281 POTENSI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS ...

Oseanologi dan Limnologi di Indonesia (2010) 36(3): 281-292 ISSN 0125-9830
POTENSI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS ASAL
BARRANG LOMPO (MAKASSAR) SEBAGAI SUMBER BAHAN
ANTIBAKTERI
oleh
TUTIK MURNIASIH dan ABDULLAH RASYID
Pusat Penelitian Oseanografi – LIPI
Received 05 May 2010, Accepted 19 October 2010
ABSTRAK
Pengembangan obat dari senyawa yang dihasilkan oleh spons mengalami
beberapa masalah, maka bakteri laut yang bersimbiosis dengan spons menjadi
sumber substansi aktif yang menjanjikan. Lebih mudah dalam perkembangbiakan
telah menjadikan bakteri laut lebih unggul dibanding sumber biota tingkat tinggi.
Tujuan kegiatan ini adalah mengisolasi bakteri yang berasosiasi dengan spons
sebagai sumber substansi aktif. Sampling bakteri yang bersimbiosis dengan spons
dilakukan di perairan Pulau Barrang Lompo Makassar, pada bulan Juni 2009.
Skrining antibakteri terhadap ekstrak bakteri hasil isolasi dilakukan dengan metode
difusi agar. Studi awal tentang skrining antibakteri terhadap beberapa ekstrak bakteri
yang diisolasi dari spons Theonella sp., Aaptos sp., Melophlus sarassinorum,
Callyspongia sp., Ircinia sp., Stylissa flabeliformes, Lisoclinum sp. dan Clathria sp.
asal Barrang Lompo Makassar menunjukkan bahwa dari 75 isolat, terdapat 60 isolat
bakteri yang berpotensi mengandung substansi aktif anti bakteri patogen
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis dan Vibrio eltor. Persentase jumlah koloni
tertinggi (100%) bakteri penghambat bakteri patogen diperoleh dari spons Aaptos
sp., Melophlus sarassinorum dan Callyspongia sp., selanjutnya sebesar 90% dari
spons Clathria sp.
Kata kunci : antibakteri, bakteri simbion, spons.
281

MURNIASIH & RASYID
ABSTRACT
THE POTENTIAL SPONGE-ASSOCIATE BACTERIA FROM BARRANG
LOMPO AS SOURCE OF ANTIBACTERIAL AGENT. Since the development of
drug derived from sponge metabolite faced many problems, sponges-associate
bacterial became a promising source of biologically actives substances. The less
difficulties in enhancing the bacterial cultivation than the higher organisms are an
excellent advantage in developing drug from microorganisms. This research was
conducted to elucidate the potential of Indonesian sponge-associate bacteria as
source of antibacterial agent. Sponge-associated bacteria was collected from
Barrang Lompo Makassar coastal in June 2009. Screening of antibacterial activity
of extract bacterial was done using agar diffusion method. The preliminary study on
antibacterial activity derived from extract of bacteria that associate with Theonella
sp., Aaptos sp., Melophlus sarassinorum, Callyspongia sp., Ircinia sp., Stylissa
flabeliformes, Lisoclinum sp. and Clathria sp. showed that from 75 isolated
bacteria, there were 60 potential bacterial isolates inhibiting Staphylococcus
aureus, Bacillus subtilis and Vibrio eltor. The highest percentages of potential
isolated bacteria (100%) were associate with sponges Aaptos sp., Melophlus
sarassinorum, Callyspongia sp. and 90% was sponge Clathria sp.
Key words: antibacterial, associate bacteria, sponge.
