Please read my original book Leave a Reply - Blogs Unpad

BAB I 

MEDIA 

Media adalah suatu substrat yang digunakan untuk menumbuhkan dan 

mengembangbiakkan mikroorganisme. 

Syarat-syarat Media 

1. Mengandung komposisi : 

• Air 

• Sumber energi metabolik (fermentasi, respirasi, fotosintesis) 

• Zat hara (sumber karbon, nitrogen, sulfur, fosfor, oksigen, hidrogen & 

trace elements) 

• Asam amino, vitamin, nukleosida 

2. Memiliki pH, temperatur dan tekanan osmotik yang sesuai dengan kebutuhan 

mikroorganisme. 

3. Steril, agar tidak ditumbuhi oleh mikroorganisme pencemar. 

Fungsi Komponen-komponen Media 

Mayoritas sel terdiri atas karbon, oksigen, hidrogen, nitrogen, fosfor. 

Senyawa diatas dibutuhkan dalam pembentukan membran sel, protein, 

asam nukleat dan struktur lain dari sel. 

Senyawa tersebut diatas dibutuhkan dalam jumlah banyak, meliputi 1% 

dari berat kering sel, disebut MAKRONUTRIEN. 

Senyawa lainnya yang dibutuhkan dalam jumlah yang lebih kecil antara 

lain kalsium, potassium, magnesium, sulfur, besi, mangan. Senyawa ini 

disebut MIKRONUTRIEN. Mikronutrien meliputi 0.1-1.0% dari berat 

kering sel. Walaupun dibutuhkan dalam jumlah yang sedikit, mikronutrien 

berperan penting dalam fungsi sel. 

HANDBOOK OF TA HAYATI 1

Trace elements dibutuhkan dalam jumlah yang sangat kecil yang sukar 

ditentukan. Jumlah yang dibutuhkan adalah konsentrasi cairan intrasel 

terjadi dehidrasi dan pengkerutan sel (PLASMOLISIS). 

HIPOTONIK konsentrasi cairan ekstrasel < konsentrasi cairan intrasel 

terjadi pembengkakan. 

Jenis media 

Berdasarkan konsistensi : 

• Media padat (agar/gelatin) 

• Dibuat dengan cara menambahkan agen pemadat, misalnya agar, gelatin 

atau silica gel ke dalam media cair. 


• Agen pemadat yang baik adalah tidak diuraikan oleh mikroorganisme, 

tidak menghambat pertumbuhan mikroorganisme, tidak mencair pada 

suhu ruang. 

• Agar dan silica gel tidak mencair pada suhu ruang dan tidak diuraikan 

oleh mikroorganisme. Sebaliknya, gelatin, diuraikan oleh 

mikroorganisme dan mencair pada suhu ruang. 

• Contoh : agar nutrien, agar darah, Saboraud’s agar. 

• Media cair (broth) 

• Meliputi nutrient broth (kaldu nutrien), citrate broth, glucose broth, 

litmus milk dsb. 

• Media cair digunakan dalam propagasi banyak mikroorganisme, uji 

fermentasi dan uji lainnya. 

• Media semi-padat 

Berdasarkan kimiawi : 

• Media sintetik 

• Media non-sintetik (alami) 

Berdasarkan sifat : 

• Media Umum 

– Untuk pertumbuhan atau perkembangan satu atau lebih kelompok 


• Media Pengaya 

– Untuk memberikan kesempatan terhadap suatu jenis/kelompok 

mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang biak lebih cepat dari 

jenis/kelompok lain dalam satu media. 

• Media Penguji 

– Media yang digunakan untuk pengujian senyawa atau benda tertentu 

dengan bantuan mikroorganisme. 

• Media Perhitungan 

– Media yang digunakan untuk menghitung jumlah mikroorganisme pada 

suatu bahan 


Media Selektif 

– Media yang hanya menumbuhkan mikroorganisme yang diinginkan saja 

yang dapat tumbuh karena tidak adanya nutrien penting bagi 

mikroorganisme yang tidak diinginkan untuk tumbuh dan kehadiran 

substansi inhibitor seperti NaCL, asam, kristal violet (toksik), antibiotika 

(misal : streptomisin) dsb. 

Media Diferensial 

– Media yang mengandung substansi yang dapat menyebabkan munculnya 

karakteristik dari masing-masing mikroorganisme yang ditumbuhkan. 

Contoh media selektif dan diferensial : Levine EMB agar untuk analisis koliform 

dalam air. 

Contoh Media 


Pembuatan Media 

Bila tabung/cawan petri yang digunakan untuk pembuatan media sudah dalam 

keadaan bersih dan bebas kontaminasi, maka tidak perlu dilakukan pencucian. 

Pencucian dilakukan dengan menggunakan air hangat dan deterjen, bagian 

dalamnya disikat. Cuci sebanyak dua kali, pada pencucian kedua, gunakan 

aquadest untuk membersihkan sisa-sisa deterjen yang masih tertinggal. 

Tempatkan tabung/cawan petri tersebut pada keranjang/rak untuk pengeringan. 

Jangan dikeringkan dengan menggunakan handuk. 

Sterilisasi. 

Pembuatan Media Sintetik 

• Glukosa 

• Kalium fosfat 

• Ammonium klorida 

• Magnesium sulfat 

• Feri klorida 

• Aquadest 

0,2 g 

0,1 g 

0,05 g 

0,02 g 

0,0005 g 

100 ml 

Siapkan 100 ml kaldu glukosa garam mineral dengan kandungan seperti pada 

tabel 

Siapkan labu erlenmeyer 250 ml 

Masukkan aquadest sebanyak 75 ml 


Tambahkan setiap bahan sesuai urutan pada tabel 

Kocok pada setiap penambahan bahan dan biarkan larut dulu 

sebelum penambahan bahan berikutnya 

Tambahkan sisa aquadest sebanyak 25 ml 

Masukkan 10 ml larutan ke dalam 10 buah tabung dengan menggunakan pipet 10 ml 

Tutup tabung dengan kapas yang dibalut oleh kain kasa 

Beri label dan sterilisasi 

Pembuatan Media Non-Sintetik 

KALDU NUTRIEN 

• Pepton 

1,0 g 

• NaCl 

• Ekstrak daging 

• Aquadest 

1,6 g 

0,6 g 

200 ml 


• Siapkan 1 labu erlenmeyer 250 ml. 

• Masukkan 150 ml aquadest. 

• Tambahkan ketiga bahan berikutnya, campur dan kocok pada setiap 

penambahan bahan. 

• Tambahkan 50 ml sisa aquadest. 

• Panaskan larutan ini hingga semua bahan larut. 

• Ukur pH 

• Masukkan 10 ml larutan ke dalam 10 tube steril 

• Tutup tabung 

• Beri label 

• Tempatkan ke rak 

• Sterilkan 

Untuk membentuk media padat tambahkan 1.5 g agar pada sisa larutan 

• Panaskan larutan supaya agar larut 

• Kocok labu supaya agar tidak menempel pada dasar labu 

• Masukkan 10 ml larutan ke dalam tube steril 


• Tutup tabung 

• Beri label 

• Tempatkan ke rak 

• Sterilisasi 

PERHATIKAN : 

• Pemanasan larutan dengan menggunakan api bunsen atau electric hot plate. 

• Tandai tinggi larutan awal sebelum dipanaskan untuk menghindari water 

loss. 

• Bila terjadi water loss tambahkan aquadest. 

• Suhu pemanasan tergantung komposisi medium, ada yang 60 0 C. 

• Agar akan membeku pada suhu 40-42 0 C. 


BAB II 

STERILISASI 

Pengertian 

Suatu proses (dengan metode tertentu) yang memberikan hasil akhir suatu keadaan 

dimana tidak dapat ditunjukkan lagi adanya mikroorganisme hidup. 

Prinsip Dasar Sterilisasi 

• Adanya derajat kontaminasi yang serendah mungkin sebagai pra-kondisi. 

• Pemilihan metode sterilisasi yang paling tepat. 

• Ada tolak ukur yang tepat untuk mengukur efisiensi proses sterilisasi atau hasil 

akhir. 

• Ada sarana penunjang untuk menjaga mutu hasil akhir produk steril. 

Dekontaminasi 

• Jumlah kontaminan tinggi hasil akhir meragukan atau akan membutuhkan 

waktu proses lebih lama. 

• Proses dekontaminasi meliputi : 

- pembilasan 

- penyikatan 

- pencucian (dengan desinfektan), baik dengan manual/alat 

Pemilihan Metode Sterilisasi 

• Sifat bahan yang akan disterilkan. 

• Proses yang paling mudah, murah, namun cukup efektif. 


Cara sterilisasi menurut FI Ed. IV 

1. Sterilisasi Panas Basah (Uap) 

– Proses sterilisasi termal menggunakan uap jenuh di bawah tekanan 

berlangsung di suatu bejana yang disebut autoclave. 

– Metode yang paling sering digunakan. 

– Suhu 121 0 C selama 15-20’ tergantung bahan/prosedur sterilisasi. 

– Prinsip : Udara di dalam bejana diganti dengan uap jenuh. 

Fase Siklus Sterilisasi 

– Pemanasan/Vakum (Conditioning) 

– Fase Pemaparan Uap (Exposure) 

132°C 2’ 

121°C 12’ 

116°C 30’ 

– Pembuangan Uap (Exhaust) 

– Fase Pengeringan (Drying) 

Metode ini paling banyak digunakan karena : 

• Hampir 80% alat dan bahan dapat disterilkan dengan metode ini, seperti 

karet. 

• Biaya operasional cukup rendah dibanding metode lain. 

• Temperatur merata pada setiap tempat selama proses. 

• Cepat dan hasil kering. 


Bejana autoclave 

Prinsip kerja autoclave 


2. Sterilisasi Panas Kering 

– Alat : Oven 

– Prinsip : 

• Udara dipanaskan dan disaring. 

• Didistribusikan secara merata ke seluruh bejana dengan cara 

sirkulasi atau radiasi. 

– Temperatur dan waktu yang digunakan : 

• 150 0 C 60-150’ 

• 160 0 C 45-120’ 

• 170 0 C 20-60’ 

• 180 0 C 20-30’ 

Kelebihan : 

– Hasil kering. 

– Dapat digunakan untuk semua bahan termostabil, seperti alat-alat gelas. 

– Mudah dilaksanakan. 

Kekurangan : 

– Waktu yang dihabiskan cukup lama. 

– Penetrasi panas terbatas pada lapisan tertentu. 

– Dibutuhkan tenaga listrik cukup besar. 

Oven 


3. Sterilisasi Gas 

• Sebagai alternatif dari sterilisasi termal dilakukan bila bahan yang 

disterilkan tidak tahan terhadap suhu tinggi seperti pada proses sterilisasi 

uap atau panas kering. 

• Daya penetrasi dan absorpsi tinggi sehingga sterilisasi dapat dilakukan pada 

pembungkus akhir. 

• Sterilisasi dengan menggunakan gas kimia : 

Etilen oksida (EtO 2 ) 

• Sifat : mudah meledak dan iritatif. 

• Dalam perdagangan dicampur dengan gas CO 2 atau freon dalam kadar 10- 

90%. 

• Mekanisme kerja : melalui alkilasi gugus biologis esensial dari 


• Meninggalkan residu toksik. 

• Mutagenik. 

• Afinitas tinggi sehingga perlu diangin-anginkan sebelum digunakan, tujuan 

untuk menghilangkan EtO 2 yaitu selama 8-30 jam pada 45 0 C atau 4-10 

hari pada temperatur kamar. 

