥mu,
piem≥ram, veltnøÌpudeles, barotne jßpapildina ar 100 mg/l
CaCl2. GIBCOTM p≥tøjumos ir konstat≥ts, ka papildinßjumu ar govs
embrija serumu (FBS) var samazinßt, izmantojot Opti-MEM ® I
Ė apjomß,kßds norßdøts turpmßk Ìßdßm Ì›nu lønijßm, vienlaikus
uzturot augÌanas ßtrumu, kas atbilst augÌanas ßtrumam bazßlß
barotn≥ ar lielßku seruma papildinßjuma lømeni.
Ï›nu tipi % FBS Opti-MEM ® Hibridomu tehnoloªija Ė pele un cilv≥ks
I sastßvß
Sint≥ze 4
Klon≥Ìana 2 - 4
Aug_ana un Ab raěo_ana Ė mielomas un noteiktas hibridomas 0,5 - 2
Diploødu fibroblastu Ì›nu lønijas 2 - 4
Primßrie fibroblasti 2 - 4
řurku un kßmju embriju Ì›nu lønijas 2
Limfoblastoødo Ì›nu lønijas 0,5 - 2
P≥rti‰u aknu Ì›nas 4
Cilv≥ku un govju embriju aknu Ì›nas 2 - 4
Opti-MEM ® I papildinßÌana ar alternatøviem zødøtßju
serumiem ir devusi nozømøgus rezultßtus. Opti-MEM ® I, kas
papildinßts ar 4% alternatøviem serumiem, darbojies lødzøgi un
pat labßk nekß bazßlßs barotnes, kas papildinßtas ar 10% FBS
Ìßdßs aplikßcijßs:
Aplikßcija Ï›nu lønija Alternatøvs serums, 4%
AugÌanas veicinßÌana Sp2/0-Ag14 (Sp2) teºÌ, zirgs
AE-1 (Sp2 atvasinßta hibridoma) teºÌ, zirgs
CHO zirgs
BHK-21 teºÌ, zirgs
Klon≥Ìana Sp2 teºÌ, jaundzimis teºÌ, zirgs
P3x63-Ag8.653 (653) teºÌ, jaundzimis teºÌ, zirgs
Veªetatøva. Ì›nu vairoÌana
teºÌ, zirgs
653 teºÌ, zirgs
BHK-21 teºÌ, zirgs
CHO teºÌ, jaundzimis teºÌ
MAb raÈoÌana AE-1 teºÌ, jaundzimis teºÌ, zirgs
IerobeÈota apjoma p≥tøjumu laikß Opti-MEM ® I
elektroporßcija ir nodroÌinßjusi lielßku pßrejoÌo g≥nu
ekspresiju un Ì›nu dzøvotsp≥ju salødzinßjumß ar tipisku
elektroporßcijas barotni. Opti-MEM ® I ar 2-merkaptoetanolu
uzlabo transfekcijas efektivitßti CV-1 un COS 1 Ì›nßs, ko
pßrveido ar stimulßcijas vektoru, kurÌ atbilst p≥rti‰a SV-40. 4,5
M≥s plßnojam regulßri aktualiz≥t Opti-MEM ® I lietoÌanu
atbilstoÌi konkr≥tßm prasøbßm attiecøbß uz Ì›nßm. B›sim
pateicøgi, ja zinßtnieki, kas izmanto Opti-MEM ® I, daløsies
savß pieredz≥ ar GIBCOTM , lai ieg›to informßciju var≥tu
sa…emt arø pßr≥jie zinßtnieki.
Component-Deficient Medium Supplementation (barotne ar
tr›kstoÌu komponentu)
Izmantojot Opti-MEM ® I tr›kstoÌß komponenta varißciju,
sßkotn≥jam preparßtam atbilst Ìßda papildinßjuma
koncentrßcija:
Kat. Nr. 11058 fenolsarkanais 0.00160 gm/L
Kvalitßtes kontrole
Opti-MEM ® I pßrbauda, veicot pH, osmolalitßtes,
endotoksønu, bakteriju, s≥nøÌu un mikoplazmu testus.
Endotoksønu lømenis ir mazßks par 1,0 EU/ml.
Katru Opti-MEM ® I partiju nov≥rt≥, izmantojot jutøgas
kvantitatøvas analøzes metodes, lai noteiktu preparßta sp≥ju
nodroÌinßt murønmielomas Ì›nu lønijas klon≥Ìanas efektivitßti
un adherentas Ì›nu lønijas augÌanu multiplßs subkult›rßs.
Test≥jamßs Opti-MEM ® I partijas ar 2% (CHO augÌana) un
4% (Sp2 klon≥Ìana) seruma papildinßjumu salødzina ar
iepriekÌ apstiprinßtu Opti-MEM ® I kontrolpartiju.
GIBCOTM Ì›nu kult›ras ̉idruma produktus izgatavo
aseptiskß procesß, kurß pßrbauda katru etapu, lai nodroÌinßtu
visu produktu atbilstøbu nozares standarta sterilitßtes
nodroÌinßjuma lømenim 10-3 ; t.i., produkts, kurß piesßr…ojuma
lømenis raÈoÌanas laikß nav lielßks par 1 uz 1000 vienøbßm.
Visaugstßko sterilitßtes nodroÌinßjuma lømeni (vienßds ar 10-6 vai lielßks) nevar panßkt, nesteriliz≥jot terminßlu, kas kait≥
Ì›nu kult›ras produktu darbøbai
UzglabßÌana
Tß kß ‰ømiski defin≥tßm barotn≥m ºoti svarøgs ir atbilstoÌs
iepakojums, visß uzglabßÌanas laikß iesakßm izmantot
oriªinßlo iepakojumu.
Lai Opti-MEM ® I darbøba b›tu optimßla, pirms lietoÌanas
preparßts jßglabß no 2 lødz 8°C, tumÌß vietß.
Opti-MEM ® I var iegßdßties arø ekonomiskßkß veidß kß
pulveri. Izmantojiet GIBCOTM katalogu vai sazinieties ar
Invitrogen tirdzniecøbas pßrstßvi, lai g›tu søkßku informßciju.
Atsauces:
1 Jayme, Dabarotn W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation
of Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Papildu informßciju vai tehnisku palødzøbu saistøbß ar Ìo vai
citu GIBCOTM raÈojumu var sa…emt, sazinoties ar Tehnisko
dienestu pa e-pastu eurotech@invitrogen.com vai
izmantojot GIBCOTM raÈojumu katalogß atrodamu viet≥jßs
pßrstßvniecøbas tßlru…a numuru.
Varat arø sazinßties ar Invitrogen tirdzniecøbas pßrstßvi vai
apmekl≥t m›su mßjlapu www.invitrogen.com.
Paredz≥ts izmantoÌanai in vitro diagnostikß.
UZMANæBU: nav paredz≥ts cilv≥ku vai dzøvnieku terapijai.
Preparßta izmantoÌana citß nol›kß, kas nav
norßdøts mar‰≥jumß, var b›t viet≥jßs
likumdoÌanas pßrkßpums.
*Tikai zinßtniskiem p≥tøjumiem.
UZMANæBU: nav paredz≥ts cilv≥ku vai dzøvnieku diagnostikai
vai terapijai.
27

D¥MESIO! Ëmogaus kilmµs medÈiagos yra nereaktyvios
(donoro lygis) anti-HIV 1 & 2, anti-HCV ir
HBSAg.Tvarkykite pagal nustatytas biologinµs
saugos taisykles.
Kat. Nr.: 31985 100 mL su L-gliutaminu
Bekomponentµ terpµ:
500 mL su L-gliutaminu
Kat. Nr.: *11058 500 mL be fenolio raudonojo
51985 500 mL su GlutaMAX‘ I
Laikymo s©lygos: nuo 2 iki 8°C temperat›roje, tamsoje.
Galiojimo laikas: Galiojimo dat© Èr. preparato etiketµje.
PASTABA: Dar apie katalogo Nr. 11058 Èr. „Papildymas
bekomponente terpe” toliau.
Opti-MEM ® I yra universali, chemiÌkai apibrµÈta terpµ, kuri
leidÈia pastebimai sumaÈinti serumo kiekΩ,reikaling© Èinduoli„
l©stelµms kultivuoti in vitro.
Opti-MEM ® I yra universali terpµ, kuri leidÈia Èenkliai
sumaÈinti serumo kiekΩ,reikaling© Ωvairi„ l©steli„ linijoms ir
Ωvairiems pritaikymo atvejams. Nustatyta, kad Ìi terpµ
efektyviai padeda auginti ir iÌlaikyti sukibusi„ ir nesukibusi„
l©steli„ linijas. PapildÈius 2-4% embrioniniu galvij„ serumu
arba alternatyviais serumais, Opti-MEM ® I iÌlaiko (o kartais
net padidina) augimo greitΩ ir maksimalius l©steli„ tankius,
b›dingus Ωprastoms terpµms, papildytoms 10% embrioniniu
galvij„ serumu. Santykinai nereiklios l©steli„ linijos ilgalaikµje
kult›roje gali b›ti iÌlaikomos net dar labiau sumaÈinus
serumo kiekΩ.Jei naudojamos sukibusi„ l©steli„ linijos ir
maÈiau nei 2% serumo priedas arba maiÌymo sistemoje, pvz.,
sukamuose buteliuose, terpµ turµt„ b›ti papildyta dar 100
mg/L CaCl2.
Dµl savo universalumo auginant Ωvairi„ tip„ l©steles
Opti-MEM ® I terpµ optimaliai tinka daugeliui l©steli„
kult›r„.
Opti-MEM ® I gamybai naudojamos Èaliavos yra iÌbandomos
pagal grieÈtus GIBCO TM kokybµs standartus. Siekiant
uÈtikrinti tyrim„ ir gamybos poÈi›riu svarb„ kiekvienos
serijos atitikim©,iÌbandomas pilnos terpµs veiksmingumas.
Opti-MEM ® I galiojimo laikas prilygsta Ωprastini„ form„,
kuri„ sudµtyje yra gliutamino, galiojimo laikui.Todµl
laboratorijos gali kaupti ir saugoti Opti-MEM ® I atsargas
Ωprasta tvarka.
Sudµtis
Opti-MEM ® I yra „Eagle's Minimal Essential Medium”
modifikacija, pagerinta naudojant HEPES ir natrio-vandenilio
karbonat©,papildyta hipoksantinu, timidinu, natrio piruvatu, Lgliutaminu
ar GlutaMAX, mikroelementais ir augimo
faktoriais. Protein„ lygis yra minimalus (15 mg/mL),
vieninteliai proteino priedai – insulinas ir transferinas.
SumaÈintos koncentracijos fenolio raudonasis pridµtas kaip
Ph indikatorius. PrieÌ naudojim© Opti-MEM ® I gali b›ti
papildytas 2-merkaptoetanoliu.Tam, kad b›t„ patogiau dirbti
su hibridomomis, CaCl2 lygis sumaÈintas iki 99,9 mg/L.