PENDAHULUAN
Spons adalah hewan berpori yang bersifat filter feeder sehingga menjadi
habitat bagi mikroorganisme untuk bersarang di dalam tubuhnya. Mikroorganisme
mempunyai dua peran yang penting dalam sistem biologi spons, yaitu sebagai
sumber makanan dan hidup bersimbiosis baik secara inter maupun intra selular
(VACELET & DONADEY 1977; FRIEDERICH et al. 1999). Beberapa senyawa
aktif yang diisolasi dalam spons juga ditemukan dalam bakteri yang bersimbiosis
dengannya, oleh sebab itu beberapa peneliti berpendapat bahwa bakteri terlibat
sebagian maupun keseluruhan dalam biosintesa senyawa aktif tertentu dalam spons
(BEWLEY et al. 1996; FLOWERS et al. 1998). Untuk membuktikan hipotesa
tersebut, maka beberapa peneliti bahan alam laut melakukan penelitian tentang
pencarian substansi bioaktif dari mikroba yang bersimbiosis dengan spons. Beberapa
senyawa baru yang mempunyai aktivitas farmakologi telah ditemukan
(JAYATILAKE et al. 1996; MITOVA et al. 2003; SUZUMURA et al. 2003). Salah
satu senyawa antimikroba norharman telah diisolasi dari bakteri Pseudoalteromonas
piscicida yang berasosiasi dengan spons Hymeniacida perleve (ZHENG et al. 2005).
Senyawa tersebut sebelumnya telah diisolasi dari spons asal Indonesia (RAO et al.
2003).
282

POTENSI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS
Komunitas bakteri yang berasosiasi dengan spons sebagian besar adalah
proteobacteria, bacteroidetes, firmicutes dan actinomycetes (TAYLOR et al. 2007).
Mikroba yang potensial sebagai target penghasil senyawa aktif adalah
cyanobacteria, jamur dan actinomycetes. Senyawa aktif yang dihasilkan oleh
Actinomycetes micromonospora dari spons adalah senyawa antimalaria manzamine
(ANG et al. 2000). Senyawa peptida antibakteri telah diisolasi dari spons Hyatella
sp. dan bakteri simbion Vibrio sp. (OCLARIT et al. 1994). Beberapa senyawa
antibakteri jenis quinolone juga diisolasi dari bakteri simbion spon Homoplysia sp.
yaitu bakteri Pseudomonad (BULTEL et al. 1999). Adanya hubungan antara
produksi antibakteri oleh mikroba simbion dengan spons telah diteliti oleh
NARSINHA & ANIL 2000, yang melaporkan bahwa senyawa antibakteri yang
dihasilkan oleh bakteri simbion spons (ά proteobacterium MBIC 3368, Idiomarina
sp dan Pseudomonas sp.) sangat dipengaruhi oleh like-protein rekombinan yang
terdapat pada biota inang Suberitas domuncula. Penelitian tersebut memperkuat
adanya hubungan kerjasama dalam biosintesa metabolit sekunder antara mikroba
simbion dengan spons.
Indonesia yang mempunyai megadiversitas jenis spons, sangat potensial
bersimbiosis dengan mikroorganisme penghasil senyawa aktif. Melihat potensi
tersebut, maka kelompok peneliti produk alam laut mulai melakukan penelitian
substansi bioaktif dari mikroba yang bersimbiosis dengan spons. Sebelumnya (th
1997-2007) telah dilakukan penelitian substansi aktif dari spons Indonesia
(RACHMANIAR et al. 1997; RACHMANIAR et al. 1998; RACHMANIAR et al.
2001; RACHMANIAR et al. 2004, RACHMANIAR et al. 2005; RACHMANIAR
et al. 2006; RACHMANIAR et al. 2007). Berdasarkan data tersebut didapatkan
jenis-jenis spons potensial penghasil senyawa aktif. Spons potensial tersebut akan
dipilih sebagai biota inang dalam penelitian ini. Tujuan utama dalam penelitian ini
adalah mengetahui bakteri yang berasosiasi dengan spons sebagai sumber substansi
aktif antibakteri yang mudah dikulturkan.