Formaldehida 

– Mekanisme kerja : 

• Melalui ikatan dengan gugus imino dan amino dari protein 


– Keunggulan dibanding etilen oksid : 

• Lebih murah 

• Kurang meninggalkan residu 

• Tidak mudah meledak 

• Kurang toksik 


4. Sterilisasi dengan radiasi ion 

Digunakan sinar beta (sinar elektron) dari generator Van De Graaf. 

Atau sinar gamma. 

Sterilisasi dingin karena dilakukan pada temperatur kamar. 

Kemampuan daya tembus baik penyebaran energi homogen. 

5. Sterilisasi dengan penyaringan/filtrasi 

Digunakan untuk mensterilkan udara atau bahan dalam bentuk cairan. 

Contohnya adalah filter udara seperti HEPA ( High Efficiency 

Particulated Air) untuk menghindari terjadinya kontaminasi atau infeksi 

silang. 

HEPA Filter 

6. Sterilisasi dengan radiasi ultraviolet (UV) 

Efek maksimum : pada gel. radiasi 265 nm 

Aplikasi : 

• Untuk sterilisasi ruangan/udara. 

• Inaktivasi mikroorganisme pada permukaan bahan. 

• Produk yang tidak stabil, dan sulit disterilkan dengan cara 

konvensional. 


INDIKATOR STERILISASI 

• Indikator Fisik/Mekanik 

• Indikator Kimia 

• Indikator Biologis 

INDIKATOR FISIK/MEKANIK 

• Bagian dari mesin sterilisasi. 

• Biasanya menunjukkan bahwa alat berfungsi baik. 

• Contoh : Pada alat high prevacum autoclave yang menunjukkan hub. T dan P 

konstan proses sterilisasi sempurna. 

INDIKATOR KIMIA 

• Yaitu indikator dari bahan kimia yang pada temperatur tertentu (± 121 O C) akan 

berubah warna. 

• Contoh : autoclave tape, wipack med. 


INDIKATOR BIOLOGIS 

Menggunakan bakteri thermophilus dan kertas pH/pH meter. 

Kontrol Kualitas 

Selain dengan penggunaan indikator, kontrol kualitas sterilisasi juga dapat dilakukan 

dengan kalibrasi alat secara periodik dan ditetapkan standar deviasinya. 


BAB III 

INOKULASI MIKROORGANISME 

INOKULASI=KULTUR=BIAK=TUMBUH 

Inokulasi adalah penempatan sesuatu dengan tujuan penumbuhan atau 

reproduksi. 

Inokulasi mikroorganisme penempatan mikroorganisme dari suatu suspensi 

ke media steril agar dapat tumbuh dan berkembangbiak. 

Media steril yang dimaksud disini media padat dan cair dalam petri/tabung. 

Ketika kita akan mengamati dan mempelajari flora bakteri pada tubuh, tanah, 

air, makanan dan lingkungan sekitar kita lainnya, kita akan menemukan 

populasi mikroorganisme campuran. Mikroorganisme jarang ditemukan dalam 

satu spesies. 

Hal yang penting dilakukan agar dapat mempelajari karakteristik kultur, 

morfologi dan fisiologi satu spesies mikroorganisme adalah pemisahan 

mikroorganisme tersebut dari spesies lainnya. Dengan kata lain, kita harus 

membuat suatu biakan murni dari mikroorganisme tersebut. 

Pure culture = biakan murni. 

BIAKAN MURNI 

Bagaimana memperoleh suatu biakan murni teknik aseptik. 

Tidak tercemar dari luar biasanya dari udara. 

Media yang digunakan harus steril. 

Untuk memperoleh biakan murni dapat dilakukan pengenceran dengan 

menggunakan bahan cair atau bahan padat. 


TEKNIK ASEPTIK 

Teknik aseptik mengacu pada praktek yang dilakukan oleh para ahli 

mikrobiologi untuk mematikan seluruh mikroorganisme yang dapat 

mencemari media, sel/jaringan hidup dan suatu proses pemindahan 

mikroorganisme pada biakan. 

Transfer atau pemindahan meliputi pemindahan suatu 

mikroorganisme dari koloninya pada media padat ke media cair atau 

inokulasi mikroorganisme pada suatu media padat maupun cair 

(Dibutuhkan saat memindahkan mikroorganisme dari suspensi 

mikroorganisme ke media steril). 

Suatu proses aseptik dikatakan sukses apabila tidak terdapat 

mikroorganisme pencemar yang dapat mencemari proses. 


Prosedur Umum 

Desinfeksi area kerja. 

o Area kerja harus didesinfeksi terlebih dahulu untuk mengurangi 

kontaminan yang dapat mencemari proses aseptik. 

Ose dan jarum harus steril. 

o Cara sterilisasi adalah dengan cara fiksasi dengan panas/pemijaran 

menggunakan lampu bunsen. 

o Pemanasan dapat mematikan mikoorganisme pencemar. 

Pemijaran/pemanasan pada tabung. 

o Pada mulut tabung terkandung mikroorganisme yang dapat mencemari 

biakan. Oleh karena itu, lakukan pemijaran/pemanasan pada mulut 

tabung menggunakan lampu bunsen. 

Desinfeksi akhir. 

o Setelah melakukan suatu proses aseptik, lakukan desinfeksi akhir untuk 

mematikan mikroorganisme yang kemungkinan tertinggal. 

Teknik Biakan Murni 

• Teknik Penggoresan Agar (Streak plate method) 

• Teknik Agar Tuang (Pour plate method) 

• Teknik Agar Sebar 

• Teknik Tusukan gelatin 

Media Biakan 

Media biakan yang digunakan pada inokulasi : 

Media pembiakan dasar 

Media pembiakan penyubur 

Media pembiakan selektif 


Media Pembiakan Dasar 

Adalah media pembiakan sederhana yang mengandung zat-zat yang umum 

diperlukan oleh sebagian besar mikroorganisme dan dipakai sebagai komponen 

dasar dalam pembuatan media pembiakan lainnya. 

Mengandung pepton dan ekstrak daging. 

Media Pembiakan Penyubur 

Komponen sama seperti pada media pembiakan dasar, ditambah darah, ekstrak 

hati, dsbnya. 

Zat tambahan untuk mempersubur pertumbuhan mikroorganisme tertentu, 

yang pada media pertumbuhan dasar tidak dapat tumbuh dengan baik. 

Media Pembiakan Selektif 

Menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain yang tidak dicari. 

Berdasarkan konsistensi : 

Bentuk cair broth 

Bentuk padat (lempeng, miring, tegak) 

BIAKAN MURNI 

Dengan biakan murni nantinya akan diperoleh koloni terpisah yang 

mengandung satu macam mikroorganisme dalam satu petri. 

Hasil akhir koloni yang terpisah. 

Urutan : Suspensi mikroorganisme campuran biakan murni isolasi (satu macam 

mikroorganisme). 

Setelah mendapatkan biakan murni, lakukan proses identifikasi mikroorganisme. 


STREAK PLATE METHOD 

Dikenal dengan teknik penggoresan agar. 

Metode ini hemat waktu dan ekonomis, hanya saja membutuhkan keterampilan 

menggores yang dapat diperoleh dengan pengalaman. 

Penggoresan yang baik nantinya akan dapat menghasilkan isolat yang baik. 

Untuk mendapatkan koloni terpisah pada saat penggoresan, perhatikan : 

o Dinginkan ose setelah dipijarkan. 

• Gunakan ose yang telah dingin untuk menggores pada permukaan 

lempengan agar. 

• Ose yang panas akan mematikan mikroorganisme sehingga tidak 

terjadi pertumbuhan pada bekas goresan. 

o Ose disentuhkan pada lempengan agar. 

• Pada saat menggores, ose dibuat meluncur diatas permukaan 

lempengan agar. 

• Agar jangan sampai terluka, karena agar yang luka mengganggu 

pertumbuhan 

mikroorganisme sehingga nantinya akan sulit memperoleh koloni 

terpisah. 

o Pijarkan ose setelah menggores satu daerah. 

• Pemijaran ose mematikan mikroorganisme yang melekat pada 

mata ose dan mencegah pencemaran pada penggoresan daerah 

berikutnya. 

o Gunakan tutup cawan petri untuk melindungi permukaan agar dari 

pencemaran. 

o Balikkan lempengan agar untuk mencegah air kondensasi jatuh ke atas 

permukaan agar. 

o Apabila air kondensasi jatuh ke koloni, akan menghancurkan koloni dan 

seluruh teknik biakan yang telah dilakukan. 


Beberapa teknik goresan : 

• Goresan T : 

Lempengan dibagi menjadi 3 bagian dengan membentuk huruf T pada 

bagian luar dasar petri. 

Inokulasi daerah I sebanyak mungkin dengan gerakan sinambung. 

Panaskan ose dan biarkan dingin kembali. 

Gores ulang daerah I sebanyak 3-4 kali dan teruskan goresan di daerah 

II. 

Pijarkan ose dan biarkan dingin kembali. 

Ulangi prosedur 3-5 untuk menggores daerah III. 

Pijarkan ose. 

• Goresan Kuadran : 

Sama dengan goresan T, hanya saja lempengan agar dibagi 4. 

• Goresan Radian 

Goresan dimulai di bagian pinggir lempengan. 

Pijarkan ose dan dinginkan kembali. 

Putar lempengan agar 90 0 dan buat goresan terputus dimulai dari bagian 

pinggir lempengan. 

Putar lempengan agar 90 0 dan buat goresan terputus diatas goresan 

sebelumnya. 

Pijarkan ose. 

• Goresan Sinambung 

Ambil satu mata ose suspensi dan gores secara sinambung pada setengah 

permukaan lempengan agar. 

Jangan pijarkan ose, putar lempengan 180 0 , gunakan sisi mata ose yang 

sama dan gores pada sisa permukaan lempengan agar. 


Contoh hasil penggoresan 

POUR PLATE METHOD 

Dikenal dengan teknik agar tuang. 

Isolasi menggunakan media cair dengan cara pengenceran. 

Dasar melakukan pengenceran adalah penurunan jumlah mikroorganisme 

sehingga pada suatu saat hanya ditemukan satu sel dalam tabung. 

Pada metode ini, dilakukan pengenceran satu mata loop suspensi ke dalam tiga 

tabung, sehingga akan diperoleh lempengan dengan jumlah bakteri yang 

optimum untuk isolasi. 

Teknik ini lebih mudah karena tidak memerlukan keterampilan seperti pada 

teknik penggoresan. 


TEKNIK AGAR SEBAR 

Langkah pertama sama dengan POUR PLATE METHOD. 

Kemudian media agar yang telah ditanami oleh mikroorganisme disebari oleh 

cairan dibantu dengan suatu alat penyebar yang telah disterilkan. 

Alat penyebar terbuat dari gelas. 

Cara : 

• Pipet 0,1 ml cairan dari botol pengencer dan biarkan cairan mengalir ke 

atas permukaan agar. 

• Cairan disebarkan dengan alat penyebar. 

• Sterilisasi penyebar dilakukan dengan mencelupkan ke alkohol 

dipanaskan. 

• Setelah itu penyebar didinginkan terlebih dahulu sebelum digunakan 

untuk menyebarkan cairan di permukaan agar. 

• Penyebaran dilakukan dengan memutar petri. 

TEKNIK TUSUKAN 

Menggunakan jarum (needle), bukan ose. 

Jarum (needle) ditusukkan hingga ke dasar media. 

Sterilisasi jarum (needle) sama dengan ose. 

Media gelatin. 


Cara Pemeriksaan Pertumbuhan Mikroorganisme 

• Media Pembiakan Cair 

Media menjadi keruh merata (homogen) atau tampak granuler melekat 

pada dinding dan dasar tabung. 

Permukaan cairan berbentuk membran. 