28
lietuviškas
Opti-MEM ® I sumaÈinto serumo kiekio terpµ MEM (Eagle's) modifikacija
Naudojimo instrukcijos
Konvertavimas Ω Opti-MEM ® I
Konvertavimas Ω Opti-MEM ® I nµra sudÈtingas. Daugeliu
atvej„, norint 50% sumaÈinti reikalingo pridµti serumo kiekΩ
konvertuojant Ω Opti-MEM ® I, atskyrimo proced›ros nµra
b›tinos. Konvertuoti galima tiesiog centrifuguojant l©steles,
dekantuojant virÌdegutinΩ vandenΩ ir pakartotinai
suspenduojant jas Ω Opti-MEM ® I, naudojant sumaÈint©
pridedamo serumo kiekΩ. (Dar apie tipiÌk© pridedamo
serumo kiekio sumaÈinim© Èr. lentelπ punkte „Pritaikymas”).
Papildomai serumo kiekΩ sumaÈinti galima taikant minimal„
atskyrim©. Optimalus pridedamo serumo kiekis kiekvienu
konkre´iu atveju turµt„ b›ti nustatomas remiantis
pageidaujamomis veiksmingumo savybµmis (augimo
skatinimas, antrini„ metabolit„ gamyba ir kt.). Ilgiau
naudojant Opti-MEM ® I l©steli„ linijoms iÌlaikyti,
gyvybingumo ar augimo grei´io sumaȵjimo nebuvo
pastebµta. Saugokite Opti-MEM ® I nuo tiesioginµs Ìviesos.
2-merkaptoetanolio naudojimas
2-merkaptoetanolis yra reduktorius, kuris, kaip buvo
pastebµta, skatina tam tikr„ l©steli„ linij„ augim© 1 , dengimo
efektyvum© 2 ir (arba) antik›n„ sintezπ3 . Ïio reiÌkinio kinetika
nµra visiÌkai iÌaiÌkinta. Daugeliu atvej„ papildymas
2-merkaptoetanoliu nµra b›tinas.
Kadangi Opti-MEM ® I pritaikymas yra labai platus ir Ìis
preparatas veikia Ωvairi„ tip„ l©steles, vertµt„ Ωvertinti
papildymo 2-merkaptoetanoliu efektyvum© konkre´iais
pritaikymo atvejais.
2-merkaptoetanolis si›lomas atskirai kaip 1000X
koncentratas (5,5x10-2M) Dulbecco fosfatu pagerintoje
druskoje be kalcio ir magnio, 21985, 50 mL. PrieÌ pat
naudojim© Ìi medÈiaga gali b›ti pridedama Ω Opti-MEM ® I.
Opti-MEM ® I b›na stabilus du mµnesius po papildymo 2merkaptoetanoliu
(jei neb›na pasibaigusi ant Opti-MEM ® I
arba 2-merkaptoetanolio etike´i„ nurodyta galiojimo data).
Jei reikia, steriliai pridµkite 0,5 mL 2-merkaptoetanolio
(1000X) Ω kiekvien© 500 mL Opti-MEM ® I. Nenaudokite
pipetµs burna. Sukamaisiais judesiais gerai iÌmaiÌykite
(nekratykite). Nesunaudot© 2-merkaptoetanolio likut_ laikykite
sandariai uÈkimÌπ pirminµje talpoje. Galutinµ 2merkaptoetanolio
koncentracija Opti-MEM ® I bus 5,5x10-5M. Informacija apie pritaikym©
Dauguma l©steli„, Ωprastai iÌaugint„ serumu papildytoje
terpµje, gali b›ti perkeltos tiesiai Ω Opti-MEM ® I, sumaÈinus
serumo kiekΩ bent 50%.
Dar labiau sumaÈinti reikaling© serumo kiekΩ pavyko
naudojant Ωvairias peli„ mielomas (SP2/0-Ag14, P3X63-
Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) ir sukurtas hibridomas.
Mums taip pat pavyko Èenkliai sumaÈinti serumo kiekΩ,
reikaling© fibroblastams ir normalioms bei navikinµms
epitelio l©stelµms auginti. Jei naudojamos sukibusi„ l©steli„
linijos ir maÈiau nei 2% serumo priedas arba maiÌymo
sistemoje, pvz., sukamuose buteliuose, terpµ turµt„ b›ti
papildyta dar 100 mg/L CaCl2.

„GIBCO TM ” atliktas tyrimas parodµ, kad naudojant
Opti-MEM ® I pridedamo embrioniniu galvij„ serumo (EGS)
kiekΩ galima sumaÈinti iki toliau konkre´ioms l©steli„ linijoms
nurodyt„ lygi„, tuo pat metu iÌlaikant bazinei terpei b›ding©
augimo greitΩ, esant aukÌtesniems pridedamo serumo
lygiams.
L©steli„ tipai EGS % Opti-MEM ® I terp›je
Hibridom„ technologija – pelµs ir Èmonµs
Sujungimas 4
Klonavimas 2 - 4
Augimas ir Ab gamyba – mielomos ir sukurtos hibridomos 0,5 - 2
Diploidini„ fibroblast„ l©steli„ linijos 2 - 4
Pirminiai fibroblastai 2 - 4
Ëiurki„ ir Èiurkµn„ embrion„ l©steli„ linijos 2
Limfoblastoidini„ l©steli„ linijos 0,5 - 2
BeÈdÈioni„ inkst„ l©stelµs 4
Ëmoni„ ir galvij„ embrion„ inkst„ l©stelµs 2 - 4
Opti-MEM ® I papildymas alternatyviais Èinduoli„ serumais
taip pat davµ Ωsp›ding„ rezultat„. Opti-MEM ® I, papildyto 4%
alternatyviais serumais, savybµs buvo panaÌios arba kai
kuriais atvejais geresnµs uÈ bazinµs terpµs, papildytos 10%
EGS, savybes:
Pritaikymas L©steli„ linija Alternatyvus serumas, 4%
Augimo skatinimas Sp2/0-Ag14 (Sp2) VerÌelis, arklys
AE-1 (Sp2 sukurta hibridoma) VerÌelis, arklys
CHO Arklys
BHK-21 VerÌelis, arklys
Klonavimas Sp2 VerÌelis, naujagimis verÌelis, arklys
P3x63-Ag8.653 (653) VerÌelis, naujagimis verÌelis, arklys
Dengimas 653
VerÌelis, arklys
VerÌelis, arklys
BHK-21 VerÌelis, arklys
CHO VerÌelis, naujagimis verÌelis
MAb gamyba AE-1 VerÌelis, naujagimis verÌelis, arklys
Atliekant kai kuriuos tyrimus, elektroporacijos Opti-MEM ® I
terpµje metu buvo nustatyti aukÌtesni kintan´i„ gen„
ekspresij„ lygiai ir l©steli„ gyvybingumas nei tipinµs
elektroporacijos terpµje. Buvo nustatyta, kad Opti-MEM ® I
su 2-merkaptoetanoliu padidino transfekcijos efektyvum©
CV-1 ir COS 1 l©stelµse, transfekuotose beÈdÈioni„ SV-40
tipo stimuliavimo vektoriumi. 4,5
M›s„ tikslas – nuolat tobulinti Opti-MEM ® I pritaikym©,
atsiÌvelgiant Ω specifinius l©steli„ poreikius. B›tume dµkingi, jei
tyrinµtojai, naudojantys Opti-MEM ® I, pasidalyt„ savo
patirtimi su „GIBCO TM ”, kad gauta informacija b›t„ prieinama
mokslo visuomenei.
Bekomponentµs terpµs papildymas
Naudojant Opti-MEM ® I bekomponentπ modifikacij©,
pirminπ form© atitiks Ìi priedo koncentracija:
Kat. Nr. 11058 fenolio raudonasis, 0.00160 gm/L
Kokybµs kontrolµ
Su Opti-MEM ® I terpe atliekami pH, osmoliariÌkumo,
endotoksinis, bakterinis, grybelinis ir mikoplazmos testai.
Endotoksin„ lygis yra maÈesnis nei 1,0 EU/mL.
Kiekviena Opti-MEM ® I seriia Ωvertinama atliekant tikslias
kiekybines analizes, nustatant jos sugebµjimΩ iÌlaikyti peli„
mielom„ l©steli„ linijos klonavimo efektyvum© ir augim©
keliose sukibusi„ l©steli„ linijos subkult›rose. Bandomosios
Opti-MEM ® I serijos, papildytos 2% (CHO augimas) ir 4%
(Sp2 klonavimas) serumu, lyginamos taikant anks´iau
patvirtint© Opti-MEM ® I kontrolπ.
„GIBCO TM “ l©steli„ kult›ros skys´io preparatai yra ruoÌiami
steriliai; kiekvienas ruoÌimo etapas buvo patvirtintas siekiant,
kad visi preparatai atitikt„ pramonµs standarto sterilumo
uÈtikrinimo lygΩ 10-3 ; tai yra preparato uÈterÌtumo lygis
gamybos proceso metu turi b›ti ne didesnis nei 1 iÌ 1000
vienet„.AukÌ´iausias sterilumo uÈtikrinimo lygis (lygus arba
didesnis nei 10-6 ) gali b›ti pasiektas tik atliekant galutinπ
sterilizacij©, kuri kenkia l©steli„ kult›r„ preparat„
veiksmingumui.
Laikymo s©lygos
Kadangi tinkama chemiÌkai apibrµÈtos terpµs pakuotµ yra
ypa´ svarbi, ilgalaikiam saugojimui rekomenduojame naudoti
pirmines talpas.
Optimaliam veiksmingumui uÈtikrinti iki naudojimo
Opti-MEM ® I turµt„ b›ti laikoma nuo -5 iki -20°C
temperat›roje, tamsoje.
Opti-MEM ® I taip pat yra si›lomas ekonomiÌk„ milteli„
pavidalu. Dar Èr. „GIBCO TM ” kataloge arba kreipkitµs Ω
„Invitrogen” prekybos atstov©.
Literat›ra:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Prireikus daugiau informacijos apie ÌΩ ar kitus GIBCO TM
preparatus arba techninµs pagalbos, kreipkitµs Ω techninio
aptarnavimo personal© elektroniniu paÌto adresu
eurotech@invitrogen.com arba ieÌkokite atstov„ j›s„
regione telefono numeri„ „GIBCO TM “ preparat„ kataloge.
Taip pat galite kreiptis Ω „Invitrogen“ prekybos atstov© arba
aplankyti m›s„ interneto tinklalap„ www.invitrogen.com.
Skirta naudoti in vitro diagnostikos tikslais.
D¥MESIO! Nenaudojama Èmoni„ ar gyv›n„ gydymo
tikslais. Naudojant ne pagal etiketµje nurodyt©
paskirtΩ, gali b›ti paÈeisti Ìalies Ωstatymai.
*Naudojama tik tyrimo tikslais.
D¥MESIO! Nenaudojama Èmoni„ ar gyv›n„ diagnostikos
bei gydymo tikslais.
29

OSTRZEŻENIE: Materiały pochodzenia ludzkiego nie
wykazują reakcji (na poziomie dawcy) na
przeciwciała anti-HIV 1 i 2, anti-HCV i
HBsAg. Postępować zgodnie z przyjętymi
zasadami bezpieczeństwa biologicznego.
Nr kat.: 31985 100 ml Zawiera l-glutaminę
Pożywki bez niektórych składników:
500 ml Zawiera l-glutaminę
Nr kat.: *11058 500 ml Nie zawiera fenolosulfoftaleiny
51985 500 ml Zawiera pożywkę GlutaMAX‘ I
Warunki przechowywania: temp. 2 do 8°C, w ciemnym pomieszczeniu.