BAHAN DAN METODE
Bahan
Bahan kimia yang digunakan untuk isolasi bakteri dalam spons diantaranya
adalah media marine-agar yang mengandung pepton (5 g), ekstrak khamir (1 g), agar
(15 g) dan air laut. Media selektif enrichment digunakan antibiotik ampisilin
produksi Phyto Technology Laboratory sebanyak 10 μg/5 mL larutan media, 20%
media marine broth. Media fermentasi digunakan 100% media marine broth
(ADACHI, pers com). Media untuk pengujian antibakteri digunakan nutrien agar
yang mengandung ”peptic digest” 5 g, natrium klorida 5 g, ekstrak daging sapi 1,5 g
dan ekstrak kapang 1,5 g. Untuk penyimpanan digunakan gliserol 87%, sedangkan
bakteri bioindikator uji antibakteri digunakan Staphylococcus aureus, Bacillus
subtilis dan Vibrio eltor yang didapatkan dari Laboratorium Mikrobiologi
Universitas Indonesia.
283

MURNIASIH & RASYID
Pelarut organik yang digunakan antara lain etil asetat GR, aseton GR dan
metanol GR. Peralatan yang digunakan adalah laminar air flow, sentrifuge,
evaporator, rotary shaker dan inkubator.
Pengambilan sampel spons
Pengambilan sampel bakteri yang bersimbiosis dengan spons potensial
dilakukan di perairan Pulau Barrang Lompo, Makassar pada kedalaman 2-10 m
dengan teknik scuba diving pada bulan Juni 2009. Sesudah diangkat dari permukaan
laut, segera dilakukan pemotretan dan diambil sebagian jaringan sponsnya,
kemudian dimasukkan ke dalam medium 5% marine broth untuk diisolasi
bakterinya (cara direct plating), dan sebagian lagi dimasukkan ke dalam media yang
mengandung antibiotik ampicilin untuk isolasi bakteri cara enrichment.
Identifikasi spons dilakukan dengan mencatat ciri-ciri khusus (warna,
tekstur, bentuk, ukuran dan kedalaman saat pengambilan. Kemudian sistematika dan
identifikasi spons mengikuti buku panduan karya HOOPER (1997), selain itu juga
menggunakan pustaka karya MAPSTONE (1990).
Isolasi bakteri simbion
Metode yang digunakan untuk isolasi bakteri yang bersimbiosis dengan
spons potensial adalah metode ”direct plating” dan metode ”enrichment”
(HIROSHE pers com). Tahapan isolasinya adalah sebagai berikut : Spons potensial
dengan kode (Sp.1, Sp.2, Sp.3 ,Sp.4, Sp.5, Sp.6, Sp.7 dan Sp.8) masing-masing
dimasukkan dalam media 5% marine broth dalam air laut steril dan dilakukan
pengadukan menggunakan stirer, kemudian dilakukan pengenceran 10 1 , 10 2 , 10 3 dan
10 4 . Masing-masing hasil pengenceran diambil 100 μL diteteskan dalam 10% media
marine agar kemudian disebar, lalu diinkubasi pada suhu 30 O C menggunakan
inkubator. Isolasi ini dilakukan langsung saat pengambilan sampel spons di
lapangan.
Untuk metode pengkayaan (enrichment), sebagian spons dimasukkan dalam
10 mL media 5% marine broth yang ditambahkan antibiotik ampicillin sebanyak 10
μg untuk menekan pertumbuhan mikroflora yang tidak diinginkan. Kultur diinkubasi
pada suhu kamar selama dua minggu menggunakan shaker inkubator di
laboratorium.
Pemurnian bakteri simbion
Dari metode ”direct plating” yang dilakukan saat di lapangan, diamati
koloni-koloni yang tumbuh sesudah inkubasi selama satu hingga dua minggu.
Banyaknya koloni dihitung, kemudian koloni-koloni yang bentuk dan warnanya
berbeda diisolasi. Masing-masing koloni dilakukan purifikasi, yaitu dengan cara
menggoreskan 1 ose koloni arah zig-zag pada petri yang berisi media 100% marineagar
kemudian diinkubasi pada suhu 30 o C selama 1-2 hari. Sesudah tumbuh kolonikoloni
baru dilakukan penggoresan ulang pada media 100% marine agar hingga
didapatkan koloni tunggal.