Apakah pertumbuhan menghasilkan gas atau tidak. 

Apakah pertumbuhan menimbulkan bau yang khas. 

KOLONI 

• Sifat Koloni 

Adalah sifat yang berhubungan dengan bentuk, susunan, permukaan, 

pengkilatan dsb. 

Dapat diamati tanpa mikroskop makroskopi. 

• Media Pembiakan Padat 

Pada semua media pembiakan padat umumnya, baik yang berbentuk 

lempeng maupun miring perlu diperhatikan sifat-sifat koloni: 

• Bentuk koloni koloni bulat, memanjang, tepi rata, tidak rata. 

• Ukuran koloni menurut diameter rata-rata, ukuran koloni 

berbeda-beda pada berbagai jenis, selebar titik hingga menutupi 

permukaan media. 

• Kenaikan permukaan koloni yang rata dengan permukaan 

media, ada koloni yang timbul diatas permukaan media. 


Sifat-sifat Umum Koloni 

Halus kasarnya permukaan koloni yang permukaannya halus, ada juga yang 

kasar. 

Wajah permukaan koloni yang permukaannya mengkilap, ada yang kusam. 

Warna keputihan atau kekuning-kuningan, kemerah-merahan, coklat, jingga, 

biru, hijau, ungu. 

Kepekatan koloni lunak seperti lendir, lunak seperti mentega, ada juga yang 

keras dan kering. 

Bau koloni ada koloni yang berbau khas dan ada yang tidak berbau sama sekali. 

Gambar contoh koloni baik pada media cair (broth), agar, maupun gelatin 


• TEKNIK SUBKULTUR 

Langkah selanjutnya setelah mendapatkan biakan murni adalah 

memindahkan mikroorganisme dari cawan petri ke tabing berisi nutrient 

broth atau nutrient agar (subkultur). Hasil dari subkultur kemudian 

diinkubasi selama 24 jam. Pewarnaan mikroorganisme dilakukan untuk 

memeriksa apakah sudah terbentuk biakan yang benar-benar murni atau 

belum. 

Ketika memindahkan mikroorganisme dari suatu cawan petri yang 

mengandung media, sebaiknya menggunakan jarum yang ditusukkan. 

Jarum ditusukkan pada bagian tengah koloni untuk mendapatkan koloni 

yang benar-benar mengandung satu macam mikroorganisme saja. 


BAB IV 

PEWARNAAN BAKTERI 

BAKTERI 

• Hanya dapat dilihat dengan mikroskop mikroskopi. 

• Satuan untuk ukuran bakteri mikron. 

• Bakteri rata-rata berukuran lebar 0,5-1 mikron dan panjang hingga 10 mikron. 

• 1 mikron = 10 -3 mm. 

BENTUK BAKTERI 

• Bulat/bola : 

◦ Monococcus 

• e.g. Neisseria gonorrhoeae (penyebab kencing nanah). 

◦ Diplococcus 

• e.g. Diplococcus pneumoniae (penyebab penyakit pneumonia). 

◦ Sarkina. 

◦ Streptococcus. 

◦ Staphylococcus. 

• Batang (Basil) 

◦ Basil tunggal 

• e.g. Salmonella typhi (penyebab penyakit tifus). 

◦ Diplobasil 

◦ Streptobasil 

• e.g. Bacillus anthracis (penyebab penyakit antraks). 


• Melilit 

◦ Spiral; sel tubuh umumnya kaku. 

• e.g. Spirillum. 

◦ Vibrio; seperti koma. 

• e.g. Vibrio cholerae (penyebab penyakit kolera). 

◦ Spirochaeta; dapat memanjang dan memendek karena sifatnya yang sangat lentur. 

PEWARNAAN BAKTERI 

Tubuh bakteri tidak mengadsorpsi dan membiaskan cahaya sehingga sukar diamati walau sudah 

menggunakan mikroskop. 

Untuk melihat bakteri dengan jelas tubuhnya diisi dengan zat warna PEWARNAAN 

BAKTERI. 

Zat warna mengadsorpsi dan membiaskan cahaya sehingga kontras tubuh bakteri dengan 

sekelilingnya ditingkatkan 

o Sudah dilakukan sejak pertengahan abad ke-19, oleh Louis Pasteur dan Robert Koch. 

o Ada 2 macam zat warna yang sering dipakai: 

• Zat warna bersifat asam : komponen warnanya adalah anion (-). 

• Zat warna bersifat alkali : komponen warnanya adalah kation (+). 

Muatan negatif banyak ditemukan pada dinding sel, membran sel, dan sitoplasma muatan 

positif pada zat warna alkali akan berikatan dengan muatan negatif dalam sel bakteri 

akan lebih jelas terlihat. 

Zat warna asam digunakan untuk mewarnai bagian sel yang bermuatan positif. 

Pewarnaan Positif : 

Yang diwarnai adalah bakteri. 

Bisa menggunakan zat warna asam dan alkali 

Pewarnaan Negatif 

Beberapa bakteri sukar diwarnai dengan zat warna alkali lakukan pewarnaan negatif. 

Latar belakang di sekeliling bakteri diwarnai untuk meningkatkan kontras dengan bakteri yang tidak 

berwarna. 


Cara bakteri dicampur dengan nigrosin gesekkan di object glass zat warna akan mewarnai 

lingkungan sekitar bakteri, bukan bakteri dengan mikroskop, bakteri akan terlihat tidak 

berwarna dengan latar belakang hitam. 

Pada metode ini preparat tidak dipanaskan, tetapi dikeringkan di udara. 

Ciri pewarnaan negatif : 

Menggunakan zat warna asam (bermuatan negatif). 

Penggunaan zat warna asam menyebabkan zat warna tidak akan mewarnai permukaan sel yang 

mempunyai muatan negatif. 

Pewarnaan ini bukan merupakan pewarnaan sel bakteri karena sel bakteri tetap tidak berwarna 

setelah penambahan zat warna. 

Larutan zat warna yang digunakan larutan encer (

◦ Misal : kristal violet, methylen blue, safranin (zat warna alkali), nigrosin, merah 

kongo (zat warna asam). 

• Pewarnaan Khusus 

◦ Untuk melihat salah satu struktur sel. 

• Pewarnaan Kapsel 

• Pewarnaan Spora 

• Pewarnaan Flagela 

• Pewarnaan Badan Inklusi 

• Pewarnaan Diferensial 

◦ Digunakan lebih dari satu zat warna. 

◦ Adakalanya menggunakan pelarut yang sama (satu larutan mengandung dua atau 

lebih zat warna). 

◦ Adakalanya menggunakan pelarut yang berbeda. 

◦ Contoh : pewarnaan Gram, pewarnaan Tahan Asam (Ziehl-Neelsen). 

Sediaan (preparat) untuk proses pewarnaan 

• Dibuat ulasan bakteri diatas object glass 

◦ Jumlah bakteri dalam ulasan jangan terlalu padat dan jangan terlalu encer. 

◦ Apabila terlalu padat, akan terlihat menumpuk di bawah mikroskop. Apabila terlalu 

cair, tidak akan terlihat dibawah mikroskop. 

• Keringkan di udara sebentar. 

• Fiksasi melewatkan preparat diatas api. 

◦ Fiksasi berguna untuk melekatkan bakteri pada object glass dan mematikan bakteri. 

• Proses pewarnaan. 


PEWARNAAN KHUSUS 

• Pewarnaan Kapsel 

◦ Kapsel lapisan yang melekat di luar dinding sel yang terdiri dari polisakarida atau 

polipeptida. 

◦ Fungsi kapsel melindungi bakteri terhadap sel fagosit. 

◦ Bacillus anthracis, Streptococcus pneumoniae, S.mutans. 

◦ Lapisan kapsel tebal, sukar diwarnai Jadi digunakan pewarnaan negatif. 

◦ Pada pewarnaan negatif latar belakang diwarnai zat warna asam, sedangkan 

bakteri diwarnai dengan zat warna alkali. Kapsel tidak menyerap warna sehingga 

terlihat sebagai lapisan tembus-terang dengan latar belakang yang berwarna. 

• Pewarnaan Spora 

◦ Spora pada bakteri struktur tahan panas dan bahan kimia. 

◦ Spora dibentuk oleh bakteri pada saat keadaan/ lingkungan tidak menguntungkan. 

◦ Bacillus, Clostridium. 

◦ Lapisan luar spora penahan yang baik terhadap bahan kimia, sehingga spora sukar 

diwarnai. 

◦ Spora bakteri diwarnai dengan cara dipanaskan. 

◦ Pemanasan menyebabkan lapisan luar spora mengembang, sehingga zat warna dapat 

masuk. 

• Pewarnaan Flagela 

◦ Flagela tipis dan panjang sukar dilihat di bawah mikroskop cahaya. 

◦ Flagela pada bakteri sebagai alat gerak. 

◦ Pewarnaan menggunakan mordant untuk membengkakkan flagela. 

• Pewarnaan Badan Inklusi 

◦ Beberapa bakteri mensintesis badan inklusi atau granula yang disimpan dalam 

sitoplasma. 


◦ Granula cadangan bahan makanan dan merupakan sumber karbon dan energi 

yang siap pakai. 

◦ Dalam sel bakteri badan inklusi berupa granula metakromatik, asam poli-betahidroksibutirat, 

pati dan glikogen. 

PEWARNAAN DIFERENSIAL 

• Pewarnaan Gram 

◦ Dilakukan pertama kali oleh Christian Gram. 

◦ Paling banyak digunakan di laboratorium. 

◦ Untuk memisahkan bakteri menjadi kelompok Gram-positif dan Gram-negatif. 

◦ Bakteri Gram-positif berwarna ungu disebabkan kompleks zat warna kristal violetiodium 

tetap bertahan walaupun sudah diberi larutan pemucat. 

◦ Bakteri Gram-negatif berwarna merah karena kompleks tersebut larut sewaktu 

pemberian larutan pemucat dan menjadi warna merah. 

◦ Memberikan hasil baik bila digunakan biakan segar berusia 24-48 jam. 

◦ Biakan segar dinding sel belum mengalami kerusakan. 

◦ Biakan tua dinding sel sudah mulai mengalami kerusakan zat warna dapat 

keluar saat diberikan larutan. 

Gram-positif 

Gram-negatif 

Kristal violet Ungu Ungu 

Larutan mordant 

(lugol) 

Larutan pemucat 

(aseton, alkohol) 

Ungu 

Ungu 

Ungu 

Tidak 

berwarna 

Safranin Ungu Merah 


◦ Perbedaan pada tahapan pewarnaan Gram disebabkan oleh : 

• Perbedaan struktur dinding sel bakteri Gram-positif dan Gram-negatif 

◦ Bakteri Gram-positif : dinding sel mengandung peptidoglikan. 

◦ Bakteri Gram-negatif : dinding sel mengandung lipida. 

◦ Pada bakteri Gram-negatif, lipida akan larut saat diberikan larutan pemucat (aseton, 

alkohol). 

◦ Kompleks kristal violet-iodium yang terbentuk pada dinding sel juga ikut larut. 

◦ Safranin. Pada bakteri Gram-negatif, penambahan safranin menyebabkan sel bakteri 

berwarna merah. 

◦ Fungsi safranin sebagai pembeda (kontras) terhadap warna kristal violet-iodium. 

◦ Larutan mordant meningkatkan afinitas pengikatan zat warna oleh bakteri 

sehingga pengikatan zat warna oleh bakteri menjadi lebih kuat. 

◦ Setelah penambahan larutan mordant zat warna lebih sulit dilarutkan sehingga zat 

warna akan lebih jelas terlihat. 

◦ Larutan mordant lugol. 