Okres przydatności do użycia: Zobacz termin przydatności do spożycia
na etykiecie produktu.
UWAGA: Numeru katalogowego 11058 dotyczy także
sekcja Pożywki bez niektórych składników —
wzbogacanie występująca poniżej.
Preparat Opti-MEM ® to uniwersalna, chemicznie określona pożywka,
przeznaczona do znacznego zmniejszenia ilości surowicy wymaganej
przy hodowli komórek ssaków in vitro.
Preparat Opti-MEM ® I to uniwersalne medium, o wykazanej
użyteczności w zmniejszeniu zapotrzebowania na surowicę w
przypadku szerokiej gamy linii komórek i zastosowań. Wykazano ich
skuteczność w hodowli i utrzymywaniu linii komórek adherentnych i
nieadherentnych. Po uzupełnieniu 2-4% płodowej surowicy bydlęcej lub
innymi surowicami pożywka Opti-MEM ® I podtrzymuje tempo
namnażania i maksymalne gęstości komórek porównywalne, a w
niektórych przypadkach nawet lepsze, z konwencjonalnymi pożywkami
z 10% płodowej surowicy bydlęcej. Linie komórek o względnie
niedużych wymaganiach można utrzymywać w długoterminowej
hodowli przy jeszcze większym znaczącym zmniejszeniu wykorzystania
surowicy. Przy stosowaniu z liniami komórek adherentnych i
uzupełnieniu 2% surowicy lub w systemach mieszających pożywkę
należy uzupełnić 100 mg/l CaCl2.
Uniwersalność pożywki Opti-MEM ® I propagacji komórek różnego
typu powoduje, że jest to najlepszy wybór w przypadku wielu
wymagań hodowli komórek.
Surowce użyte do produkcji pożywki Opti-MEM ® I spełniają surowe
wymagania standardów jakości firmy GIBCOTM . Sprawdzana jest
wydajność pełnej pożywki w celu zapewnienia jednolitej jakości
poszczególnych partii wymaganej w przypadku zastosowań
produkcyjnych i badawczych.
Czas składowania pożywki Opti-MEM ® I porównywalny jest czasem
składowania konwencjonalnych formulacji zawierających glutaminę. Ta
stabilność pozwala na to, aby laboratoria mogły magazynować i
utrzymywać zapasy pożywki Opti-MEM ® potrzebne odpowiednie do
rutynowych zadań laboratoryjnych.
Formulacja
Preparat Opti-MEM ® I to zmodyfikowana pożywka Eagle's Minimal
Essential Medium, buforowana HEPES i wodorowęglanem sodu oraz
wzbogacona hipoksantyną, tymidyną, pirogronianem sodu, l-glutaminą
lub GlutaMAX, pierwiastkami śladowymi i czynnikami wzrostu.
Poziom protein jest minimalny (15 mg/ml) jedynymi składnikami
proteinowymi są insulina oraz transferyna. Fenolosulfotaleina podana
jest w niewielkim stężeniu jak wskaźnik pH. Pożywkę Opti-MEM ® I
można wzbogacić 2-merkaptoetanolem przed użyciem. Poziom CaCl2
został obniżony do 99,9 mg/l, aby ułatwić pracę z hybrydomami.
30
polski
Opti-MEM ® I Pożywka o zmniejszonej zawartości surowicy Modyfikacja MEM (Eagle's)
Wskazówki dotyczące użytkowania
Przejście na pożywkę Opti-MEM ® I
Przejście na pożywkę Opti-MEM ® I jest łatwe. W większości
zastosowań nie są wymagane procedury odzwyczajania, aby osiągnąć
50% zmniejszenie uzupełnianie surowicą przy przejściu na pożywkę
Opti-MEM ® I. Przejście można przeprowadzić przez zwykłe
odwirowanie komórek, zlanie nadsącza i zanurzenie ich w pożywce
Opti-MEM ® I ze zredukowanym wzbogaceniem w surowicę. (Zobacz
tabele w sekcji Zastosowania, aby uzyskać informacje o zmniejszeniu
uzupełniania surowicą). Dodatkową redukcję zużycia surowicy można
uzyskać przy minimalnym okresie odstawiania Opcjonalne wzbogacanie
surowicą do określonych zastosowań powinno być określone na
podstawie oczekiwanej charakterystyki wydajności (wspomaganie
wzrostu, produkcja metabolitów wtórnych itd.).Wydłużony okres
używania pożywki Opti-MEM ® I do utrzymywania linii komórkowych
nie wykazał zmniejszenia żywotności ani tempa wzrostu. Pożywkę
Opti-MEM ® I należy przechowywać z dala od bezpośredniego
działania światła.
Stosowanie 2-merkaptoetanolu
2-merkaptoetanol to środek redukujący, który wykazał zdolność do
wspomagania wzrostu1 , skuteczności posiewu2 i (lub) syntezy
przeciwciał3 w przypadku określonych linii komórek. Kinetyka tego
zjawiska nie została dotychczas w pełni wyjaśniona.W przypadku
większości zastosowań wzbogacanie 2-merkaptoetanolem nie jest
potrzebne.
Ponieważ pożywka Opti-MEM ® I sprawdza się w szerokim zakresie
zastosowań z wieloma typami komórek, należy rozważyć potrzebę
zastosowania wzbogacenia 2-merkaptoetanolem w zależności od
konkretnego zastosowania.
2-merkaptoetanol dostępny jest oddzielnie w postaci koncentratu
1000X (5.5x10-2M) w preparacie Dulbecco's Phosphate Buffered Saline
bez wapnia i magnezu 21985, 50 ml. Można go dodać do preparatu
Opti-MEM ® I bezpośrednio przed użyciem. Preparat Opti-MEM ® I
jest stabilny przez dwa miesiące po dodaniu 2-merkaptoetanolu, pod
warunkiem że w czasie tego okresu nie zostanie przekroczona data
przydatności do użycia podana na etykietach preparatów Opti-MEM ®
I lub 2-merkaptoetanolu.
W razie potrzeby w aseptycznych warunkach dodać 0,5 ml 2merkaptoetanolu
(1000X) na każde 500 ml pożywki
Opti-MEM ® I. Nie pipetować ustami. Wymieszać dokładnie delikatnie
wirując (nie potrząsać). Nie użyte porcje 2-merkaptoetanolu
przechowywać szczelnie zamknięte w oryginalnym opakowaniu.
Ostateczne stężenie 2-merkaptoetanolu w pożywce Opti-MEM ® I
powinno wynosić 5,5x10-5M. Informacje o zastosowaniach
Większość komórek rutynowo hodowanych w pożywkach
wzbogaconych surowicą można przenieść bezpośrednio na pożywkę
Opti-MEM ® , co przyniesie minimalnie 50% zmniejszenie zużycia
surowicy.
Dalsze znaczne zmniejszenie zapotrzebowania na surowicę można
osiągnąć przy różnych komórek szpiczaka mysiego (SP2/0-Ag14,
P3X63-Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) oraz uzyskanych z pochodnych
hybrydom.
Uzyskaliśmy także znaczące zmniejszenie ilości serum wymaganego do
wzrostu fibroblastów i komórek nabłonkowych o pochodzeniu
normalnym i rakowym. Przy stosowaniu z liniami komórek

adherentnych i uzupełnieniu 2% surowicy lub w systemach
mieszających pożywkę należy uzupełnić 100 mg/l CaCl2. W badaniach firmy GIBCOTM ustalono, że wzbogacanie płodową
surowicą bydlęcą (FBS) można zmniejszyć przez stosowanie odżywki
Opti-MEM ® do poziomów przedstawionych poniżej dla podanych linii
komórek przy zachowaniu tempa wzrostu porównywalnego z
uzyskiwanym przy stosowaniu pożywki podstawowej o wyższym
poziomie wzbogacenia surowicą.
Typy komórek % FBS w Opti-MEM ® I
Technologia hybrydomowa – komórki myszy i ludzkie
Łączenie 4
Klonowanie 2 - 4
Wzrost i produkcja Ab – szpiczaki i uznane hybrydomy 0,5 - 2
Linie fibroblastów diploidalnych 2 - 4
Fibroblasty pierwotne 2 - 4
Linie komórek embrionalnych szczurów i chomików 2
Linie komórek limfoblastoidalnych 0,5 - 2
Komórki nerek małpich 4
Ludzkie i bydlęce embrionalne komórki nerek 2 - 4
Uzupełnianie pożywki Opti-MEM ® I innymi surowicami ssaków
również przyniosło bardzo dobre rezultaty. Odżywka
Opti-MEM ® I wzbogacona 4% innych surowic wykazywała działanie
porównywalne, a w niektórych przypadkach lepsze, niż pożywki
podstawowe wzbogacone10% FBS w następujących zastosowaniach:
Zastosowanie Linia komórek Alternatywna surowica 4%
Wspomaganie wzrostu Sp2/0-Ag14 (Sp2) cielęca, końska
AE-1 (hybrydoma pochodna Sp2) cielęca, końska
CHO końska
BHK-21 cielęca, końska
Klonowanie Sp2 cielęca, nowonarodzonego cielęcia, końska
P3x63-Ag8.653 (653) cielęca, nowonarodzonego cielęcia, końska
cielęca, końska
Posiew 653 cielęca, końska
BHK-21 cielęca, końska
CHO cielęca, nowonarodzonego cielęcia
Produkcja MAb AE-1 cielęca, nowonarodzonego cielęcia, końska
W pracach o ograniczonym zakresie elektroporacja w preparacie
Opti-MEM ® I przyniosła znacznie większe poziomy ekspresji genów
przejściowych i żywotności komórek niż w przypadku elektroporacji
typowej pożywki. Pożywka Opti-MEM ® I z 2-merkaptoetanolem
polepsza skuteczność transfekcji w przypadku komórek CV-1 i COS 1
transfekowanych wektorem promocji opartym na małpim SV-40. 4,5
Zamierzamy okresowo uaktualniać zastosowania preparatu
Opti-MEM ® I w związku z określonymi wymaganiami komórkowymi.
Zachęcamy badaczy korzystających z preparatu Opti-MEM ® I do
przekazywania swoich uwag firmie GIBCOTM , dzięki czemu nowe
informacje będą mogły zostać upowszechnione w społeczności
naukowej.
Pożywki bez niektórych składników — wzbogacanie
W przypadku stosowania pożywek Opti-MEM ® I bez niektórych
składników należy oczekiwać następujących stężeń uzupełnień zgodnie
z oryginalna formulacją:
Nr kat.: 11058 fenolosulfoftaleina stężenie: 0,00160 gm/l
Kontrola jakości
Pożywka Opti-MEM ® I podawana jest testom pH, osmolowości, na
występowanie endotoksyn, bakterii, grzybów oraz mykoplazmy.
Dopuszczalny poziom endotoksyn wynosi mniej niż 1,0 jednostek
endotoksyn (EU)/ml.
Każda partia pożywki Opti-MEM ® I oceniania jest za pomocą czułych
prób ilościowych namnażania pod względem zdolności do
skutecznego podtrzymywania linii komórek szpiczaka mysiego oraz
wzrostu różnorodnych kultur linii komórek adherentnych. Partie
testowane pożywki Opti-MEM ® I uzupełnione 2% (wzrost CHO) i 4%
(klonowanie Sp2) surowicy porównywane są z uprzednio zatwierdzoną
partią kontrolną Opti-MEM ® I.