284

POTENSI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS
Untuk metode pengkayaan, penyebaran cairan kultur ke media 100% marine
agar dilakukan sesudah dua minggu inkubasi, selanjutnya seperti metode direct
plating, kultur diinkubasi pada suhu 30 o C selama satu minggu dan jumlah koloni
dihitung, diisolasi dan dipurifikasi. Penyimpanan hasil purifikasi dilakukan
menggunakan 25% gliserol dalam media marine agar (HIROSHE pers. com.).
Kultur bakteri
Semua isolat murni dikultur dalam 5 mL media marine broth (100%),
kemudian diinkubasi selama 5 hari sambil dikocok dengan stirer (100 rpm). Larutan
kultur disentrifuse pada suhu 4 O C selama 15 menit (6.000 rpm). Kemudian
dipisahkan antara pellet dan supernatannya.
Ekstraksi metabolit sekunder
Setelah disentrifuse proses dilanjutkan dengan ekstraksi terhadap supernatan
dan pellet. Supernatan diekstraksi menggunakan pelarut 5mL etil asetat, kemudian
dievaporasi untuk menghilangkan fase organiknya. Ekstrak kering dilarutkan dalam
1 mL metanol. Bagian pellet diekstrak dengan aseton sebanyak 5 mL kemudian
disentrifuse pada suhu 4 O C selama 15 menit (6.000 rpm). Bagian supernatan
diuapkan etil asetatnya, selanjutnya endapan dilarutkan dengan 1 mL metanol
(ADACHI, pers com).
Skrining aktivitas antimikroba
Kegiatan skrining aktivitas antimikroba dilakukan terhadap ekstrak
supernatan dan pellet dengan bioindikator bakteri patogen, yaitu Staphylococcus
aureus, Bacillus substilis dan Vibrio eltor. Ketiga jenis bakteri tersebut diperoleh
dari Departemen Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia Jakarta.
Metode penapisan yang digunakan adalah metode difusi agar (BAUER et al. 1996).
Sebanyak 15 μL sampel diteteskan di atas kertas cakram 6 mm, diuapkan dalam
”clean bench,” sesudah kering diletakkan di atas permukaan media nutrien agar yang
sebelumnya sudah diinokulasi bakteri bioindikator. Sebagai kontrol positip
digunakan antibiotik ampicillin konsentarasi 10 μg. Inkubasi dilakukan pada suhu
30 o C selama satu malam. Aktivitas antibakteri ditunjukkan dengan adanya zona
bening di sekitar kertas cakram dan dibandingkan dengan aktivitas antibiotik
ampicillin.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel spons yang digunakan sebagai biota inang terdiri dari 8 spesimen
dari jenis Theonella sp., Aaptos sp., Melophlus sarassinorum, Callyspongia sp.,
Ircinia sp., Stylissa flabeliformes, Lisoclinum sp., Clathria sp. Tabel 1 merupakan
hasil pengukuran jumlah koloni bakteri yang tumbuh dalam CFU (Colony Forming
Unit ).
285

MURNIASIH & RASYID
Tabel 1. Jumlah total koloni bakteri simbion.
Table 1. Total number of symbiotic bacterial colony.