◦ Tanpa penambahan larutan lugol zat warna kristal violet-iodium akan larut 

sewaktu penambahan larutan pemucat, sehingga bakteri Gram-positif tidak akan 

berwarna ungu. 

TABEL PEWARNAAN DIFERENSIAL (pewarnaan Gram) 

No Bakteri Gram-positif Bakteri Gram-negatif 

1 Sensitif terhadap penisilin Sensitif terhadap streptomisin 

2 Resisten terhadap alkali;tidak larut 

oleh 1% KOH 

Sensitif terhadap alkali;larut oleh 

1% KOH 

3 Biasanya coccus atau basil 

pembentuk spora 

Biasanya basil bukan pembentuk 

spora 

4 Dapat bersifat tahan asam Biasanya tidak pernah tahan 

asam 


• Pewarnaan Ziehl-Neelsen 

◦ Untuk memisahkan bakteri menjadi kelompok tahan asam dan tidak tahan asam. 

TABEL PEWARNAAN DIFERENSIAL (pewarnaan Ziehl-Neelsen) 

Tahan Asam 

Tidak Tahan Asam 

Karbol fuksin Merah Merah 

Larutan pemucat 

( mengandung asam 

dan alkohol) 

Merah 

Tidak berwarna/pucat 

Biru metilen Merah Biru 

◦ Zat warna pertama karbol fuksin. 

◦ Pada bakteri yang tidak tahan asam, setelah diberi larutan pemucat karbol fuksin 

akan melarut dengan cepat sel bakteri tidak berwarna. 

◦ Setelah penambahan zat warna kedua (biru metilen) bakteri tidak tahan asam 

berwarna biru. 

◦ Mycobacterium dan Nocardia bakteri tahan asam. 

◦ Memiliki keistimewaan karena dinding sel mengandung lipida yang terlihat sebagai 

lapisan lilin. 

◦ Kandungan lipida mencapai 60% dari berat dinding sel sukar diwarnai karena 

zat warna tidak bisa menembus lapisan lilin. 

◦ Oleh karena itu, digunakan pemanasan sehingga zat warna dapat masuk ke dalam sel 

bakteri yang mengandung lipida. 


BAB V 

UJI IDENTIFIKASI BAKTERI 

 

 

 

 

Media untuk uji identifikasi bakteri 

– Endo Agar 

– Brilliant Green Agar 

– Mac Conkey Agar 

– China-Blue Lactose Agar 

– Manitol Salt Agar 

– Agar Darah 

– Litmus Milk 

Media selektif : mengandung paling sedikit 1 bahan yg menghambat perkembangan bakteri yg 

tidak diinginkan dan membolehkan perkembangbiakkan bakteri tertentu yg ingin diisolasi. 

Contoh : antibiotika (streptomycin, penisilin), kristal violet dsb. 

Media diferensial : berbagai kelompok bakteri dapat tumbuh pada media ini. 

Kelompok bakteri dapat dibedakan berdasarkan perubahan pada media biakan atau penampilan 

koloninya. 

ENDO AGAR 

Mengandung : laktosa, Na-sulfit 

Sifat pertumbuhan koloni : 

◦ Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa terlihat sebagai koloni yang tembus 

terang, tidak berwarna dan dikelilingi oleh media yang berwarna merah muda. 

◦ Bakteri yang memfermentasikan laktosa terlihat sebagai koloni yang berwarna 

merah metalik dan dikelilingi oleh media yang berwarna kemerahan. 


TABEL ENDO AGAR 

Koloni 

Bakteri 

Tidak berwarna, bening 

Laktose negatif 

(Salmonella, Shigella) 

Merah metalik 

Laktose positif (E.coli) 

Merah muda Enterobacter, Klebsiella, 

Citrobacter 

BRILLIANT GREEN AGAR 

Mengandung gula laktosa dan sukrosa. 

Zat warna brilliant green menghambat pertumbuhan E. coli, Proteus dan Pseudomonas. 

Media ini banyak digunakan untuk isolasi dan identifikasi Salmonella dari tinja dan bahan 

makanan. 

Indikator : merah fenol merah (basa) , kuning (asam). 

Sifat pertumbuhan koloni : 

• Salmonella Koloni berwarna merah muda dikelilingi oleh media berwarna merah. 

• Proteus Akan terlihat sebagai koloni merah tanpa penyebaran koloni. 

• Pseudomonas Koloni kecil berwarna merah dengan permukaan yang menjorok ke 

dalam. 

• Bakteri yang memfermentasikan laktosa atau sukrosa Pertumbuhan kelompok 

bakteri ini juga dihambat. Akan tampak sebagai koloni hijau-kuning dikelilingi oleh 

media yang berwarna hijau-kuning. 


MAC CONKEY AGAR 

Mengandung laktosa, garam empedu. 

Media ini menghambat pertumbuhan bakteri Gram-positif. 

Koloni dari bakteri Gram-negatif yang memfermentasikan laktosa berwarna merah bata dan 

dapat dikelilingi oleh endapan garam empedu. 

Endapan garam empedu karena penguraian laktosa menjadi asam yang akan bereaksi 

dengan garam empedu. 

Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat patogen 

memperlihatkan perubahan pada media. Warna koloni = warna media. 

tidak 

TABEL MAC CONKEY AGAR 

Serupa media 

Koloni 

Bakteri 

Salmonella, Shigella 

Merah, dikelilingi oleh 

zona keruh 

Merah muda 

E. coli 

Enterobacter, Klebsiella 

Kecil dan tidak terang 

tembus 

Enterococcus, 

Staphylococcus 

CHINA-BLUE LACTOSE AGAR 

Untuk membedakan bakteri yang memfermentasikan dan tidak memfermentasikan 

laktosa. 

Tidak ada bahan yang menghambat pertumbuhan bakteri. 

Bakteri Gram-positif dan Gram-negatif dapat tumbuh pada media ini. 

Penguraian laktosa menjadi asam akan terlihat karena adanya indikator china blue 

sehingga warna akan menjadi biru tua. 


TABEL CHINA-BLUE LACTOSE AGAR 

Koloni 

Bakteri 

Biru tua dikelilingi oleh zona biru 

E. coli 

Putih, kadang-kadang dikelilingi 

zona bening 

Laktose-negatif 

Biru hijau dan tidak terang tembus 

Staphylococcus 

Biru muda dan tidak terang tembus 

Enterococcus 

MANITOL SALT AGAR 

Mengandung NaCl 7.5%, manitol. 

Digunakan untuk membedakan Staphylococcus yang bersifat patogen dan yang tidak 

patogen. 

Indikator untuk melihat adanya pembentukan asam merah fenol. 

Zona warna merah disebabkan oleh manitol yang tidak terfermentasikan. 

Zona warna kuning disebabkan oleh fermentasi manitol disertai pembentukan asam. 

◦ Misal : 

• S. aureus membentuk zona kuning patogen. 

• S. epidermidis membentuk zona merah tidak patogen. 

AGAR DARAH 

Untuk menumbuhkan bakteri yang sulit untuk dibiakkan dan untuk membedakan kelompok 

bakteri yang melisis atau tidak melisiskan butir darah merah. 

Mengandung 5% darah domba. 

Lisis butir darah merah terlihat sebagai wilayah jernih di sekitar koloni. 

Jenis-jenis hemolisis : 

o Beta-hemolisis : lisis sempurna, wilayah benar-benar jernih. 

o Alpha-hemolisis : proses lisis tidak sempurna, media berwarna kehijauan. 


o 

o 

Gamma-hemolisis : bakteri tidak mampu melisiskan butir darah merah dan tidak 

menyebabkan perubahan nyata pada media. 

Proses hemolisis disebabkan oleh enzim yang dilepaskan bakteri. 

LITMUS MILK 

Mengandung skim milk dan indikator litmus. 

Reaksi yang terjadi : 

o Asam : Media berubah warna menjadi merah muda. 

o Basa : Media berubah warna menjadi biru atau ungu. 

o Reduksi : Media berubah warna menjadi putih. 

o Koagulasi : Media akan terlihat padat karena koagulasi protein pada keadaan asam. 

o Peptonisasi : Media berubah warna menjadi biru. 

o Pembentukan Gas : Terjadi penguraian laktosa menjadi asam dan gas. 

Contoh media uji identifikasi bakteri 

Isolasi dan identifikasi mikroorganisme penyebab penyakit ataupun keracunan 

harus dilaksanakan dengan cepat dan tepat sehingga pengobatan dapat diberikan 

sedini mungkin. Morfologi mikroorganisme seperti bentuk, ukuran dan penataan 

belum cukup untuk melakukan identifikasi suatu mikroorganisme. Oleh karena itu, 

diperlukan teknik lain dalam uji identifikasi mikroorganisme, misalnya sifat biakan 


dan uji biokimia. Mikroorganisme yang akan diisolasi berasal dari biakan murni. 

Setelah biakan murni diperoleh, serangkaian uji dilakukan untuk memperoleh sifat 

biokimiawi mikroorganisme. 

Acuan yang digunakan dalam identifikasi bakteri pada saat ini adalah 

Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Identifikasi Bergey’s mendasarkan pada 

morfologi, sifat faal dan sifat biokimiawi bakteri. Adapun tahapan dalam isolasi dan 

identifikasi bakteri dari suatu suspensi sebagai berikut : 

1. Pembiakan ; untuk mengetahui sifat biakan. Suspensi bakteri digoreskan pada 

agar lempengan, agar miring atau media cair. Koloni yang terbentuk harus 

diperhatikan untuk mengetahui sifat pertumbuhan bakteri pada biakan. 

2. Pewarnaan 

Pewarnaan Gram dibuat untuk mengetahui sifat Gram serta morfologi bakteri. 

Jika diperoleh suatu bakteri berbentuk batang Gram-positif, harus ditentukan 

ada dan tidak adanya endospora serta letaknya. Bakteri berbentuk batang 

Gram-negatif jarang menghasilkan spora. Jika bakteri yang ditemukan 

berbentuk batang, Gram-positif dan tidak membentuk spora, maka perlu 

dilakukan pewarnaan Ziehl-Neelsen. Apabila diperlukan, pewarnaan khusus 

dapat dilakukan. 

3. Uji Biokimia 

Setelah diperoleh koloni yang terpisah pada biakan, dapat dilakukan uji 

biokimia. Uji biokimia memerlukan berbagai media, maka perlu dibuat biakan 

harian (working culture) dari koloni terpisah tersebut. 


Penggunaan zat hara pada media (zat pati, lemak, protein, asam nukleat, asam 

amino, sakarida) tergantung aktivitas metabolisme bakteri. Hasil sampingan dari 

metabolisme tersebut dapat digunakan untuk identifikasi bakteri. 

1. Uji Fermentasi Karbohidrat 

 

Hasil akhir fermentasi karbohidrat ditentukan oleh sifat bakteri, media 

biakan yang digunakan, serta faktor lingkungan antara lain suhu dan pH. 

Media fermentasi harus mengandung senyawa yang dapat dioksidasikan 

dan difermentasikan oleh bakteri. Pembentukan asam hasil fermentasi dapat 

diketahui dengan cara pemberian indikator ke dalam media. 

 

Media : Kaldu karbohidrat (glukosa, laktosa, manitol, maltosa dan sukrosa). 

Media digunakan untuk uji pembentukan asam dan gas hasil fermentasi. 

Pembentukan gas dapat ditentukan dengan menggunakan tabung Smith 

atau Durham. 

 

Tabung Smith digunakan bila jumlah dan macam gas yang dihasilkan harus 

ditentukan. 

 

Tabung Durham digunakan bila jumlah dan macam gas yang dihasilkan 

tidak perlu diketahui. Bila terbentuk gas, gas masuk ke dalam tabung 

Durham dan mendesak cairan dalam tabung ini; gas ini terlihat sebagai 

gelembung udara yang terperangkap dalam tabung Durham. 