Produkty płynne do hodowli komórek firmy GIBCOTM przygotowywane są w aseptycznym procesie, którego każdy etap jest
sprawdzany w celu zapewnienia zgodności z przemysłowym
standardem sterylności o poziomie 10-3 ; tzn. produktu, wykazującego w
procesie produkcji poziom zanieczyszczenia nie większy niż 1 na 1000
jednostek. Najwyższy poziom sterylności (równy lub wyższy od 10-6 )
nie może być osiągnięty bez końcowej sterylizacji, która szkodliwe
wypłynęłaby na wydajność produktów do hodowli komórek.
Przechowywanie
Ponieważ właściwe pakowanie określonych chemicznie pożywek jest
bardzo ważne, zalecamy stosowanie oryginalnych pojemników przez
cały okres składowania.
Aby zapewnić najlepszą wydajność pożywkę Opti-MEM ® I należy
przed użyciem przechowywać w temp. od 2 do 8°C w ciemnym
pomieszczeniu.
Pożywka Opti-MEM ® I dostępna jest także w wersji ekonomicznej w
postaci proszku. Więcej informacji można uzyskać w katalogu firmy
GIBCOTM lub kontaktując się przedstawicielem firmy Invitrogen.
Bibliografia:
1 Jayme, David W. i Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. i Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. i Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. osobiste kontakty (1987).
Aby uzyskać więcej informacji lub wsparcie techniczne dotyczące tego
lub innych produktów firmy GIBCOTM , należy się skontaktować z
Serwisem Technicznym pod adresem eurotech@invitrogen.com lub
znaleźć numer telefoniczny lokalnego przedstawiciela w Państwa
regionie w katalogu produktów firmy GIBCOTM .
Można także skontaktować się z przedstawicielem handlowym firmy
Invitrogen lub szukać informacji w naszej witrynie internetowej pod
adresem: www.invitrogen.com.
Do zastosowań diagnostyki in vitro.
OSTRZEŻENIE: Nie stosować w terapii ludzi lub zwierząt.
Zastosowania inne niż podane w etykietce
produktu mogą stanowić naruszenie lokalnych
przepisów.
*Tylko do użytku w celach badawczych.
OSTRZEŻENIE: Nie stosować w diagnostyce lub terapii
ludzi lub zwierząt
31

ADVERTÊNCIA: Os materiais de origem humana são não
reactivos (a nível de doador) a anti VIH 1 e 2,
anti VCH e HBsAg. Manipular de acordo com
práticas de biosegurança estabelecidas.
N.ľ de catálogo: 31985 100 ml com L-glutamina
Meios deficientes em componentes:
500 ml com L-glutamina
N.ľ de catálogo: *11058 500 ml sem fenol-sulfoneftaleína
51985 500 ml com GlutaMAX‘ I
Condições de armazenamento: 2 a 8ºC em local escuro.
Duração quando armazenado: O prazo de validade encontra-se
inscrito no rótulo do produto.
NOTA:No caso do nľ de catálogo 11058, consultar também os
suplementos do meio deficiente em componentes abaixo.
Opti-MEM ® I é um meio versátil, quimicamente definido,
formulado para reduzir significativamente a quantidade de soro
necessária para a cultura de células mamíferas in vitro.
Opti-MEM ® I é um meio de fins múltiplos, que tem
demonstrado a sua utilidade para reduzir os requisitos de soro
numa grande variedade de linhas e aplicações celulares. O meio
tem demonstrado ser efectivo no crescimento e manutenção de
linhas celulares aderentes e não aderentes. Quando é
suplementado com soro bovino fetal a 2-4% ou soros
alternativos, Opti-MEM ® I suporta taxas proliferativas e
densidades celulares máximas comparáveis e por vezes
superiores aos meios convencionais, suplementados com soro
bovino fetal a 10%. Podem manter-se linhas celulares
relativamente não fastidiosas em culturas a longo prazo com uma
redução de soro ainda mais substancial. Se se empregarem linhas
celulares aderentes e se suplementar o meio com menos de 2%
de soro, ou em sistemas agitados, como por exemplo em frascos
rotativos, o meio deve também ser suplementado com 100 mg/l
de CaCl2.
A versatilidade de Opti-MEM ® I na propagação de vários tipos
de células faz deste o meio ideal para muitos requisitos de
culturas celulares.
As matérias-primas utilizadas para produzir Opti-MEM ® I são
verificadas por normas de qualidade da GIBCOTM , que são
altamente rigorosas. O meio completo é testado, em termos do
seu desempenho, para assegurar, de lote para lote, a consistência
necessária para aplicações de investigação e produção.
A duração de Opti-MEM ® I quando armazenado é comparável ą
das formulações convencionais que contêm glutamina.A sua
estabilidade permite que os laboratórios mantenham quantidades
e inventários de Opti-MEM ® I compatíveis com as práticas
normais de laboratório.
Formulação
Opti-MEM ® I é uma modificação do Eagle’s Minimal Essential
Medium (meio essencial mínimo de Eagle), tamponado com
HEPES e bicarbonato de sódio e suplementado com hipoxantina,
timidina, piruvato de sódio, L-glutamina ou GlutaMAX,
microelementos e factores de crescimento. O nível de proteína é
mínimo (15 mg/ml), sendo a insulina e a transferrina os únicos
suplementos de proteína. O produto inclui fenol-sulfoneftaleína a
uma concentração reduzida, o qual é um indicador do pH.
Opti-MEM ® I pode ser suplementado com 2-mercaptoetanol
antes de ser utilizado. O nível de CaCl2 é reduzido para 99,9
mg/l, para facilitar a conveniência do trabalho com hibridomas.
32
português
Opti-MEM ® I Meio de soro reduzido Modificação do MEM (Eagle’s)
Instruções de utilização
Conversão para -MEM I
A conversão para Opti-MEM ® I é fácil de efectuar. Na maior
parte das aplicações, não são necessários procedimentos de
desmame para se obter uma redução de 50% na suplementação
de soro ao fazer a conversão para Opti-MEM ® I.A conversão
pode ser feita simplesmente através da centrifugação das células,
decantação do sobrenadante e ressuspensão das células em
Opti-MEM ® I, com uma redução da suplementação de soro.
(Consultar as tabelas da secção de aplicações, as quais
apresentam um caso típico de redução da suplementação de
soro). Pode efectuar-se a redução de soro com um nível de
desmame mínimo.A suplementação ideal de soro de cada
aplicação específica deve ser determinada ą base das
características de desempenho antecipadas (promoção de
crescimento, produção de metabólito secundário, etc.).A
utilização contínua de Opti-MEM ® I na manutenção de linhas
celulares não tem demonstrado qualquer perda de viabilidade ou
taxa de crescimento. Manter Opti-MEM ® I longe da luz solar
directa.
Utilização de 2-Mercaptoetanol
2-mercaptoetanol é um agente redutor que tem demonstrado
aumentar o crescimento1 ,a eficiência da disseminação das
bactérias em placas2 e/ou a síntese de anticorpos de linhas
celulares específicas3 .Não se compreende a fundo a cinética
deste fenómeno.A maioria das aplicações não requer a
suplementação com 2-mercaptoetanol.
Visto Opti-MEM ® I ser funcional numa grande série de
aplicações com numerosos tipos de células, é prudente avaliar a
utilidade da suplementação com 2-mercaptoetanol ą base da
aplicação específica.
2-mercaptoetanol encontra-se disponível em separado, na forma
de um concentrado a 1000X (5,5x10-2M) em soro fisiológico de
Dulbecco, tamponado e fosfatado, sem cálcio ou magnésio, n.ľ de
catálogo 21985, 50 ml. Este elemento pode ser adicionado a
Opti-MEM ® I imediatamente antes da sua utilização.
Opti-MEM ® I permanece estável durante dois meses após a
adição de 2-mercaptoetanol, desde que este período não
ultrapasse o prazo de validade indicado nos rótulos de
Opti-MEM ® I e do 2-mercaptoetanol.
Caso seja desejado, pode adicionar-se assepticamente 0,5 ml de
2-mercaptoetanol (1000X) a cada 500 ml de Opti-MEM ® I. Não
pipetar com a boca. Misturar bem, através de um movimento de
rotaçčo (não agitar).Armazenar as porções de 2-mercaptoetanol
por utilizar no recipiente original, com a tampa bem apertada.A
concentração final de 2-mercaptoetanol em Opti-MEM ® I será
de 5,5x10-5M. Informações sobre as aplicações
A maioria das células normalmente cultivadas em meio
suplementado com soro pode ser transferida directamente para
Opti-MEM ® I com um mínimo de redução do soro de 50%.
Tem-se conseguido uma redução adicional substancial do
requisito de soro com vários mielomas murinos (SP2/0-Ag14,
P3X63-Ag8,653, P3-NS1-Ag4-1) e hibridomas derivados.
Temos também conseguido uma redução significativa da
quantidade de soro necessária para a cultura de fibroblastos e
células epiteliais de origem normal e tumoral. Se se empregarem
linhas celulares aderentes e se suplementar o meio com menos

de 2% de soro, ou em sistemas agitados, como por exemplo em
frascos rotativos, o meio deve também ser suplementado com
100 mg/l de CaCl2.
As investigações da GIBCO TM estabeleceram que a
suplementação com soro bovino fetal (FBS) pode ser reduzida
quando se utiliza Opti-MEM ® I, aos níveis abaixo indicados para
as linhas celulares seguintes, ao mesmo tempo que se mantêm
taxas de crescimento comparáveis com as dos meios basais, a
níveis superiores de suplementação com soro.
Tipos de células % FBS em Opti-MEM ® Tecnologia de hibridoma – ratinho e ser humano
I
Fusão 4
Clonagem 2 - 4
Crescimento e produção de AB – mielomas e hibridomas estabelecidos 0,5 - 2
Linhas celulares de fibroblastos diplóides 2 - 4
Fibroblastos primários 2 - 4
Linhas celulares de embriões de rato e hamster 2
Linhas celulares linfoblastóides 0,5 - 2
Células de rim de macaco 4
Células renais embriónicas humanas e bovinas 2 - 4
A suplementação de Opti-MEM ® I com soros mamíferos
alternativos também tem demonstrado resultados impressivos.
Opti-MEM ® I, suplementado com 4% de soros alternativos, tem
demonstrado resultados comparáveis, e em certos casos até
superiores, aos de meios basais suplementados com FBS a 10%
nas seguintes aplicações:
Aplicação Linha celular Soro alternativo a 4%
Promoção de crescimento Sp2/0-Ag14 (Sp2) Bezerro, cavalo
AE-1 (hibridoma derivado de Sp2) Bezerro, cavalo
CHO Cavalo
BHK-21 Bezerro, cavalo
Clonagem Sp2 Bezerro, bezerro recém-nascido, cavalo
P3x63-Ag8.653 (653) Bezerro, bezerro recém-nascido, cavalo
Bezerro, cavalo
Crescimento em placas 653 Bezerro, cavalo
BHK-21 Bezerro, cavalo
CHO Bezerro, bezerro recém-nascido
Produção de MAb AE-1 Bezerro, bezerro recém-nascido, cavalo
Em estudos limitados, a electroporação em Opti-MEM ® I tem
dado resultados de expressão de genes transientes e viabilidade
celular mais elevados do que o meio de electroporação típico.