No Sponge
Code
Latin Name
Simbiont colony numbers
(CFU/mL)
Direct plating Enrichment
1 Sp.1 Theonella sp. 1.16 10 5 5. 10 4
2 Sp.2 Aaptos sp. 2.4 10 5 fungi contaminant
3 Sp.3 Melophlus sarassinorum > 1.10 7 5.6. 10 6
4 Sp.4 Callyspongia sp. > 1.10 7 1.82 10 4
5 Sp.5 Ircinia sp. 7.2. 10 4 6.82. 10 4
6 Sp.6 Stylissa flabeliformes 2.8. 10 5 2.5. 10 6
7 Sp.7 Lisoclinum sp. > 1.10 7 1.355. 10 6
8 Sp.8 Clathria sp. > 1.10 7 1.3. 10 3
Berdasarkan Tabel 1 di atas dapat ditunjukkan bahwa di antara delapan jenis
spons, jumlah terbanyak bakteri simbion terdapat dalam spons sp.3 (Melophlus
sarassinorum ). Bakteri yang diisolasi dengan “direct plating” rata-rata mempunyai
jumlah koloni yang relatif lebih tinggi bahkan beberapa sampel mencapai lebih
besar dari 10 5 dibanding dengan metode pengkayaan (enrichment). Hal tersebut
disebabkan pada metode direct plating, cairan kultur dari spons langsung ditanam
pada media marine broth yang merupakan media umum bagi bakteri laut. Sedangkan
pada metode enrichment, larutan kultur ditambahkan antibiotik ampicilin sehingga
beberapa mikroba patogen terhambat pertumbuhannya oleh antibiotik ini. Gambar 1
adalah profil koloni bakteri hasil sebaran dengan metode “enrichment”. Bakteri yang
sudah diisolasi selanjutnya disimpan dalam gliserol stok untuk menghindari
terjadinya perubahan aktivitas antibakterinya.
a
b
Gambar 1. Penyebaran koloni bakteri simbion spons Sp.5 (a) dan Sp.6 (b) pada
media marine agar.
Figure 1. The spreading of bacteria colony associate with sponge Sp.5 (a) and
Sp.6 (b) on marine agar medium.
286

POTENSI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS
Seperti halnya penelitian yang dilakukan oleh SILBERHORN et al. (2007),
isolasi dilakukan berdasarkan perbedaan morfologi, masing-masing koloni dengan
morfologi yang sama diambil 2 hingga 3 buah untuk dilakukan purifikasi dan uji
antibakteri. Pada penelitian tersebut, SILBERHORN et al. (2007) berhasil
mengisolasi bakteri simbion pada spons Axinella polypoides dengan jumlah bakteri
(cfu/g) pada spons adalah 1,5x10 5 , 2,4x10 6 , 8,9x10 5 , 3,1x10 5 , 2,1x10 5 , 1,6x10 6 ,
1,3x10 5 dan 1,8x10 6 berturut-turut untuk Chodrica mucula, Tethya aurantium,
Clathrina clathris, Agelas oroides, Ircinia sp., Petrosia reinformmis, Suberitas
domuncula dan Acanthela acuta. Pada penelitian SILBERHORN dan kawankawan,
kelimpahan bakteri simbion berkisar antara 1,3.10 5 hingga 2,4.10 6 ,
sedangkan dalam penelitian ini diperoleh kelimpahan lebih tinggi, yaitu berkisar 1,3
10 3 hingga > 10 7 .
Hasil skrining aktivitas antibakteri
Skrining kemampuan antibakteri beberapa ekstrak isolat terhadap bakteri
patogen Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis dan Vibrio eltor dilakukan
terhadap beberapa ekstrak isolat hasil pemurnian bakteri yang bersimbiosis dengan
delapan spesimen spons baik dengan isolasi cara direct plating maupun enrichment.
Gambar 2 adalah zona hambatan uji antibakteri terhadap beberapa ekstrak bakteri
hasil isolasi.Hasil perhitungan jumlah ekstrak bakteri yang positif menghambat
pertumbuhan Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis dan Vibrio eltor disajikan
pada Tabel 2.
Gambar 2. Zona hambat beberapa ekstrak bakteri simbion sponge terhadap
Vibrio eltor (a), Bacillus subtilis (b) dan Staphylococcus aureus (c).
Figure 2. The inhibition zone of several extract from sponge-symbiotic bacterial
against Vibrio eltor (a), Bacillus subtilis (b), and Staphylococcus
aureus (c).
,
287

MURNIASIH & RASYID
Tabel 2. Hasil perhitungan jumlah koloni positif dari masing-masing spesimen
spons.