 

Asam hasil fermentasi menyebabkan penurunan pH. Indikator yang 

digunakan : merah fenol dan bromcresol purple. Pembentukan asam 

ditandai oleh perubahan warna menjadi kuning. 


2. Uji Metil Merah 

 

Uji metil merah sangat berguna dalam identifikasi kelompok bakteri yang 

menempati saluran pencernaan. 

 

Pada uji fermentasi menggunakan tabung Durham, hasil produksi 

fermentasi tidak diketahui. 

 

Uji metil merah digunakan untuk menentukan adanya fermentasi asam 

campuran dengan menggunakan media : MR-VP (Methyl Red-Voges 

Proskauer). 

 

Fermentasi asam campuran ditentukan dengan menumbuhkan bakteri dalam 

kaldu yang mengandung glukosa dan menambahkan indikator metil merah 

ke dalam kaldu setelah masa inkubasi. Indikator berwarna merah pada pH 

4.4 dan berwarna kuning pada pH 6.2. 

 

Bila terjadi fermentasi asam campuran kaldu biakan akan tetap berwarna 

merah karena terjadi penurunan pH pada kaldu biakan. Bila tidak terjadi 

fermentasi asam campuran maka kaldu biakan akan menjadi berwarna 

kuning. 

3. Uji Voges-Proskauer 

 

Uji ini digunakan untuk identifikasi bakteri yang memfermentasikan 

karbohidrat menjadi 2,3-butanadiol. 

Asetoin (asetilmetilkarbinol) adalah senyawa pendahulu dari 2,3- 

butanadiol. 


Penambahan KOH dan alphanaphtol dapat menentukan adanya asetoin. 

Pada penambahan KOH, adanya asetoin ditunjukkan oleh perubahan warna 

kaldu menjadi merah muda. Perubahan warna ini diperjelas dengan 

penambahan larutan alphanaphtol. 

 

Media yang digunakan : MR-VP. 

4. Respirasi Karbohidrat 

Bakteri menggunakan glukosa sebagai sumber energi dengan 

mengoksidasikannya menjadi piruvat melalui glikolisis. Piruvat masuk ke dalam 

siklus Krebs. Dalam siklus Krebs, terjadi oksidasi menghasilkan proton dan 

elektron. Proton dan elektron masuk ke dalam sistem transport elektron untuk 

menghasilkan ATP. Proton dan elektron akan ditangkap oleh akseptor elektron, 

misalnya oksigen atau nitrat. Bila akseptor elektron terakhir berupa oksigen, 

prosesnya disebut respirasi aerobik. Bila akseptor elektron terakhir berupa 

nitrat atau molekul inorganik lainnya, prosesnya disebut respirasi anaerobik. 

a. Uji Oksidase 

o Uji ini berguna untuk menentukan adanya oksidase sitokrom yang 

ditemukan pada bakteri tertentu. 

o Uji ini berguna dalam identifikasi bakteri patogen seperti Neisseria 

gonorrhoea dan Pseudomonas aeruginosa. 

o Bila koloni bakteri yang bersifat oksidase-positif diberi reagen oksidase 

(dimetil-p-fenillendiamin oksalat), maka warna koloni berubah menjadi 

hitam. Perubahan warna ini disebabkan oleh oksidase sitokrom yang 


mengoksidasi larutan reagen. Bila tidak terjadi proses oksidasi, misalnya 

terjadi reaksi reduksi, tidak akan terjadi perubahan warna pada koloni. 

b. Uji Katalase 

o Pada bakteri berbentuk coccus, uji katalase berguna untuk membedakan 

Staphylococcus dan Streptococcus. Kelompok Staphylococcus bersifat 

katalase-positif, sedangkan kelompok Streptococcus bersifat katalasenegatif. 

o Uji katalase menggunakan larutan H 2 O 2 . Pada bakteri bersifat katalasepositif 

terlihat pembentukan gelembung udara sekitar koloni. Reaksi : 

H 2O2 

H 2O 

1/ 

2O2 

Katalase Gelembung O 2 

o H 2 O 2 bersifat toksik terhadap sel karena menginaktivasikan enzim dalam 

sel. 

o H 2 O 2 terbentuk sewaktu metabolisme aerob, sehingga bakteri yang tumbuh 

pada lingkungan aerob harus menguraikan zat toksik tersebut. 

c. Uji Reduksi Nitrat 

o Nitrat digunakan oleh beberapa bakteri sebagai akseptor elektron terakhir. 

o Nitrat (NO - 3 ) direduksi menjadi nitrit (NO - 2 ) kemudian menjadi N 2 . 

o Kemampuan mereduksikan nitrat digunakan sebagai ciri dalam identifikasi 

bakteri. E. coli mereduksi nitrat menjadi nitrit, sedangkan P. aeruginosa 

mereduksi mereduksi nitrat hingga menjadi N 2 . 


o Uji reduksi nitrat menggunakan kaldu nutrien yang mengandung KNO 3 dan 

tabung Durham. Perhatikan apakah terbentuk gas pada tabung serta nitrit 

pada media biakan. 

o Gas yang terperangkap dalam tabung Durham merupakan campuran gas N 2 

dan CO 2 . 

o Gas N 2 berasal dari penguraian sempurna nitrat, sedangkan CO 2 berasal dari 

siklus Krebs. 

o Penambahan asam sulfamat dalam media biakan yang mengandung nitrit 

akan menyebabkan pembentukan gelembung gas (N 2 ) sebagai hasil reduksi 

(NO - 2 ) menjadi N 2 . 

5. Uji Indol 

 

Gugus indol merupakan bagian dari asam amino triptofan. Dalam media 

biakan, indol menumpuk sebagai produk buangan, sedangkan bagian lain 

dari molekul triptofan digunakan untuk memenuhi kebutuhan zat hara 

bakteri. 

 

Penumpukan indol dalam media biakan dapat diketahui dengan 

penambahan reagens (Kovacs, Gore, Ehrlich dan Ehrlich-Bohme) yang 

mengandung para-dimetil-aminobenzaldehida. Reagens akan bereaksi 

dengan indol dan menghasilkan senyawa yang tidak larut dalam air dan 

berwarna merah pada permukaan media biakan. 

 

Media yang digunakan bersifat semipadat, oleh karena itu dapat digunakan 

juga untuk melihat pergerakan bakteri. Jika bakteri bergerak akan terlihat 

pertumbuhan di sekitar tusukan dan juga pada permukaan media. 


6. Uji IMViC 

 

 

Uji untuk membedakan Enterobacter aerogenes dan E. coli. 

Uji IMViC terdiri dari Uji Indol-Metil Merah-Voges Proskauer-Citrat. 

TABEL UJI IMViC 

I M Vi C 

E. coli + + - - 

A. aerogenes - - + + 

7. Uji Hidrogen Sulfida 

Asam amino sistein dan metionin dihasilkan saat protein dihidrolisis untuk 

memenuhi kebutuhan zat hara bakteri. 

Sistein dan metionin mengandung sulfur. 

Bakteri yang menghasilkan desulfurase sewaktu dibiakkan dalam media yang 

kaya dengan asam amino yang mengandung sulfur akan membentuk H 2 S. Fe ++ 

dalam biakan bereaksi dengan H 2 S dan menghasilkan senyawa FeS yang 

berwarna hitam dan tidak larut dalam air. 

8. Uji Dekarboksilase Lisin 

Dekarboksilasi merupakan proses penguraian gugus karboksil dari suatu 

molekul organik. 

Proses dekarboksilasi asam amino menghasilkan CO 2 . 


Proses dekarboksilasi lisin dapat diketahui dengan menumbuhkan bakteri 

dalam biakan yang mengandung lisin, karbohidrat yang dapat difermentasikan 

(glukosa) dan indikator pH untuk melihat perubahan pH. Indikator yang 

digunakan adalah brom cresol purple (BCP). 

Asam yang dihasilkan dalam proses fermentasi glukosa akan menurunkan pH 

media biakan dan menyebabkan perubahan warna dari ungu menjadi kuning. 

Dalam suasana asam, proses dekarboksilasi lisin dapat berlangsung sehingga 

terjadi pembentukan amin yang menetralisasi suasana asam. 

Proses netralisasi asam ini terlihat sebagai perubahan warna dari kuning 

menjadi ungu seperti sebelumnya. 

Perubahan warna ungu ini menunjukkan bahwa lisin mengalami 

dekarboksilasi. 

Uji dekarboksilasi lisin merupakan salah satu uji yang digunakan dalam 

pencirian bakteri, terutama yang menempati saluran pencernaan. 

9. Uji Deaminase Fenilalanin 

Deaminase mengkatalisasi pemindahan gugus amino (NH 2 ) dari asam amino 

dan molekul lainnya yang mengandung –NH. 

Asam organik yang dihasilkan dapat digunakan bakteri untuk biosintesis. 

Proses deaminasi menetralisasi amin yang menghambat pertumbuhan. 

Uji deaminasi fenilalanin dapat digunakan dalam identifikasi bakteri saluran 

pencernaan. 


Proses deaminasi fenilalanin menghasilkan asam fenilpiruvat. Reaksi asam 

fenilpiruvat dengan ferri klorida (FeCl 3 ) menghasilkan senyawa berwarna 

hijau. 

Aktivitas enzim deaminase fenilalanin ditentukan dengan cara menumbuhkan 

bakteri dalam media biakan yang mengandung fenilalanin dan menambahkan 

beberapa tetes larutan FeCl 3 . Warna hijau setelah penambahan reagens 

menunjukkan bahwa fenilalanin telah dideaminasikan. 

10. Uji Sitrat 

Uji sitrat digunakan untuk melihat kemampuan bakteri menggunakan sitrat 

sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi. 

Digunakan media sitrat-Koser (cair) atau sitrat-Simmon (padat). 

Sitrat-Simmon mengandung Na sitrat (sumber karbon), NH + 4 sebagai sumber 

N dan biru bromtimol sebagai indikator. 

Pada media sitrat-Koser, tidak terkandung indikator. 

Bila bakteri mampu menggunakan sitrat yang terkandung pada media sitrat- 

Simmon, maka asam akan dihilangkan dari media biakan, terjadi peningkatan 

pH dan mengubah warna media dari hijau menjadi biru. 

Pada media sitrat-Koser, kemampuan menggunakan sitrat ditunjukkan oleh 

kekeruhan yang menandakan adanya pertumbuhan. 


BAB VI 

UJI MIKROORGANISME KUANTITATIF 

Uji Kuantitatif Bakteri 

Untuk menentukan jumlah bakteri dapat digunakan beberapa cara, antara lain : 

 

Jumlah bakteri secara keseluruhan (total cell count); dihitung semua bakteri 

baik yang hidup maupun yang mati. 

 

Jumlah bakteri yang hidup (viable count); dihitung bakteri yang hidup saja. 

A. Perhitungan Jumlah Bakteri secara Keseluruhan 

a. Menghitung langsung secara mikroskopik 

Digunakan object glass khusus (Petroff-Hauser) berbentuk persegi. Jumlah 

cairan yang terdapat antara object glass dan kaca penutup memiliki volume 

tertentu, sehingga satuan isi yang terdapat dalam persegi juga tertentu. 

Hanya cairan yang mengandung bakteri dalam jumlah tinggi yang dapat 

menggunakan cara ini. Perhitungan langsung dengan menggunakan mata 

atau alat bantu hitung. 

b. Menghitung dengan cara kekeruhan 

Cara ini menggunakan spektrofotometer atau nefelometer. Cahaya yang 

diabsorbsi ~ banyaknya sel bakteri. 