Foi referido que Opti-MEM ® I, juntamente com 2mercaptoetanol,
aumenta a eficiência da transfecção em células
CV-1 e COS 1 transfectadas com um vector de promoção de
macaco semelhante a SV-40. 4,5
O nosso objectivo é actualizar periodicamente a aplicação de
Opti-MEM ® I a requisitos celulares específicos. Ficaríamos gratos
se os investigadores que empregarem Opti-MEM ® I
comunicassem as suas experiências ą GIBCOTM , para que as
informações obtidas possam ser compartilhadas com a
comunidade científica.
Suplementação com meios deficientes em componentes:
Quando se utiliza uma variação de Opti-MEM ® I deficiente em
componentes, a seguinte concentração da suplementação seria
consistente com a formulação original:
N.ľ de catálogo: 11058 fenol-sulfoneftaleína a 0,00160 gm/l
Controlo da qualidade
Opti-MEM ® I é sujeito a testes de pH, osmolalidade,
endotoxinas, bactérias, fungos e micoplasma. O nível de
endotoxinas é inferior a 1,0 EU/ml.
Cada lote de Opti-MEM ® I é avaliado, por intermédio de ensaios
quantitativos sensíveis, em termos da sua capacidade para
suportar a eficiência de clonagem de uma linha celular de
mieloma murino, e o crescimento sobre várias subculturas de
uma linha celular aderente. Os lotes de testes de Opti-MEM ® I a
uma suplementação de soro de 2% (crescimento de CHO) e 4%
(clonagem de Sp2) são comparados com um controlo de
Opti-MEM ® I previamente aprovado.
Os produtos líquidos de culturas celulares GIBCOTM são
preparados por um processo asséptico, tendo cada uma das
etapas do mesmo sido validada a fim de assegurar que todos os
produtos satisfaçam o nível padrão de segurança de esterilidade
da indústria, que é de 10-3 ; ou seja, o produto que demonstrar
um nível de contaminação de não mais de 1 em cada 1000
unidades durante o processo de fabrico. O nível mais elevado de
certeza de esterilidade (igual ou superior a 10-6 ) não pode ser
alcançado sem se efectuar a esterilização terminal, a qual é
nociva para o funcionamento de produtos de culturas celulares.
Armazenamento
Visto o acondicionamento correcto dos meios quimicamente
definidos ser da maior importância, recomendamos o emprego
dos recipientes originais para a armazenamento até ao fim do
termo. Para um desempenho ideal, deve armazenar-se
Opti-MEM ® I em local escuro e a uma temperatura de 2 a 8ºC
antes de se utilizar o meio.
Opti-MEM ® I está também disponível em forma de pó, que é
económica. Consultar o catálogo da GIBCOTM ou o
representante de vendas da Invitrogen para obter mais
informações.
Referências:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Para obter mais informações ou assistência técnica sobre estes
ou outros produtos GIBCOTM , contactar o Centro de Assistência
Técnica, em eurotech@invitrogen.com, ou consultar o catálogo
de produtos GIBCOTM , onde se encontram listados os números
de telefone locais de cada região.
O cliente pode também contactar o seu representante de vendas
da Invitrogen ou visitar o nosso site no World Wide Web, em
www.invitrogen.com.
Para utilização em diagnósticos in vitro.
ADVERTÊNCIA: Não é próprio para utilização terapêutica no
ser humano ou em animais. Qualquer aplicação
para além da utilização prevista inscrita no
produto poderá constituir uma violação da
legislação local.
*Apenas para emprego em investigações.
ADVERTÊNCIA: Não é próprio para utilização terapêutica
ou diagnóstica no ser humano ou em animais.
33

UPOZORNENIE: Materiály ≈udského pôvodu nie sú reaktívne
(úroveÕ darcu) k anti-HIV 1 a 2, anti-HCV a
HBsAg. Spracovávajte v súlade so zavedenÔmi
postupmi o bezpe´nosti práce s biologickÔm
materiálom.
Katalógové ´íslo: 31985 100 ml s L-glutamínom
Média s deficitom zloÈky:
500 ml s L-glutamínom
Katalógové ´íslo: *11058 500 ml bez fenolsulfonftaleinu
51985 500 ml s GlutaMAXOM‘ I
Podmienky uchovávania: 2 aÈ 8°C, v tme.
as pouÈite≈nosti: Dátum pouÈite≈nosti - vi± ozna´enie prípravku.
POZNÁMKA: Pre katalógové ´íslo 1058 odkazujeme tieÈ na
suplementáciu média s deficitom zloÈky niÈÌie.
Opti-MEM ® I je mnohostranné, chemicky definované
médium, formulované na vÔznamné zníÈenie mnoÈstva séra
nutného pre kultiváciu cicav´ích buniek in vitro.
Opti-MEM ® I je viacú´elové médium s preukázanÔm
vÔznamom pri zniÈovaní poÈiadaviek na sérum pre Ìiroké
spektrum bunkovÔch línií a aplikácií Preukázalo sa, Èe látka
je ú´inná na rast a udrÈanie adherentnÔch a neadherentnÔch
bunkovÔch línií. Pri suplementaci 2-4% fetálnym hovädzím
sérom alebo inÔm sérom, Opti-MEM ® I podporuje
proliferáciu a hustotu cicav´ích buniek, ktoré sú
porovnate≈né a v niektorÔch prípadoch lepÌie ako
Ìtandardné médiá obohatené o 10% fetálne hovädzie sérum.
Relatívne nechúlostivé bunkové línie sa môÈu udrÈa¤
dlhodobo kultivované aj s podstatnejÌím zníÈením séra. Ak
sa pouÈijú adherentné bunkové línie a suplementácia menej
ako 2% sérom, prípadne v agitovanom systéme, ako napr. vo
valcovitÔch f≈aÌiach, médium by sa malo ±alej doplni¤ o 100
mg/l CaCl2. Pre svoju mnohostrannos¤ pri Ìírení rôznych bunkovÔch
typov je médium Opti-MEM ® I optimálnou vo≈bou pre rad
poÈiadaviek na bunkové kultúry.
Suroviny pouÈívané na vÔrobu Opti-MEM ® I sú preverované
prísnymi kvalitatívnymi Ìtandardami pomocou GIBCOTM Kompletné médium je testované z h≈adiska ú´innosti, aby
bola zaistená stálos¤ kaÈdej ÌarÈe, ktorá je nutná pre vÔskum
a pouÈitie vo vÔrobe.
as pouÈite≈nosti Opti-MEM ® I je porovnate≈nÔ so
ÌtandardnÔmi formuláciami obsahujúcimi glutamín. Táto
stabilita umoÈÕuje laboratóriám skladova¤ a ma¤ rezervy
Opti-MEM ® I porovnate≈né s beÈnou laboratórnou praxou.
Formulácia
Opti-MEM ® I je modifikácia Eaglovho minimálneho
základného média, pufrovaného pomocou HEPES a
hydrogénuhli´itanu sodného a suplementovaného
hypoxantínom, tymidínom, pyruvátom sodnÔm, L-glutamínom
alebo GlutaMAX, stopovÔmi prvky a rastovÔmi faktormi
Koncentrácia bielkovín je minimálna (15 mg/ml), pri´om
jedinÔmi bielkovinnÔmi doplnkami sú inzulín a transferín.
Fenolsulfonftalein sa nachádza v zníÈenej koncentrácii ako
indikátor pH. Pred pouÈitím môÈe by¤ Opti-MEM ® I
doplnenÔ o 2-merkaptoetanol. Koncentrácia CaCl2 je z
dôvodov pohodlnej práce s hybridómami zníÈená na 99,9mg/l.
34
SlovenskÔ jazyk
Opti-MEM ® I Redukované sérové médium modifikácia MEM (Eaglov)
Návod na pouÈitie
Premena na Opti-MEM ® I
Premena na Opti-MEM ® I je ≈ahká. U vä´Ìiny aplikácií nie je
pri premene na Opti-MEM ® -I treba odstavenie na získanie
zníÈenia suplementácie séra o 50% Premena sa dá vykona¤
jednoducho centrifugáciou buniek, preliatím supernatantu a
opätovnÔm suspendovaním v Opti-MEM ® I zo zníÈenou
suplementáciou séra. (Vi± tabu≈ky v kapitole PouÈitie pre
typické zníÈenie suplementácie séra). ∞alÌie zníÈenie séra sa
dá dosiahnu¤ s minimálnym odstavením. Optimálna
suplementácia sérom pre kaÈdé Ìpecifické pouÈitie sa má
stanovi¤ na základe o´akávanÔch charakteristík ú´innosti
(podpora rastu, tvorba druhotnÔch metabolitov at±.). Bolo
preukázané, Èe dlhÌie pouÈívanie Opti-MEM ® I pri udrÈovaní
bunkovÔch línií nevedie k strate Èivotnosti alebo rÔchlosti
rastu Uchovávajte Opti-MEM ® I mimo dosah priameho
svetla.
PouÈitie 2-merkaptoetanolu
2-merkaptoetanol je reduk´ná látka, o ktorej bolo dokázané,
Èe zvyÌuje rast1 ,kryciu ú´innos¤ 2 a/alebo syntézu protilátok3 ÌpecifickÔch bunkovÔch línií. Kinetika tohto fenoménu nie je
celkom objasnená. U vä´Ìiny aplikácií nie je potrebná
suplementácia 2-merkaptoetanolom.
PretoÈe Opti-MEM ® I pôsobí v Ìirokom spektre aplikácií s
radom bunkovÔch typov, je rozumné vyhodnoti¤ uÈito´nos¤
suplementácie 2-merkaptoetanolom na základe Ìpecifickej
aplikácie.
2-merkaptoetanol je k dispozícii oddelene ako 1000násonÔ
koncentrát (5,5x10-2M) v Dulbeccovom roztoku chloridu
sodného s fosfátovÔm pufrom bez kalcia a magnézia 21985,
50 ml. MôÈe sa prida¤ k Opti-MEM ® I tesne pred pouÈitím.
Opti-MEM ® I je stabilní po dobu 2 mesiacov po pridaní 2merkaptoetanolu,
pokia≈ toto obdobie nepresiahne ´as
pouÈite≈nosti uvedenÔ na Ìtítku ozna´ujúcom
Opti-MEM ® I alebo 2-merkaptoetanol.
Na vyÈiadanie pridajte asepticky 0,5 ml 2-merkaptoetanolu
(1000x) ku kaÈdÔm 500 ml Opti-MEM ® I. Nepipetujte
ústami Dôkladne premieÌa¤ rÔchlymi a krúÈivÔmi pohybmi
(netrepa¤). NepouÈité diely 2-merkaptoetanolu uchovávajte
pevne uzatvorené v originálnom obale. Kone´ná
koncentrácia 2-merkaptoetanolu v Opti-MEM ® I bude
5,5x10-5M. Informácie o aplikácii
Vä´Ìina buniek beÈne kultivovanÔch v sérom
suplementovanom médiu môÈe by¤ priamo prenesená do
Opti-MEM ® I zo zníÈením séra minimálne o 50 %.
∞alÌie podstatné zníÈenie potreby séra sa dosiahlo rôznymi
druhmi myÌieho myelómu (SP2/0-Ag14, P3X63-Ag8.653, P3-
NS1-Ag4-1) a derivovanÔmi hybridómami.