Table2. Total number of positive bacterial colony isolated from sponge
specimen.
Code Sponges Number of Number of Total Percentage
isolated inhibited extract of inhibited
bacteria bacteria against
bacteria
colony Sa Bs Ve
(%)
Sp1 Theonella sp. 15* 4 4 2 8 53.33
Sp2 Aaptos sp. 10* 8 3 6 10 100
Sp3 Melophlus 6* 1 1 6 6 100
sarassinorum
Sp4 Callyspongia sp. 11** 5 6 8 11 100
Sp5 Ircinia sp. 6*** 5 3 5 5 83.33
Sp6 Stylissa
7*** 3 3 4 4 57.14
flabeliformes
Sp7 Lisoclinum sp. 10*** 5 4 4 7 70
Sp8 Clathria sp. 10*** 4 9 6 9 90
TOTAL 75 60 80
* direct plating** direct plating & enrichment *** enrichment
Dari 75 isolat bakteri yang dimurnikan (Tabel 2), terdapat 60 isolat yang
mempunyai kemampuan antibakterial, yang ditunjukkan oleh pembentukan zona
bening pada pertumbuhan bakteri patogen. Isolat-isolat bakteri yang diisolasi dari
spesimen spons Sp1-Sp4 (sebagian) diperoleh dengan cara “direct plating” tanpa
melalui penambahan antibiotik ampicilin, sedangkan isolat dari spesimen spons Sp.4
(sebagian) – Sp.8 diisolasi dengan cara “enrichment” (dengan penambahan
antibiotik). Jika kita telaah persentase antara isolat potensial dengan jumlah koloni
yang diisolasi, maka bakteri simbion baik dengan cara “direct plating” maupun
“enrichment” mengandung bakteri potensial antibakteri lebih dari 50% dari koloni
yang dimurnikan. Persentase bakteri potensial tertinggi (100%) terhadap jumlah
koloni yang diisolasi terdapat pada spons Sp2: Aaptos sp. , Sp3: Melophlus
sarassinorum dan Sp.4: Callyspongia sp., selanjutnya sebesar 90% dari spons Sp8 :
Clathria sp.
Penelitian SILBERHORN et al. (2007) melaporkan bahwa persentase total
isolate aktif dari beberapa spons terhadap Eschericia coli, Bacillus subtilis,
Staphylococcus lentus dan Candida glabrata adalah seperti pada Tabel 3. Pada
penelitian SILBERHORN tersebut persentase aktifitas isolat bakteri dari spons C.
reniformis, A. polypoides, T. aurantium, C. clathis, A. oroides, Ircinia sp, P.ficiforis,
S. douncula dan A. acuta berkisar 5-70%. RADJASA et al. (2007) melaporkan
bahwa screening terhadap bakteri yang berasosiasi dengan spons Aaptos sp.
terhadap antibakteri dan substansi MDR (Multi Drug Resistance) menunjukkan tiga
isolat bakteri potensial dari jenis Halomonas aquamarina, Alpha proteobacterium
dan Pseudoalteromonas luteviolacea.
288

POTENSI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS
Tabel 3. Persentase aktifitas total isolat bakteri yang diisolasi dari berbagai
spons terhadap Eschericia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus
lentus dan Candida glabrata.
Table 3. Percentage of total isolated sponge-associated bacteria against
Eschericia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus lentus and Candida
glabrata.
Sample Tested isolates (n) Activity total (%)
HW Li 80 13
C. reniformis 57 70
A. polypoides 13 54
T. aurantium 108 18
C. elathis 112 26
A. oroides 112 12
I. sp. 100 37
P. fieiformis 105 0
S. domuneula 112 46
A. aeuta 102 5
Average 29
Ref: SILBERHORN et al. (2007)
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa terdapat 80%
total bakteri potensial penghasil substansi antibakteri dari sejumlah koloni hasil
isolasi dari spons Sp1: Theonella sp., Sp.2: Aaptos sp., Sp.3: Melophlus
sarassinorum, Sp.4: Callyspongia sp, Sp5: Ircinia sp, Sp6.: Stylissa flabeliformes,
Sp.7: Lisoclinum sp., Sp.8: Clathria sp. Prosentase tertinggi terdapat pada spons
Aaptos sp., Melophlus sarassinorum sp., Callyspongia Sp. dan Clathria sp.