B. Perhitungan Jumlah Bakteri Hidup 

1. standard plate count/hitungan cawan/angka lempeng total. 

 

Setiap satu sel bakteri dalam suspensi diasumsikan akan tumbuh menjadi satu 

koloni setelah diinkubasikan dalam media dan lingkungan yang sesuai. 

 

Metode hitungan cawan merupakan cara yang paling sensitif untuk 

menghitung jumlah bakteri karena : 

1. Hanya sel bakteri yang masih hidup yang dihitung. 

2. Beberapa jenis bakteri dapat dihitung sekaligus. 

3. Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi bakteri karena koloni 

yang terbentuk mungkin berasal dari satu sel bakteri dengan 

penampakan pertumbuhan spesifik. 

Kelemahan metode hitungan cawan : 

1. Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel bakteri yang 

sebenarnya karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk 

satu koloni. 

2. Media dan kondisi yang berbeda menghasilkan nilai yang berbeda. 

3. Bakteri yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada media padat dan 

membentuk koloni yang jelas. 

4. Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi beberapa hari sehingga 

pertumbuhan koloni dapat dihitung. 


Metode hitungan cawan : 

Metode Tuang (Pour Plate) 

Cara : 

1. Dari pengenceran yang dikehendaki, sebanyak 1 ml dipipet ke dalam cawan 

petri. 

2. Kemudian ke dalam cawan petri tersebut, masukkan agar cair yang telah 

didinginkan hingga 50 0 C ± 15 ml. 

3. Cawan petri digerakkan dengan gerakan melingkar untuk menyebarkan sel-sel 

bakteri secara merata. 

4. Setelah agar memadat, cawan petri tersebut diinkubasi dalam inkubator dengan 

posisi terbalik. 

5. Koloni yang terbentuk dihitung. 

Metode Permukaan (Surface/Pour Plate) 

Cara : 

1. Agar steril dituang ke dalam cawan petri steril, biarkan membeku. 

2. Setelah membeku sempurna, kemudian sebanyak 0,1 ml sampel yang telah 

diencerkan dipipet pada permukaan agar tersebut, ratakan. 

3. Inkubasi. 

4. Hitung koloni yang terbentuk. 


Cara menghitung koloni : 

Contoh. Penetapan jumlah bakteri dalam susu. 

Pengenceran awal 1:10 (=10 -1 ) dibuat dengan cara mengencerkan 1 ml susu 

ke dalam 9 ml larutan pengencer, dilanjutkan dengan pengenceran yang 

lebih tinggi, misalnya hingga 10 -5 atau 10 -6 , tergantung pada mutu susu. 

Semakin tinggi jumlah bakteri yang terdapat di dalam susu, semakin tinggi 

pengenceran yang harus dilakukan. 

Jika setelah inkubasi misal didapat 60 dan 64 koloni masing-masing pada 

cawan duplo yang mengandung pengenceran 10 -4 , maka jumlah koloni 

dapat dihitung sebagai berikut : 

Faktor pengenceran (fp) 

= Pengenceran x jumlah yang ditumbuhkan. 

= 10 -4 x 1.0 

= 10 -4 

Jumlah koloni 

= Jumlah koloni x 1/fp per cawan 

= (60+64)/2 x 1/10 -4 

= 6.2 x 10 5 


Gambar contoh pengenceran 

 

Standar perhitungan (Standard Plate Count) 

Cara menghitung koloni pada cawan adalah sebagai berikut : 

1. Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah 

koloni antara 30 dan 300. Cawan dengan jumlah koloni yang tinggi 

(>300 koloni) sulit untuk dihitung sehingga kemungkinan kesalahan 

perhitungan sangat besar. Pengenceran membantu untuk memperoleh 

perhitungan yang tepat, tetapi pengenceran yang terlalu tinggi akan 

menghasilkan cawan dengan jumlah koloni yang rendah (

Data yang dilaporkan harus mengikuti peraturan sebagai berikut : 

1. Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka, yaitu angka pertama di 

depan koma dan angka kedua di belakang koma. Jika angka yang ketiga sama 

dengan atau lebih besar dari 5, harus dibulatkan satu angka lebih tinggi pada 

angka yang kedua. 

Jumlah koloni per pengenceran 

10 -2 10 -3 10 -4 

Standard 

Plate 

Count 

Ket 

234 28 1 2.3 x 10 4 28 dan 1 300;10300 

* TBUD = Terlalu banyak untuk dihitung 

2. Jika semua pengenceran yang dibuat menghasilkan angka kurang dari 30 

koloni pada cawan petri, hanya jumlah koloni pada pengenceran terendah yang 

dihitung. Hasilnya dilaporkan sebagai kurang dari 30 dikalikan dengan 

besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan 

dalam tanda kurung. 



10 -2 10 -3 10 -4 

Standard 

Plate 

Count 

Ket 

16 1 0 3.0 x 10 6 

(3.6 x 10 6 ) 

Hit. 

pengenceran 

pada 10 -4 

TBUD 325 20 > 3.0 x 10 5 

(3.3 x 10 5 ) 

Hit. 

pengenceran 

pada 10 -3 


4. Jika cawan dari dua tingkat pengenceran menghasilkan koloni dengan jumlah 

antara 30 dan 300, dan perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari 

kedua pengenceran tersebut adalah lebih kecil atau sama dengan 2, tentukan 

rata-rata dari kedua nilai tersebut dengan memperhitungkan pengencerannya. 

Jika perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah lebih besar dari 2, yang 

dilaporkan hanya hasil terkecil. 


10 -2 10 -3 10 -4 

Standard 

Plate 

Count 

Ket 

293 41 4 3.5 x 10 4 Hit. rataratanya 

karena 

41000/29300 

= 1.4 (2) 


5. Jika digunakan dua cawan petri (duplo) per pengenceran, data yang diambil 

harus dari kedua cawan tersebut, tidak boleh diambil salah satu, meskipun 

salah satu dari cawan duplo tersebut tidak memenuhi syarat diantara 30 dan 

300. 


10 -2 10 -3 10 -4 

Standard 

Plate 

Count 

Ket 

175 

16 

1 

1.9 x 10 4 Rata-rata dari 

208 

17 

0 

pengenceran 

10-2 

138 

42 

2 


162 

43 

4 

pengenceran 

10 -2 karena 

perbandingan 

antara 

pengenceran 

10 -3 dan 10 -2 

adalah 2.8 

(>2) 

290 

36 

4 


280 

32 

1 

pengenceran 

10 -2 dan 10 -3 


karena 

perbandingan 

antara kedua 

pengenceran 

adalah 1.2 

(300 

(angka yang 

lain

Uji kualitatif koliform terbagi atas uji penduga, uji penguat, uji lengkap. Uji 

penduga merupakan uji kuantitatif koliform menggunakan metode MPN. 

2. Metode MPN (Most Probable Number) 

 

 

Dikenal dengan metode Jumlah Perkiraan Terdekat. 

Dalam metode MPN digunakan media cair di dalam tabung reaksi, dimana 

perhitungan dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif, yaitu yang 

ditumbuhi oleh bakteri tertentu setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu. 

 

Pengamatan tabung yang positif dilihat dari timbulnya kekeruhan, atau 

terbentuknya gas dalam tabung Durham untuk bakteri pembentuk gas. 

 

 

Pada umumnya untuk setiap pengenceran digunakan tiga atau lima seri tabung. 

Metode MPN biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah bakteri dalam 

sampel yang berbentuk cair, meskipun dapat pula digunakan untuk sampel 

berbentuk padat dengan terlebih dahulu membuat suspensi 1 : 10 dari sampel 

tersebut. 

 

Pengenceran harus lebih tinggi dibandingkan metode hitungan cawan. 

Cara kerja : 

1. Buat seri pengenceran (minimal 3). 

2. Inokulasikan tiap pengenceran pada 3 atau 5 seri tabung media MPN, yaitu 

Lactosa Broth kemudian dilanjutkan dengan media Brilliant Green Lactose 

Bile Broth. 

3. Inkubasi dan diamati hasilnya. 

4. Uji positif jika keruh atau terbentuk gas. 

5. Gas dapat terlihat dari adanya rongga kosong pada tabung Durham. 


6. Sesuaikan dengan tabel MPN. 

7. Hitung jumlah bakteri. 

Rumus : 

Jumlah bakteri = Indeks MPN x 1/Pengenceran tabung yang di tengah. 

o Kombinasi : 3-2-1 

o Nilai MPN dari tabel MPN 3 seri : 1.50 

o MPN Bakteri 

= Indeks MPN x 1/pengenceran tabung yang di tengah 

= 1.50 x 1/10 -3 

= 1.5 x 10 3 

 

Uji Penduga 

1. Buat seri media laktosa cair (Lactosa Broth) dengan suatu takaran air 

tertentu (10 ml, 1 ml, 0.1 ml). 

2. Inkubasi 24 jam, 37 0 C. 

3. Amati terjadinya gas. 

 

Uji Penguat 

1. Dari tabung yang memberi hasil positif timbul gas, ditanam ke dalam 

media agar Endo atau EMB (Eosin Metilen Blue) atau BGLBB (Brilliant 

Green Lactose Bile Broth). 

2. Inkubasi pada suhu 37 0 C selama 18-24 jam. 

3. Amati terdapar E.coli bila : 

o Pada Endo Agar warna merah mengkilap logam 

o Pada EMB warna biru tua mengkilap logam 

o Pada BGLBB gas positif 


Uji Lengkap 

1. Dari koloni yang timbul (positif/meragukan) ditanam ke dalam media 

laktosa dan agar miring. 

2. Inkubasi pada suhu 37 0 C selama 24-48 jam. 

3. Amati pada : 

o Laktosa timbul gas. 

o Koloni khas pada agar miring. 

o Pewarnaan Gram-negatif bentuk batang dan tidak berspora. 

4. Untuk menentukan antara E.coli dengan golongan bentuk E.coli lainnya, 

maka dari pemeriksaan uji lengkap diteruskan uji IMViC. 

3. Metode Membran Filter 

 

Sebanyak 25-100 ml sampel (misal air atau susu) disaring melalui membran 

filter steril dengan pori-pori 0.22 – 0.45 mikron dan diameter sekitar 5 cm. 

 

Membran filter diletakkan diatas agar cawan EMB atau Endo Agar dan 

diinkubasikan pada suhu 35 0 C – 37 0 C. Jumlah koliform dinyatakan dalam 

jumlah koliform per 100 ml sampel. 

Pada EMB : 

1. Koloni koliform fekal diameter 0.5-1.5 mm dan berwarna gelap 

dengan sinar hijau metalik (keemasan). 

2. Koloni koliform non-fekal diameter 1.0-3.0 mm berwarna merah 

muda dan bagian tengah berwarna gelap seperti mata ikan. 


Pada Agar (mengandung laktosa) : 

1. Koloni yang memfermentasikan laktosa (e.g. koliform) membentuk 

warna merah pada bagian atas koloni dan sekelilingnya. 

2. Koloni bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa (e.g. Salmonella 

dan Shigella) akan membentuk koloni yang tidak berwarna. 

Uji Angka Kapang 

1. Media PDA steril yang telah dicairkan dan didinginkan pada temperatur 40ºC 

ditambahkan kloramfenikol sebesar 1ml/L, dan dituang ke dalam piring petri 

hingga membeku. 

2. Sebanyak 1 ml suspensi hasil pengenceran sampel dituang pada permukaan 

media PDA yang telah beku dalam piring petri, yang mengandung 

kloramfenikol, dan diratakan dengan bantuan spreader glass. 

3. Piring petri selanjutnya diinkubasi pada temperatur 20-25ºC selama 3-5 hari. 

Perhitungan jumlah koloni kapang/khamir yang tumbuh pada media dilakukan 

sesuai cara perhitungan angka lempeng total (ALT) pada bakteri. 