Dosiahli sme tieÈ podstatné zníÈenie mnoÈstva séra, ktoré je
treba pre rastúce fibroblasty a epiteliálne bunky normálneho
a tumorózneho pôvodu.Ak sa pouÈijú adherentné bunkové
línie a suplementácia menej ako 2% sérom, prípadne v

agitovanom systéme, ako napr. vo valcovitÔch f≈aÌiach,
médium by sa malo ±alej doplni¤ o 100 mg/l CaCl2.
VÔskumy GIBCOTM zistili, Èe suplementácia fetálnym
hovädzím sérom (FBS), pokia≈ sa pouÈije Opti-MEM ® I na
koncentrácie uvedené niÈÌie pre nasledujúce bunkové línie,
pri´om rÔchlos¤ rasta ostane porovnate≈ná so základnÔm
médiom pri vyÌÌích hladinách suplementácie sérom.
Bunkové typy % FBS v Opti-MEM ® Technológia hybridómov - myÌ a ´lovek
I
Fúzia 4
Klonovanie 2 - 4
Rast a tvorba Ab - myelómy a vytvorené hybridómy 0.5 - 2
Diploidné bunkové línie fibroblastov 2 - 4
Primárne fibroblasty 2 - 4
Embryonálne bunkové línie krÔs a Ìkre´kov 2
Lymfoblastoidné bunkové línie 0.5 - 2
Opi´ie bunky obli´iek 4
ƒudské a hovädzie embryonálne bunky obli´iek 2 - 4
Suplementácia Opti-MEM ® I inÔmi cicav´ími sérami
preukázala tieÈ pozoruhodné vÔsledky. Opti-MEM ® I
doplnenÔ o iné 4%séra sa ukázal ako zrovnate≈nÔ a v
niektorÔch prípadoch aj lepÌí neÈ základné média
suplementované 10% FBS v nasledujúcich aplikáciách:
Applikácia Bunková línia Alternatíva séra pri 4 %
Podpora rastu Sp2/0-Ag14 (Sp2) Te≈a, kôÕ
AE-1 (Sp2 derivovanÔ hybridóm) Te≈a, kôÕ
CHO KôÕ
BHK-21 Te≈a, kôÕ
Klonovanie Sp2 Te≈a, novorodené te≈a, kôÕ
P3x63-Ag8.653 (653) Te≈a, novorodené te≈a, kôÕ
Krytie 653
Te≈a, kôÕ
Te≈a, kôÕ
BHK-21 Te≈a, kôÕ
CHO Te≈a, novorodené te≈a
Tvorba MAb AE-1 Te≈a novorodené te≈a, kôÕ
V obmedzenom po´te Ìtúdií, elektroporácia v Opti-MEM ® I
viedla k vyÌÌej úrovni tranzitornej expresie génov a
Èivotnosti buniek neÈ typické elektropora´né médium
Zistilo sa, Èe Opti-MEM ® I s 2-merkaptoetanolom zlepÌuje
transfek´nú ú´innos¤ u buniek CV-1 a COS 1
transfektovanÔch s opi´ím podporujúcim vektorom
podobnÔm SV-40. 4,5
Je naÌím cie≈om pravidelne aktualizova¤ aplikáciu
Opti-MEM ® I pod≈a ÌpecifickÔch poÈiadaviek na bunky.
Budeme si váÈi¤, ak vÔskumní pracovníci pouÈívajúci
Opti-MEM ® I sa podelia o svoje skúsenosti s firmou
GIBCOTM ,aby sa získané informácie mohli predáva¤
vedeckej obci.
Suplementácia média s deficitom zloÈky
Pri pouÈívaní variantu Opti-MEM ® I s deficitom zloÈky budú
zhodné s pôvodnou formuláciou tieto suplementa´né
koncentrácie:
Katalógové . 11058 fenolsulfonftalein pri koncentrácii 0,00160 g/l
Kontrola kvality
Opti-MEM ® I bol testovanÔ z h≈adiska pH, osmolality,
endotoxínov, baktérií, plesní a mykplaziem. Koncentrácia
endotoxínu je menÌia ako 1,0 EU/ml.
KaÈdá ÌarÈa Opti-MEM ® I je hodnotená pomocou citlivÔch
kvantitatívnych analÔz z h≈adiska svojej schopnosti
podporova¤ ú´innos¤ klonovania bunkovej línie myÌieho
myelómu a rastu cez mnoho´etné subkultúry adherentnej
bunkovej línie.Testy ÌarÈí Opti-MEM ® I pri 2% (rast CHO) a
4% (klonovanie Sp2) suplementácii séra sú porovnané s
predtÔm schválenou kontrolou Opti-MEM ® I
Tekuté bune´né kultúry GIBCOTM sú pripravené za
aseptickÔch podmienok, pri ktorÔch je validovanÔ kaÈdÔ
krok, aby bolo zaistené, Èe vÌetky vÔrobky splÕujú
Ìtandardnú zaru´enú priemyslovou úroveÕ sterility 10-3 ; tj., Èe
vÔrobok má po´as vÔrobného procesu úroveÕ kontaminácie
nie vä´Ìiu neÈ 1 na 1000 jednotiek. NajvyÌÌia úroveÕ
zaistenia sterility (rovná alebo vyÌÌia neÈ 10-6 ) sa nedá
dosiahnu¤ bez kone´nej sterilizácie, ktorá je vÌak Ìkodlivá z
h≈adiska ú´innosti vÔrobkov bune´nÔch kultúr.
Uchovávanie
PretoÈe riadne balenie chemicky definovanÔch médií má
mimoriadny vÔznam, odporú´ame pouÈi¤ pôvodné obaly, aby
bolo zaistené uchovávanie po celÔ ´as.
Aby bola zaistená optimálna ú´innos¤,pred pouÈitím
uchovávajte Opti-MEM ® I pri teplote 2 - 8°C v tme.
Opti-MEM ® I je tieÈ dosta¤ v hospodárnej práÌkovej forme.
Pre podrobnosti odkazujeme na katalóg firmy GIBCOTM ,
poprípade sa obrá¤te na predajnÔch zástupcov firmy
Invitrogem.
Literatúra:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30.Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Pre ±alÌie informácie o technickej podpore tohto vÔrobku alebo inÔch
vÔrobkov GIBCO, sa obrá±te na oddelenie technickÔch sluÈieb –
e-mail eurotech@invitrogen.com, prípadne si preÌtudujte katalóg
vÔrobkov GIBCO, kde nájdete telefónne ´ísla zastúpenia vo
vaÌom regióne.
MôÈete sa tieÈ obráti¤ na VáÌho obchodného zástupcu firmy Invitrogen
alebo navÌtívte naÌu internetovú stránku www.invitrogen.com.
Ur´ené na diagnostické pouÈitie in vitro.
UPOZORNENIE: VÔrobok nie je ur´enÔ na terapeutické
pouÈitie u ≈udí alebo zvierat. Iné pouÈitie neÈ je
uvedené v schválenej príbalovej informácii môÈe
predstavova¤ poruÌenie miestnych zákonnÔch
predpisov.
*Len na vÔskumné ú´ely.
UPOZORNENIE: VÔrobok nie je ur´enÔ na terapeutické pouÈitie u
≈udí alebo zvierat.
35

PRECAUCIÓN: Los materiales de origen humano no son reactivos
(nivel donante) con los anticuerpos anti-VIH 1 y 2,
anti-VHC y con el antígeno de superficie del virus de
la hepatitis B (HBsAg). Manipule de acuerdo con las
prácticas establecidas de bioseguridad.
N.º de catálogo: 31985 100 ml Con L-glutamina
Medios deficientes en componentes:
500 ml Con L-glutamina
N.º de catálogo: *11058 500 ml sin rojo fenol
51985 500 ml con GlutaMAX‘ I
Condiciones de almacenamiento: De 2 a 8°C, en la oscuridad.
Vida útil:Vea la fecha de caducidad en la etiqueta del producto.
NOTA: Para el número de catálogo 11058, consulte también la
siguiente suplementación de medios deficientes en
componentes.
Opti-MEM ® I es un medio versátil, definido químicamente y
formulado para reducir de manera importante la cantidad de
suero necesaria para el cultivo in vitro de células de
mamífero.
Opti-MEM ® I es un medio para múltiples fines con utilidad
demostrada en la disminución de los requisitos de suero en
una amplia variedad de líneas celulares y aplicaciones. Se ha
mostrado efectivo en el crecimiento y mantenimiento de
líneas celulares adherentes y no adherentes. Cuando se
suplementa con suero bovino fetal al 2-4% o sueros
alternativos, Opti-MEM ® I proporciona tasas de
proliferación y densidades celulares máximas comparables, y
a veces superiores, con las de los medios convencionales
suplementados con suero bovino fetal al 10%. Las líneas
celulares relativamente poco exigentes pueden mantenerse
en cultivos a largo plazo con una reducción de suero incluso
más importante. Si se utilizan líneas celulares adherentes y
un suplemento de suero inferior al 2% o un sistema agitado
tal como frascos rotativos, el medio debe suplementarse
adicionalmente con CaCl2 100 mg/l.
La versatilidad de Opti-MEM ® I en la propagación de
diversos tipos celulares convierte este medio en la elección
óptima para muchos requisitos de cultivos celulares.
Los materiales sin procesar utilizados para producir
Opti-MEM ® I son analizados por rigurosos estándares de
calidad de GIBCOTM . Se analiza el rendimiento de todo el
medio para asegurar la uniformidad entre lotes requerida
para las aplicaciones de producción e investigación.
La vida útil de Opti-MEM ® I es comparable a la de fórmulas
convencionales con glutamina. Esta estabilidad permite que
los laboratorios almacenen inventarios de Opti-MEM ®
compatibles con las prácticas rutinarias de laboratorio.
Formulación
Opti-MEM ® I es una modificación del medio esencial
mínimo de Eagle, tamponado con HEPES y bicarbonato
sódico, y suplementado con hipoxantina, timidina, piruvato
sódico, L-glutamina o GlutaMAX, oligoelementos y
factores de crecimiento. El nivel de proteína es mínimo (15
mg/ml), siendo la insulina y la transferrina los únicos
suplementos proteicos. Se incluye rojo fenol a una
concentración reducida como indicador de pH. Opti-MEM ®
I puede suplementarse con 2-mercaptoetanol antes de su
uso. Por conveniencia, se ha reducido el nivel de CaCl2 a
36
Español
Medio reducido en suero Opti-MEM ® I modificación del MEM (de Eagle)
99,9 mg/l cuando se trabaja con hibridomas.
Instrucciones de uso
Conversión a Opti-MEM ® I
La conversión a Opti-MEM ® I es sencilla. En la mayoría de
las aplicaciones, no se necesitan procedimientos de retirada
para obtener una reducción del 50% en la suplementación
con suero cuando se convierte a Opti-MEM ® I. La
conversión puede realizarse centrifugando y decantando el
sobrenadante, volviéndolo a suspender en Opti-MEM ® I con
la suplementación reducida de suero. (Vea las tablas en la
sección “Aplicaciones” para la reducción típica en la
suplementación con suero). Puede realizarse una reducción
adicional de suero mediante una pequeña reducción gradual
. La suplementación óptima con suero para cada aplicación
específica debe determinarse basándose en las
características de rendimiento esperadas (estimulación del
crecimiento, producción de metabolitos secundarios, etc). El
uso extendido de Opti-MEM ® I en el mantenimiento de
líneas celulares ha demostrado que no hay ninguna pérdida
de viabilidad o disminución en la velocidad de crecimiento.