Identifikasi secara molekuler dan analisis substansi aktif diperlukan untuk
mendapatkan informasi yang lebih komprehensif.
PERSANTUNAN
Penulis sangat berterima kasih kepada Pusat Riset Kelautan Universitas
Hasanudin Makassar yang telah membantu dalam pengambilan sampel spons, selain
itu kami juga sangat berterimakasih kepada Departemen Pendidikan Nasional
Pendidikan Tinggi dan Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia yang telah
memberikan dana penelitian melalui proyek insentif peneliti dan perekayasa.
289

MURNIASIH & RASYID
DAFTAR PUSTAKA
ANG, K.K., M.J. HOLMES, T. HIGA, M.T. HAMANN and U.A. KARA 2000. In
vivo antimalarial activity of the beta-carboline alkaloid manzamine A.
Antimicrob. Agent. Chemother. 44: 1645-1649.
BAUER, A.W., W.M. KIRBY, J.C. SHERRIS and M. TUREK 1996. Antibiotic
susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin.
Pathol. 45: 493-498.
BEWLEY, C.A., N.P. HOLLAND and D.J. FAULKNER. 1996. Two classes of
metabolites from Theonella swinhoei are localized in distinct populations of
bacterial symbionts. Experientia 52: 716-722.
BULTEL, P.V., J.P. BERGE, C. DEBITUS, J.L. NICOLAS and M. GUYOT 1999.
Metabolites from the sponge-associated bacterium Pseudomonas species.
Mar. Biotechnol. 1: 384-390.
FRIEDERICH, A.B., H. MAERKERT , T. FENDERT, J. HACKER, P. PROKSCH
and U. HENTSCHEL.1999. Microbial diversity in he marine sponge
Aplysina cavernicola (formely Verongia cavernicola) analyzed by
fluorescence in situ hybridization (FISH). Mar. Biol. 134: 461-470.
FLOWERS, AE., M.J. GARSON, R.I. WEBB, E.J. DUMDEI and R.D. CHARAN.
1998. Cellular origin of chlorinated diketopiperazines in the dictyoceratid
sponge Dysidea herbacea (Keller). Cell Tissue Res. 292: 597-607.
HOOPER, J. 1997. Guide to sponge collection and identification. Queensland
Museum South Brisbane Australia : 26-29.
JAYATILAKE, G.S., M.P. THORNTON, A.C. LENARD, J.E. GRINWADE and
B.J. BAKER. 1996. Metabolites from an Antarctic sponge-associated
bacterium, Pseudomonas aeroginosa. Journal of Natural Products 59: 293-
296.
MAPSTONE, G.M. 1990. Reef corals and sponges of Indonesia a video-based
learning module. Printed by United Nations Educational, Scientific and
Cultural Organization, Paris France : 10-20.
MITOVA, M., G. TOMMONARO and D.S. ROSA. 2003. A novel cyclopeptide
from a bacterium associated with the marine sponge Ircinia muscarium.
Zetschift für Naturforschung 58: 740-745.
290

POTENSI BAKTERI YANG BERASOSIASI DENGAN SPONS
NARSINHA, L.T. and A.C. ANIL. 2000. Antibacterial activity of the sponge Ircinia
ramose: Importance of its surface-associated Bacteria. Journal of Chemical
Ecology. 26(1):57-71.
OCLARIT, J.M., H. OKADA, S. OHTA, K. KAMIMURA, Y. YAMAOKA, R.
LIZUKA, S. MIYASHIRO and S. IKEGAMI. 1994. Anti-bacillus
substances in the marine sponge Hyatella species produced by an associated
Vibrio species. Bacterium. Microbios. 78: 7-16.