Syarat jumlah bakteri dalam suatu sediaan

BAB VII 

DESINFEKTAN 

1817, Joseph Lister menggunakan desinfektan yang mengandung fenol untuk 

mendesinfeksi peralatan bedahnya. Hingga sekarang, fenol digunakan sebagai larutan 

baku penentu kekuatan desinfektan. 

 

Desinfektan adalah zat yang digunakan untuk mencegah atau mengendalikan 

penularan dengan cara membasmi mikroorganisme patogen, apabila digunakan 

pada objek yang tidak hidup/benda mati, misalnya desinfeksi pada alat kesehatan, 

alat bedah dsb. 

 

Antiseptik adalah zat yang mampu membunuh/menghambat pertumbuhan 

mikroorganisme dan digunakan pada jaringan hidup, misalnya kulit, gigi, mata. 

Desinfektan yang ideal : 

1. Cepat membasmi mikroorganisme yang patogen dan potensial termasuk spora. 

2. Penetran yang baik ke dalam bahan organik, misal kapas, karet. 

3. Dapat bercampur dengan bahan-bahan organik, misal sabun, deterjen. 

4. Tidak menjadi inaktif oleh jaringan hidup. 

5. Tidak bersifat korosif. 


Pengendalian = mereduksi jumlah kegiatan suatu mikroorganisme. 

Tujuan pengendalian : 

1. Mencegah transmisi penyakit dan infeksi. 

2. Mencegah pencemaran/pertumbuhan mikroorganisme yang tidak diinginkan. 

3. Mencegah peruraian/pembusukan bahan tertentu oleh mikroorganisme. 

Faktor-faktor yang mempengaruhi potensi desinfektan : 

1. Konsentrasi 

2. Waktu 

3. pH 

4. Suhu 

5. Sifat mikroorganisme 

6. Kehadiran bahan extraneus 

Berdasarkan mekanisme kerja, desinfektan terbagi atas : 

1. Bahan yang merusak membran sel 

oSurface active bahan kationik, bahan anionik, bahan non-ionik. 

oSenyawa fenol fenol dan kresol. 

oAlkohol 

2. Bahan yang mendenaturasi protein 

o Protein merupakan molekul organik yang sangat banyak terdapat di dalam sel. 

Tiap protein memiliki konformasi karakteristik yang diperlukan. Jika terdapat 

bahan yang dapat mengubah konformasi dari protein dengan denaturasi, maka 

akan terjadi pembukaan rantai polipeptida hingga rantai menjadi melipat atau 

memutar tidak beraturan. 


o Contoh bahan kimia yang mendenaturasi protein : 

1. Asam 

2. Alkali 

3. Alkohol 

4. Aseton 

o Asam dan alkali 

• Bahan asam dan alkali menunjukkan daya antibakterinya melalui ion H + 

atau OH - bebas, yaitu melalui molekul yang tidak terdisosiasi. 

• Asam kuat dan alkali kuat mempunyai kandungan desinfektan sebanding 

dengan disosiasinya dalam cairan. 

3. Bahan yang memodifikasi kelompok fungsional dari protein dan asam 

nukleat. 

Bagian katalitik dari enzim menjadi kelompok fungsional khas yang akan 

mengikat substrat dan memulai proses katalisis. Inhibisi kegiatan enzim 

berhasil jika satu atau lebih dari kelompok fungsional diubah atau dirusak. 

Kelompok fungsional penting dari dinding sel, membran sel dan asam nukleat 

adalah peka terhadap inaktivasi. 

a. Logam berat : misal Hg fenil merkuri : untuk membunuh bakteri Grampositif 

dan Gram-negatif, kapang, khamir. Ag AgNO 3 : 

untuk membunuh gonococcus. 


. Bahan pengoksidasi : 

 

Halogen; misal klorin (sebagai desinfektan air), iodin (sebagai 

desinfektan kulit). 

 

Hidrogen peroksida (H 2 O 2 ); merupakan desinfektan yang banyak 

digunakan untuk desinfeksi yang tidak hidup, seperti peralatan bedah 

dan lensa kontak. 

c. Pewarna; beberapa jenis pewarna tidak hanya mewarnai bakteri, tetapi juga 

menghambat pertumbuhannya pada enceran sangat tinggi. Misal : 

Pewarna trifenilmetan (pewarna anilin), derivatnya : hijau berlian, hijau 

malakit, violet kristal. Ketiga derivatnya bersifat selektif terhadap Grampositif. 

Pewarna akridin (disebut juga flavin), misal : proflavina, akriflavina. 

Keduanya bersifat sebagai antiseptik luka. 

Berbeda dengan pewarna anilin, pewarna akridin tidak terpengaruh daya 

antimikrobanya dengan kehadiran serum atau nanah. 

d. Bahan pengalkil; inhibisi yang dihasilkan bahan pengalkil adalah 

irreversible sehingga terjadi modifikasi enzim dan inhibisi kegiatan enzim. 

Misal : 

1. Aldehida ; 

 

Formaldehida; digunakan sebagai pengawet jaringan segar dan bangkai. 

Dalam konsentrasi tinggi merusak semua jenis mikroorganisme, termasuk 


spora. Formaldehida dalam bentuk gas digunakan untuk mendesinfeksi 

ruangan, bahan tekstil dan instrumen. 

 

Glutaraldehida; memiliki kemampuan 10 x dari formaldehida. Digunakan 

sebagai bahan sterilisasi dingin untuk alat bedah. 

2. Etilen oksida; merupakan bahan dalam bentuk gas, untuk sterilisasi materi 

yang rusak karena panas, misalnya peralatan elektronik, kedokteran, biologik 

dan obat. Selain bereaksi dengan protein juga bereaksi dengan ADN dan ARN. 

 

Untuk membandingkan kekuatan desinfektan dalam menghambat pertumbuhan 

bakteri dapat digunakan cakram kertas. 

 

Pada cakram kertas dibasahi dengan desinfektan, kemudian diletakkan pada 

lempengan agar yang telah diinokulasi. 

 

Lempengan agar kemudian dierami selama 48 jam. Jika desinfektan menghambat 

pertumbuhan bakteri, maka akan terlihat daerah jernih sekeliling cakram kertas. 

Luas daerah terang ini menjadi ukuran kekuatan daya kerja desinfektan. 


BAB VIII 

ANTIBIOTIKA 

Antibiotika adalah : 

Senyawa kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme atau senyawa sejenis 

yang seluruhnya atau sebagian diproduksi secara sintesis kimia yang dalam 

konsentrasi rendah dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme lainnya. 

Persyaratan antibiotika : 

1. Dapat merusak atau menghambat mikroorganisme patogen tanpa 

merusak tuan rumah. 

2. Mikroorganisme yang peka terhadapnya tidak menjadi resisten. 

3. Tidak menimbulkan alergi dan efek samping yang tidak diinginkan jika 

digunakan secara berkesinambungan dengan dosis tinggi. 

4. Harus tetap aktif dalam plasma, cairan tubuh atau eksudat. 

5. Larut dalam air dan stabil serta tingkat membunuh atau menghambat 

pertumbuhan mikroorganisme cepat tercapai dan dapat dipertahankan 

untuk waktu yang diperpanjang. 

Mekanisme kerja antibiotika : 

1. Inhibitor dinding sel 

2. Inhibitor membran sel 

3. Inhibitor fungsi ADN 

4. Inhibitor terhadap sintesis protein 


I. Inhibitor Dinding Sel 

 

Dinding sel yang kaku melindungi membran sitoplasma terhadap pengaruh 

tekanan osmotik. 

 

Zat yang merusak dinding sel atau mencegah sintesis polimer dinding pada sel 

yang tumbuh akan mengembangkan sel yang peka terhadap osmosis dan akan 

mati. 

a. Antibiotika ß-laktam 

1. Penicillin 

 

 

Dapat menimbulkan reaksi hipersensitif pada kelompok kecil manusia. 

Nukleus penicillin Asam-6-aminopenisilinat yang merupakan persyaratan 

struktur bagi aktivitas biologis. Efektif terhadap bakteri Gram-positif dan 

Gram-negatif. 

Kekurangan penicillin : 

1. Dapat diinaktivasi oleh pH asam dari cairan lambung. 

2. Dirusak oleh penisilinase, yaitu enzim bakteri yang memecah cincin ß- 

laktam. 

3. Penicillin yang banyak digunakan adalah yang resisten terhadap 

penisilinase, antara lain metisilina, nafsilina, kloksasilina, dikloklasilina, 

oksasilina. 

2. Sefalosporina 

 

Dihasilkan oleh jamur Cephalosporium acremonium. 


Efektif terhadap Gram-positif dan Gram-negatif, mempunyai daya kerja 

hampir sama dengan penicillin semisintetik. 

b. Sikloserina 

 

Antibiotika spektrum luas hanya digunakan terhadap penyakit TBC. 

c. Fosfomisina 

 

Dihasilkan oleh Streptomyces fradiae, merupakan antibiotika spektrum luas 

sebagai inhibitor terhadap sintesis peptidoglikan dan kegiatan enzim. 

d. Vankomisin 

 

Antibiotika spektrum sempit, dihasilkan oleh Streptomyces orientalis. Efektif 

terhadap banyak spesies dan Gram-positif, bekerja dengan menghambat 

biosintesis peptidoglikan. 

II. Inhibitor Membran Sel 

 

Membran sel mempunyai peranan penting di dalam sel, yaitu merupakan 

pembatas osmotik terhadap difusi bebas antara lingkungan dalam dan luar. 

 

Membran sel berdaya terhadap konsentrasi metabolit dan nutrien di dalam sel 

dan merupakan bagian untuk pernapasan dan beberapa kegiatan biosintesis. 

 

Beberapa jenis antibiotika menunjukkan kemampuan menurunkan satu atau 

lebih dari fungsi membran di atas dan hal tersebut mengakibatkan keburukan 

bagi kehidupan sel. 


a. Polimiksina 

1. Terdiri atas polimiksina A,B,C,D dan E. 

2. Polimiksina B yang banyak digunakan sebagai obat. 

3. Antibiotika ini mengikat permukaan luar dari membran sel serta 

mengubah struktur dan kandungan osmosis dari sel. 

4. Dihasilkan oleh Bacillus polymixa. 

5. Efektif terhadap Gram-positif dan Gram-negatif. 

b. Antibiotika poliena 

Merupakan antibiotika antifungal, yaitu : 

1. Nistatin; dihasilkan oleh Streptomyces noursei; tidak digunakan dalam 

bentuk injeksi karena toksik. Digunakan di kulit untuk 

menyembuhkan penyakit karena Candida. 

2. Amfoterisina; umumnya digunakan amfoterisina-B yang dihasilkan oleh 

Streptomyces niveus, digunakan terhadap penyakit yang diakibatkan 

oleh fungi. 

III. Inhibitor Fungsi ADN 

 

 

Fungsi ADN yaitu duplikasi dan replikasi (sandi genetik). 

Beberapa jenis antibiotika secara khas dapat mengganggu struktur dan fungsi 

ADN, tetapi sedikit yang digunakan sebagai obat karena toksisitasnya. 


Tiap bahan yang dapat mengganggu struktur dan fungsi ADN, maka mampu 

menimbulkan efek yang mendalam dalam semua fase pertumbuhan dan 

mikroorganisme yang bersangkutan. 

Novobiosina 

 

Efektif terhadap Gram-positif, dihasilkan oleh Streptomyces niveus, yang 

memiliki daya kerja menghambat replikasi DNA. 