Mantenga Opti-MEM ® I alejado de la luz directa.
Uso de 2-mercaptoetanol
El 2-mercaptoetanol es un agente reductor que ha
demostrado estimular el crecimiento 1, la eficacia del cultivo
en placas de Petri 2 y la síntesis de anticuerpos 3 de líneas
celulares específicas. No se conoce todavía la cinética de
este fenómeno. La mayoría de las aplicaciones no requieren
la suplementación con 2-mercaptoetanol.
Puesto que Opti-MEM ® I actúa en una amplia gama de
aplicaciones con numerosos tipos celulares, es prudente
evaluar la utilización de la suplementación con 2mercaptoetanol
basándose en la aplicación específica.
El 2-mercaptoetanol se comercializa separadamente como
un concentrado 1000X (5.5x10 -2 M) en solución salina
tamponada con fosfato de Dulbecco sin calcio ni magnesio
21985, 50 ml. Puede añadirse a Opti-MEM ® I justo antes de
usar. Tras la adición de 2-mercaptoetanol, Opti-MEM ® I es
estable durante dos meses siempre que este período no
exceda la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de
Opti-MEM ® I o del 2-mercaptoetanol.
Si se desea, añada asépticamente 0,5 ml de 2-mercaptoetanol
(1000X) por cada 500 ml de Opti-MEM ® I. No pipetee con
la boca. Mezcle bien dando vueltas (no agite). Almacene las
porciones no utilizadas de 2-mercaptoetanol
herméticamente cerradas en su envase original. La
concentración final de 2-mercaptoetanol en Opti-MEM ® I
será de 5,5x10 -5 M.
Información sobre las aplicaciones
La mayoría de las células que se cultivan rutinariamente en
medio suplementado con suero pueden transferirse
directamente a Opti-MEM ® I con una reducción mínima de
suero del 50%.
Se ha logrado una reducción más importante de los
requisitos de suero con varios mielomas murinos (SP2/0-
Ag14, P3X63-Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) e hibridomas derivados.
También conseguimos una reducción importante en la
cantidad de suero necesaria para cultivar fibroblastos y

células epiteliales de origen tumoral y normal. Si se utilizan
líneas celulares adherentes y un suplemento de suero inferior
al 2% o un sistema agitado tal como frascos rotativos, el
medio debe suplementarse más con CaCl2 100mg/l.
Las investigaciones de GIBCOTM han establecido que puede
reducirse la suplementación con suero bovino fetal (FBS)
cuando se utiliza Opti-MEM ® I, hasta los niveles indicados a
continuación para las siguientes líneas celulares, al mismo
tiempo que se mantiene una tasa de crecimiento comparable
a la del medio basal con niveles más altos de suplementación
con suero.
Tipos celulares % de FBS en Opti-MEM ® I
Tecnología del hibridoma: ratón y humano
Fusión 4
Clonación 2 - 4
Crecimiento y producción de Ab: mielomas e hibridomas establecidos 0.5 - 2
Líneas celulares de fibroblastos diploides 2 - 4
Fibroblastos primarios 2 - 4
Líneas celulares embrionarias de hámster y rata 2
Líneas celulares linfoblastoides 0.5 - 2
Células renales de mono 4
Células renales embrionarias bovinas y humanas 2 - 4
La suplementación de Opti-MEM ® I con sueros alternativo
de mamífero también ha demostrado resultados
impresionantes. Opti-MEM ® I suplementado con suero
alternativo al 4% ha obtenido un rendimiento comparable, y
en algunos casos superior, a los medios basales
suplementados con FBS al 10% en las siguientes aplicaciones:
Aplicación Línea celular Suero alternativo al 4%
Estimulación del crecimiento Sp2/0-Ag14 (Sp2) Ternera, caballo
AE-1 (hibridoma derivado de Sp2) Ternera, caballo
CHO Caballo
BHK-21 Ternera, caballo
Clonación Sp2 Ternera, ternera recién nacida, caballo
P3x63-Ag8.653 (653) Ternera, ternera recién nacida, caballo
Ternera, caballo
Cultivo en placas de Petri 653 Ternera, caballo
BHK-21 Ternera, caballo
CHO Ternera, ternera recién nacida
Producción de MAb AE-1 Ternera, ternera recién nacida, caballo
En estudios limitados, la electroporación de Opti-MEM ® I
ha producido niveles más altos de expresión génica transitoria
y viabilidad celular que el medio de electroporación típico.
Se ha comunicado que Opti-MEM ® I con 2-mercaptoetanol
mejora la eficacia de transfección en células CV-1 y COS
transfectadas con un vector parecido al SV-40 de mono. 4,5
Tenemos la intención de actualizar periódicamente los
requisitos celulares específicos de las aplicaciones de
Opti-MEM ® I.Apreciaríamos que los investigadores que
utilicen Opti-MEM ® I compartan sus experiencias con
GIBCOTM , de forma que la información obtenida pueda
compartirse con la comunidad científica.
Suplementación de medios deficientes en componentes:
Cuando se utiliza una variación de Opti-MEM ® I deficiente
en componentes, la siguiente concentración de
suplementación será coherente con la formulación original:
N.º de catálogo: 11058 rojo fenol a 0,00160 gm/l
Control de calidad
Opti-MEM ® I está sujeto a análisis de pH, osmolalidad,
endotoxinas, bacterias, hongos y micoplasma. El nivel de
endotoxina es inferior a 1,0 UE/ml.
En cada lote de Opti-MEM ® I, se evalúa la capacidad para
soportar la eficacia de clonación de una línea celular de
mieloma murino y el crecimiento sobre múltiples subcultivos
de una línea de células adherentes utilizando ensayos
cuantitativos sensibles. Los análisis de lotes de Opti-MEM ® I
suplementados con suero al 2% (crecimiento CHO) y al 4%
(clonación de Sp2) se comparan con un control de
Opti-MEM ® I previamente aprobado.
Los productos líquidos de cultivo celular GIBCOTM se
preparan mediante un proceso aséptico donde cada etapa se
valida para garantizar que todos los productos cumplen el
nivel de garantía de calidad estándar de la industria de 10-3 ;
es decir, producto que demuestra un nivel de contaminación
no superior a 1 de 1000 unidades durante el proceso de
fabricación. El nivel más alto de garantía de calidad (igual o
superior a 10-6 ) no puede obtenerse sin la esterilización
terminal que es perjudicial para el rendimiento de los
productos del cultivo celular.
Almacenamiento
Puesto que un correcto envasado de un medio definido
químicamente es muy importante, recomendamos el uso de
los envases originales para su almacenamiento por períodos
prolongados de tiempo.
Para obtener un rendimiento óptimo, Opti-MEM ® I debe
almacenarse a 2-8°C en la oscuridad antes de usarse.
Opti-MEM ® I también se comercializa en una forma
económica en polvo. Consulte el catálogo de GIBCOTM o
póngase en contracto con su representante de ventas de
Invitrogen para obtener más detalles.
Bibliografía:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals.Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
Para obtener información o apoyo técnico sobre éste u otros
productos GIBCO, póngase en contacto con el servicio técnico en
eurotech@invitrogen.com, o consulte el catálogo de productos
GIBCO conseguir los números de teléfono locales en su región.
También puede ponerse en contacto con su representante de ventas
de Invitrogen o con nuestro sitio web en www.invitrogen.com.
Para uso diagnóstico in vitro.
PRECAUCIÓN: No indicado para uso terapéutico en humanos o
animales. Un uso diferente al uso indicado en la
etiqueta puede suponer una violación de las leyes
locales.
*Para uso exclusivo en investigación.
PRECAUCIÓN: No está indicado para uso terapéutico o diagnóstico
en humanos o animales.
37

VARNING: Material med humant ursprung är icke reaktivt
(donatornivå) med anti-HIV 1 & 2, anti HCV och HB-Ag.
Hanteras i enlighet med etablerade rutiner för
biosäkerhet.
Kat. Nr.: 31985 100 ml med L-glutamin
100 ml med L-glutamin
Komponentavsaknande media:
Kat. Nr.: *11058 100 ml utan Fenolröd
51985 100 ml med GlutaMAX‘ I
Förvaring: 2 till 8°C i mörker.
Lagringstid: Se produktens etikett för utgångsdatum.
OBS! För katalognummer 11058, se även komponentavsaknande
medium tillsättning, nedan.
Opti-MEM ® I är ett kemiskt definierat medium med flera
användningsområden, utformad för att avsevärt minska
mängden serum som krävs för att odla däggdjursceller
in vitro.
Opti-MEM ® I är ett medium med flera användningsområden
som har visat sig vara användbart för att minska mängden
serum som behövs för ett stort antal cellinjer och
tillämpningar. Det har visat sig vara effektivt vid tillväxt och
upprätthållande både av fastsittande och icke-fastsittande
cellinjer. Vid tillförsel av 2-4 % fetalt bovint serum eller
alternativa sera förbättrar Opti-MEM ® I
proliferationshastighet och maximala celldensiteter som kan
jämföras med och i vissa fall till och med är bättre än
konventionella media med tillförsel av 10% fetalt bovint
serum. Relativt icke-nogräknande cellinjer kan upprätthållas
i långvariga kultur med ännu större minskning av serum.
Om fastsittande cellinjer används och mindre än 2 % serum
tillsätts eller vid användning i ett rörligt system som rullande
flaskor, måste mediet spädas ytterligare med 100 mg/L CaCl2. Användbarheten av Opti-MEM ® I vid odling av olika
celltyper gör detta medium till det bästa valet för många
cellodlingsbeov.
Materialet som används för att tillverka Opti-MEM ® I
undersöks med GIBCO:sTM rigorösa kvalitetskontroll.
Prestandatester utförs på hela mediet för att försäkra att
varje sats har samma egenskaper som krävs för forskning
och produktion.
Hållbarheten för Opti-MEM ® I är jämförbart med
konventionella glutamininnehållande sammansättningar.
Denna stabilitet gör att laboratorier kan förvara och
upprätthålla inventarier av Opti-MEM ® I som är jämförbara
med rutinmässiga laboratorietillämpningar.
Sammansättning
Opti-MEM ® I är en modifiering av Eagle:s Minimal Essential
Medium, buffrat med HEPES och natriumbikarbonat, med
tillförsel av hypoxantin, tymidin, natriumpyruvat, L-glutamin
eller GlutaMAX, spårelement och tillväxtfaktorer.
Proteinnivån är minimal (15 µg/mL), med insulin och
transferrin som enda proteintillsatser. Fenolröd har tillsatts i
mindre koncentration för användning som pH-indikator.
38
Svenska
Opti-MEM ® I Reducerat serummedium Modifiering av MEM (Eagle:s)
Opti-MEM ® I kan tillföras 2-merkaptoetanol före
användning. CaCl2-nivån sjunker till 99,9 mg/L för att
förenkla arbete med hybridom.