RACHMANIAR, R., T. MURNIASIH dan F. UNTARI 1997. Laporan penelitian
screening substansi bioaktif dari spons dan karang lunak. Pusat Penelitian
dan Pengembangan Oseanologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia : 4-5.
RACHMANIAR, R., T. MURNIASIH, A. RASYID dan F. UNTARI 1998.
Laporan penelitian substansi bioaktif dari spons. Pusat Penelitian
Oseanologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia: 3-7.
RACHMANIAR, R., T. MURNIASIH, A. RASYID dan F. UNTARI 2001.
Laporan penelitian substansi antiinfeksi dari spons dan makroalga. Pusat
Penelitian Oseanografi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia : 4-10.
RACHMANIAR, R., T. MURNIASIH, A. RASYID dan F. UNTARI 2004.
Laporan penelitian sensus biota laut dari spons dan karang lunak dalam
hubungannya dengan potensi bioprospekting. Pusat Penelitian Oseanografi
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia:3-5.
RACHMANIAR, R., T. MURNIASIH, A. RASYID dan F. UNTARI 2005.
Laporan Penelitian Sensus Biota Laut dari spons dan karang lunak dalam
hubungannya dengan potensi bioprospekting. Pusat Penelitian Oseanografi
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia :4-8.
RACHMANIAR, R., A. RASYID dan F. UNTARI 2006. Laporan penelitian
sensus biota laut dari spons dan karang lunak dalam hubungannya dengan
potensi bioprospekting. Pusat Penelitian Oseanografi Lembaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia : 3-10.
RACHMANIAR, R., A. RASYID dan F. UNTARI 2007. Laporan penelitian
sensus biota laut dari spons dan karang lunak dalam hubungannya dengan
potensi bioprospekting. Pusat Penelitian Oseanografi Lembaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia.: 4-20.
RADJASA O.K., D.H. KENCANA, A. SABDONO, R.A. HUTAGALUNG and E.
SRI LESTARI. 2007. Antibacterial acivity of Marine Bacteria Associated
with sponge Aaptos sp. against Multi Drug Resistant (MDR) strain. Jurnal
Matematika dan Sains 12(4): 147-151.
291

MURNIASIH & RASYID
RAO, K.V, B.D. SANTARSAIRO, A.D. R.F. SCHINAZI, B.L. TEKWANI and
M.T. HAMAUN 2003. New manzamine alkaloids with activity against
infectious and tropical parasitic diseases from an Indonesian sponge.
Journal of Natural Product 66: 823-828.
SILBERHORN, A.M., V. THIEL and J.F. IMHOFF 2007. Abundance and
bioactivity of cultured sponge-associated bacteria from the Mediterranean
Sea. Microbial Ecology 55: 94-106.
SUZUMURA, K., T. YOKO, M. FUNATSU, K. NAYAI, K. TANAKA, H.
ZHANG and K. SUZUKI 2003. YM-266183 and YM-266184, novel
thiopeptide antibiotics produced by Bacillus aureus isolated from a marine
sponge . Structure elucidation. Journal of Antibiotics (Tokyo) 56: 129-134.
TAYLOR, M.W., R. RADAX, D. STEGER and M. WAGNER 2007. Spongeassociated
microorganisms: Evolution, Ecology, and Biotechnological
Potential. Microbiol. Mol.Biol. Rev. 71(2): 295-347.
VACELET, J. and DONADEY 1977. Electronmicroscope study of the association
between methane-oxidizing bacteria and deep sea carnivorous cladorhizid
sponge. Mar. Ecol. Prog. 145: 77-85.
ZHENG, L., H. CHEN, X. HAN, W. LIN and X. YAN 2005. Antimicrobial
screening and active compound isolation from marine bacterium NJ6-3-1
associated with the sponge Hymeniacidon perleve. World Journal of
Microbiology & Biotechnology. 21: 201-206.
292