Bruksanvisning
Konvertering till Opti-MEM ® I
Det är enkelt att konvertera till Opti-MEM ® I. För de flesta
tillämpningar krävs inga avvänjningsprocedurer för att uppnå
en 50 % minskning i serumtillsättning vid konvertering till
Opti-MEM ® I. Konverteringen kan göras genom att helt
enkelt centrifugera cellerna, avtappa supernatanten och
resuspendera cellerna i Opti-MEM ® I med minskad
serumtillsättning. (Se tabellerna i avsnittet Tillämpningar för
normal minskning av serumtillsats).Ytterligare
serumminskning kan uppnås med minimal avvänjning. Den
optimala serumtillsatsen för varje specifik tillämpning bör
fastställas baserat på förväntade resultatkarakteristika
(tillväxtfrämjande, sekundär metabolitproduktion, o.s.v.).
Långvarig användning av Opti-MEM ® I för upprätthållande av
cellinjer har inte visat någon förlust av livsduglighet eller
tillväxt. Håll Opti-MEM ® I borta från direkt ljus.
Användning av 2-Mercaptoethanol
2-merkaptoetanol är ett reduceringsagens som har visats
förbättra tillväxt1 , täckningseffektivitet2 och/eller
antikroppssyntes3 för specifika cellinjer. Hur detta fenomen
fungerar i praktiken är inte helt känt. De flesta tillämpningar
kräver ej tillförsel av 2-merkaptoetanol.
Eftersom Opti-MEM ® I används för ett stort antal
tillämpningar med flera olika celltyper är det lämpligt att
utvärdera hur användbart tillsättning av 2-merkaptoetanol är
beroende på den aktuella tillämpningen.
2-merkaptoetanol finns tillgängligt separat som 1000X
koncentrat (5,5x10-2 M) i Dulbecco:s Phosphate Buffered
Saline (fosfatbuffrad koksaltlösning) utan kalk och magnesium
21985, 50 mL. Det kan tillsättas till Opti-MEM ® I precis före
användning. Opti-MEM ® I håller sig stabilt i 2 månader efter
tillsättning av 2-merkaptoetanol, om denna period inte
överskrider utgångsdatumet på etiketterna för Opti-MEM ® I
eller 2-merkaptoetanol.
Vid behov kan 0,5 mL 2-merkaptoetanol (1000X) per 500
ml Opti-MEM ® I tillsättas aseptiskt. Pipettera inte med
munnen. Blanda ordentligt genom att snurra behållaren
(skaka inte). Förvara oanvända doser av 2-merkaptoetanol i
originalbehållaren med locket hårt åtskruvat. Den slutliga
koncentrationen av 2-merkaptoetanol i Opti-MEM ® I är
cirka 5,5x10-5M. Information om tillämpning
De flesta celler som rutinmässigt odlas i ett medium med
serumtillsats kan överföras direkt till Opti-MEM ® I med
minst 50% serumminskning.
Ytterligare avsevärd minskning av serumbehovet har
uppnåtts med olika murina myelom (SP2/0-Ag14, P3X63-
Ag8.653, P3-NS1-Ag4-1) och deriverade hybridom.

Vi har även uppnått en avsevärd minskning av mängden
serum som krävs för att odla fibroblaster och epitelceller
med normalt ursprung och tumörursprung. Om fastsittande
cellinjer används och mindre än 2 % serum tillsätts eller vid
användning i ett rörligt system som rullande flaskor, måste
mediet spädas ytterligare med 100 mg/L CaCl2.
GIBCO:sTM forskning har visat att tillsättning av fetalt bovint
serum (FBS) kan minskas med användning av Opti-MEM ® I,
till nivåerna som anges nedan för följande cellinjer, samtidigt
som en tillväxt som kan jämföras med basalmedia med
större serumtillsatser upprätthålls.
Celltyper % FBS i Opti-MEM ® Hybridomteknologi – Mus och Human
I
Fusion 4
Kloning 2 - 4
Tillväxt och antikroppsproduktion – Myelom och etablerade hybridom 0.5 - 2
Diploida fibroblastcellinjer 2 - 4
Primära fibroblaster 2 - 4
Cellinjer från rått- och hamsterfoster 2
Lymfoblastoida cellinjer 0.5 - 2
Apnjurceller 4
Celler från human och bovin fosternjure 2 - 4
Tillsättning av Opti-MEM ® I med alternativ däggdjurssera
har också visat imponerande resultat. Opti-MEM ® I med
tillsats av 4 % alternativ sera har presterat resultat som är
jämförbara med och i vissa fall bättre än basalmedia med
tillsats av 10 % FBS för följande tillämpningar:
Tillämpning Cellinje Serumalternativ vid 4 %
Tillväxtfrämjande Sp2/0-Ag14 (Sp2) Kalv, häst
AE-1 (Sp2-deriverad hybridom) Kalv, häst
CHO Häst
BHK-21 Kalv, häst
Kloning Sp2 Kalv, nyfödd kalv, häst
P3x63-Ag8.653 (653) Kalv, nyfödd kalv, häst
Kalv, häst
Täckning 653 Kalv, häst
BHK-21 Kalv, häst
CHO Kalv, nyfödd kalv
Antikroppsproduktion AE-1 Kalv, nyfödd kalv, häst
I begränsade studier har elektroporation i Opti-MEM ® I
givit högre nivåer av övergående genuttryck och livsduglighet
hos celler än typiskt elektroporerat medium. Opti-MEM ® I,
med 2-merkaptoetanol har rapporterats förbättra
transfektionseffektiviteten hos CV-1- och COS 1-celler som
transfekterats med en ap-SV-40-liknande promotionsvektor. 4,5
Det är vår avsikt att regelbundet uppdatera tillämpningar av
Opti-MEM ® I för specifika cellbehov. Vi skulle uppskatta om
forskare som använder Opti-MEM ® I delar med sig av sina
erfarenheter till GIBCOTM , så att denna information kan
spridas inom den vetenskapliga världen.
Komponentavsaknande medium tillsättning:
Vid användning av en komponentavsaknande variation av
Opti-MEM ® I, stämmer följande tillsatskoncentration
överens med originalsammansättningen:
Kat. Nr. 11058 fenolröd vid 0,00160 gm/L
Kvalitetskontroll
Opti-MEM ® I utsätts för följande tester: pH, osmolalitet,
endotoxin, bakterial, svamp, och mykoplasma.
Endotoxinhalten är mindre än 1,0 EU/mL.
Varje sats Opti-MEM ® I utvärderas med känsliga kvantitativa
analyser för att avgöra kloningseffektiviteten av en murin
myelomcellinje och tillväxt över flera subkulturer i en
fastsittande cellinje.Testsatser av OPTI -MEM I med tillsats
av 2 % (CHO-tillväxt) och 4% (Sp2-kloning) serum jämförs
med tidigare godkänd OPTI -MEM I-kontroll.
GIBCOTM vätskeprodukter med cellkultur framställs genom
en aseptisk process där varje steg har kontrollerats för att
garantera att alla produkter uppfyller industristandarden för
sterilitetsgaranti på en nivå om 10-3 ; d.v.s. en produkt som
visar en kontaminationsnivå om mindre än 1 av 1000
enheter under tillverkningsprocessen. Den högsta nivån av
sterilitetsgaranti (lika med eller större än 10-6 ) kan inte
uppnås utan terminal sterilisering, vilket skadar
cellkulturprodukternas prestanda.
Förvaring
Lämplig förpackning av kemiskt definierade media är av
yttersta vikt. Därför rekommenderar vi att originalbehållarna
används för långvarig förvaring.
För bästa resultat bör Opti-MEM ® I förvaras vid 2 till 8°C i
mörker före användning.
Opti-MEM ® I finns också som pulver. Se GIBCOTM- katalogen eller kontakta din lokala Invitrogen-representant
för information.
Referenser:
1 Jayme, David W. and Blackman, Kenneth E., Cell Culture Media for Propagation of
Mammalian Cells,Viruses and Other Biologicals. Advances in Biotechnological
Processes. vol 5, pp. 1-30. Alan R. Liss, Inc. New York (1985).
2 Kawamoto, Sato, J.D., Le,A. McClure, D., Sato, G. Development of a Serum- Free
Medium for Growth of NS-1 Mouse Myeloma Cells and Its Application to the
Isolation of NS-1 Hybridomas.Analytical Biochemistry. 130, 445-453 (1983).
3 Mishell, B.B. and Mishell R.I., Primary Immunization in Suspension Cultures. Selected
Methods in Cellular Immunology. Freeman (1980).
4 Saffer, J.D. and Hughes, D.L. Nuclear Acids Research. 14, 3604 (1986).
5 Livelli,T. personal communication (1987).
För ytterligare information eller teknisk support på denna eller andra
GIBCOTM produkter, kontakta Teknisk Service vid
eurotech@invitogen.com eller se GIBCO:sTM produktkatalog för
lokala telefonnummer i regionen.
Det är även möjligt att kontakta Invitrogen försäljningsrepresentanter
eller använda vår Websida på www.invitrogen.com.
För diagnostisk användning in vitro.
VARNING: Ej för behandling avav människa eller djur.Annan
användning än den som anges på etiketten kan bryta
mot lokala lagar.
*Endast avsedd för forskning.
VARNING: Ej avsedd för diagnos eller behandling av människor
eller djur.
39

OptiL-IFU
To order
AUSTRIA
Invitrogen GmbH
Gebührenfreie Bestellungen:
Tel: 0800 20 10 87
Fax: 0800 21 63 17
BELGIUM
N.V. Invitrogen S.A.
Free Phone Orders: 0800 14894
Tel: 09 272 55 99
Fax: 09 272 55 98
DENMARK
Invitrogen A/S
Frikaldsnr. ordre: 80 30 17 40
Tel: 43 99 43 44
Fax: 43 99 43 45
FRANCE
Invitrogen SARL
Téléphone vert commandes:
0800 23 20 79
Fax vert commandes:
0800 13 58 13
Tél: 01 34 32 31 00
Fax: 01 30 37 50 07
www.invitrogen.com
GERMANY
Invitrogen GmbH
Gebührenfreie Bestellungen:
Tel: 0800 083 09 02
Fax: 0800 083 34 35
ITALY
Invitrogen S.R.L
Free Fax Orders: 800 302 505
Tel: 02 98 22 201
Fax: 02 98 24 15 17
THE NETHERLANDS
Invitrogen
Gratis Telefoon (Orders):
0800 099 3310
Gratis Fax (Orders):
0800 023 4212
NORWAY
Invitrogen AS
Free Phone: 00800 5345 5345
Tel: 22 83 16 00
Free Fax: 00800 7890 7890
SPAIN/PORTUGAL
Invitrogen S.A
Pedidos Tel. (Gratuito):
900 181 461
Pedidos Fax. (Gratuito):
900 181 460
Tel: 93 479 69 50
Fax: 93 374 15 70
© 2003 Invitrogen Corporation
SWEDEN
Invitrogen AB
Ordertelefon: 020 26 34 52
Tel: 08 630 73 20
Fax: 08 732 44 93
SWITZERLAND
Invitrogen AG
Free Phone Orders:
0800 84 88 00
Free Fax Orders:
0800 87 68 00
UNITED KINGDOM
Invitrogen Ltd
Free Phone Orders:
0800 269 210
Free Fax Orders:
0800 243 485
Tel: 0141 814 6100
Fax: 0141 814 6260
Email: eurotech@invitrogen.com