IV. Inhibitor Terhadap Sintesis Protein 

Sintesis protein merupakan hasil akhir dari 2 proses, yaitu : 

1. Transkripsi : sintesis RNA yang tergantung pada DNA. 

2. Translasi : Sintesis protein yang tergantung pada RNA. 

 

Antibiotika yang menghambat salah satu dari proses di bawah ini, berarti 

menghambat sintesis protein. 

a. Inhibitor dari transkripsi 

1. Aktinomisin; dihasilkan oleh Streptomyces, efektif menghambat sintesis 

ADN dan ARN, bersifat toksik. 

2. Rifampin; merupakan derivat semisintetik dari Streptomyces mediterranei, 

yang paling berguna dari kelompok ini adalah rifampisin. Efektif terhadap 

Gram-positif dan Mycobacterium seperti penyebab penyakit TBC dan lepra. 

Rifampisin menghambat sintesis protein secara selektif menginaktivasi 

polimerase ADN. 


. Inhibitor dari translasi 

1. Streptomisin 

Dihasilkan oleh Streptomyces griseus, efektif terhadap Gram-negatif dan M. 

tuberculosis. 

 

Streptomisin digunakan terhadap mikroorganisme yang tidak mempan 

terhadap penicillin. 

2. Tetrasiklin 

 

Merupakan antibiotika spektrum luas, efektif terhadap Gram-positif dan Gramnegatif, 

mikoplasma, riketsia dan klamidia. 

Kelompok tetrasiklin : 

1. Oksitetrasiklin 

2. Khlortetrasiklin 

3. Dimetilkhlortetrasiklin 

4. Doksisiklin 

5. Minosiklin 

 

Daya kerja tetrasiklin lebih luas dibandingkan penicillin, streptomisin dan 

kloramfenikol. 

 

Tetrasiklin menghambat hanya mikroorganisme yang berkembang biak secara 

cepat dan bersifat bakteriostatik. 

 

Penggunaan tetrasiklin terutama terhadap mikroorganisme yang resisten 

terhadap ampicillin dan sefalosporina. 


3. Nitrofuran 

 

Misal : Nitrofurantoin, efektif terhadap infeksi saluran genitourinaria pada 

penderita yang tidak tahan terhadap sulfonamida. 

4. Kloramfenikol 

 

Dihasilkan oleh Streptomyces venezuelae, bersifat bakteriostatik terhadap 

Gram-positif dan Gram-negatif, riketsia dan klamidia. 

 

Menghambat pertumbuhan bakteri dengan mengganggu sintesis protein. 

5. Eritromisin 

 

 

 

Bersifat bakteriostatik dan dalam kadar tinggi sebagai bakterisida. 

Dihasilkan oleh Streptomyces erytherus. 

Efektif untuk infeksi pneumonia, atau diberikan pada penderita yang alergi 

terhadap penicillin dan yang menderita infeksi akibat streptococcus dan 

pneumococcus. 

6. Linkomisin dan klindamisin 

 

 

Dihasilkan oleh Streptomyces linkolensis. 

Klindamisin adalah derivat khloro dari linkomisin yang dibuat secara 

semisintesis. Spektrum kerjanya sama dengan eritromisin walaupun secara 

kimia tidak ada hubungannya. Efektif terhadap streptococcus, pneumococcus 

dan staphylococcus. 


7. Griseofulvin 

 

Dihasilkan oleh Penicillium griseofulvum, merupakan fungistatik dan 

mengganggu proses tubulin menjadi mikrotubula griseofulvin mengikat 

protein di dalam perakitan tubulina. Jadi proses sel yang terkandung pada 

fungsi mikrotubula seperti pergerakan kromosom selama mitosis akan 

terhambat oleh griseofulvin. 


BAB IX 

UJI SENSITIVITAS 

1. Desinfektan 

 

Daya kerja antimikroba (desinfektan) bahan kimia seringkali disetarakan dengan 

fenol. 

 

Kemampuan bahan kimia dibandingkan dengan fenol disebut koefisien fenol. 

Koefisien fenol adalah angka yang menunjukkan ratio/perbandingan dari 

pengenceran tertinggi desinfektan yang diuji dengan pengenceran tertinggi dari 

fenol yang dapat membunuh mikroorganisme penguji dalam 10 menit, tetapi tidak 

bisa membunuh dalam 5 menit. 

 

Bahan kimia yang memiliki koefisien fenol lebih dari 1, mempunyai daya kerja 

antimikroba yang lebih baik dibandingkan dengan fenol. 

 

 

Macam-macam desinfektan antara lain Lysol, Creolin, Denol, Dettol, SOS dll. 

Bila larutan desinfektan uji dengan pengenceran 1 : 250 dapat membunuh populasi 

S. aureus, sedangkan hasil yang sama ditunjukkan oleh fenol pada pengenceran 1 : 

60, maka koefisien fenol sebagai desinfektan uji adalah 250/60 atau 4.2. Hasil ini 

menunjukkan bahwa desinfektan uji 4.2 kali lebih efektif dibandingkan fenol 

dalam membunuh S. aureus secara in vitro. 


Rumus : 

Koefisien fenol (KF) = (a/b + c/d)/2 

Ket : 

a Faktor pengenceran tertinggi larutan uji desinfektan masa kontak 5’. 

b Faktor pengenceran tertinggi larutan baku fenol masa kontak 5’. 

c Faktor pengenceran tertinggi larutan uji desinfektan masa kontak 10’. 

d Faktor pengenceran tertinggi larutan baku fenol masa kontak 10’. 

Contoh : 

Desinfektan 

Waktu 

Pengenceran 

1/50 1/60 1/70 1/80 1/90 1/100 1/110 1/120 1/130 1/140 

Fenol 5’ 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

-(b) 

+ 

+ 

10’ 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

-(d) 

+ 

Lysol 5’ 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

-(a) 

+ 

10’ 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

- 

-(c) 


Kf = (a/b + c/d)/2 

= (130/120 + 140/130)/2 

= 1.080 

Ket : 

Kf > 1 : bahan antimikroba/desinfektan efektif 

Kf < 1 : bahan antimikroba/desinfektan kurang efektif 

Cara kerja : 

1. Baku fenol 5% 

 

Buat pengenceran menggunakan aquadest steril (tiap tabung hanya diperlukan 

5 ml fenol). 

 

Pengenceran dibuat dengan 2 bagian waktu, yaitu 5’ dan 10’ tiap bagian 

waktu terdiri dari 10 tabung pengenceran. 

2. Inokulasi bakteri uji untuk fenol 5%. 

 

Masukkan 0.5 ml biakan bakteri pada masing-masing tabung pengenceran 

dimulai dari tabung pengenceran 5’. 

 

Ketika pertama kali memasukkan bakteri uji pada tabung pengenceran yang 

pertama, waktu dicatat sebagai 0 (nol) menit. Interval waktu antar tabung 

adalah 30 detik. 

Perlakuan sama terhadap pengenceran 10’. 


3. Inokulasi pada media Nutrient Broth 

 

5 menit setelah pengisian tabung untuk waktu 5 menit tersebut, tabung pertama 

dikocok, kemudian isinya diambil satu masa ose dan diinokulasikan ke dalam 

tabung pertama pada media Nutrient Broth. 

Dilanjutkan hingga tabung pengenceran terakhir untuk waktu 5’. 

Perlakuan sama terhadap 10 tabung pengenceran untuk waktu 10’. 

 

 

Inkubasi pada suhu 37 0 C selama 24-48 jam. 

Amati pertumbuhan mikroorganisme. 

2. Antibiotika 

Cara yang umum digunakan untuk mengetahui kekuatan antibiotika adalah uji 

kepekaan (sensitivitas) antibiotika terhadap mikroorganisme patogen penyebab 

penyakit. Adapun cara dibawah ini tidak terbatas pada antibiotika saja, tetapi juga 

agen antimikroba lainnya. 

A. Metode Minimum Inhibitory Concentration (MIC) 

Bahan antimikroba bersifat menghambat bila digunakan dalam konsentrasi 

kecil, dan mematikan mikroorganisme bila digunakan dalam konsentrasi 

tinggi. 

Oleh karena itu, perlu diketahui Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dan 

Minimum Killing Concentration) bahan antimikroba tersebut terhadap 


Dalam uji ini diperlukan suspensi baku dari mikroorganisme patogen yang 

ditumbuhkan dalam kaldu. 


Suspensi baku tersebut dimasukkan dalam kaldu yang berisi berbagai 

konsentrasi antibiotika. 

Konsentrasi terendah yang menghambat pertumbuhan mikroorganisme dalam 

kaldu dapat ditentukan dengan mengukur kekeruhan setelah diinkubasikan. 

Tabung kaldu yang berisi konsentrasi antibiotika yang mampu menghambat 

pertumbuhan mikroorganisme patogen terlihat bening, sedangkan tabung 

dengan konsentrasi antibiotika yang tidak menghambat pertumbuhan 

mikroorganisme patogen terlihat keruh. 

Uji juga dapat menggunakan media agar-agar (lempengan). 

Kekuatan antibiotika dapat ditentukan dengan melihat konsentrasi terendah 

antibiotika yang mampu mematikan atau menghambat pertumbuhan 

mikroorganisme patogen. 

MIC merupakan petunjuk konsentrasi antibiotika yang mampu menghambat 

mikroorganisme dan juga memberikan petunjuk mengenai dosis yang 

diperlukan dalam pengobatan penyakit. 

Dengan mengetahui MIC dan sifat cairan tubuh seperti darah dan urin, dapat 

ditentukan jenis antibiotik yang ampuh untuk pengobatan, besarnya dosis yang 

diperlukan. 

Umumnya, batas keamanan penggunaan antiibiotika untuk pengobatan 

penyakit adalah sepuluh kali dosis MIC. 

MIC dapat ditentukan dengan menggunakan cairan tubuh tanpa harus 

mengisolasi ataupun mengidentifkasi mikroorganisme penyebab penyakit. 


Misal : darah atau cairan serebrospinal yang mengandung mikroorganisme 

infeksius ditambahkan pada berbagai konsentrasi antibiotika. 

Kekeruhan pada tabung setelah waktu inkubasi menunjukkan bahwa 

konsentrasi antibiotika dalam tabung tidak mampu menghambat pertumbuhan 

mikroorganisme. Sebaliknya, tidak adanya kekeruhan menunjukkan bahwa 

mikroorganisme peka terhadap konsentrasi antibiotika dalam tabung. 

B. Metode Antibiogram-Kirby-Bauer 

Uji ini diperkenalkan oleh William Kirby dan Alfred Bauer pada tahun 1966. 

Pada uji ini, lempengan agar ditaburi dengan mikroorganisme penguji. 

Cakram kertas (disc) yang berisi berbagai antibiotika diletakkan diatas 

lempengan agar tersebut. 

Penghambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh antibiotika terlihat sebagai 

wilayah jernih sekitar pertumbuhan mikroorganisme (zona hambat). 

Luasnya wilayah jernih merupakan petunjuk kepekaan mikroorganisme 

terhadap antibiotika dan juga berkaitan dengan kecepatan berdifusi antibiotika 

dalam media. 

Faktor-faktor yang mempengaruhi ukuran diameter zona hambat : 

o Kekeruhan suspensi bakteri : 

Kurang keruh diameter zona hambatan lebih lebar. 

Lebih keruh diameter zona hambatan lebih sempit. 

o Kekeruhan suspensi bakteri harus distandardisasi terlebih dahulu. 


o Standar kekeruhan dibuat dari 0.5 ml 1.75% Barium Chloride Dihydrat 

ditambah 1% asam sulfat. 

Waktu peresapan suspensi bakteri ke dalam lempengan agar. 

Setelah suspensi bakteri digoreskan pada agar dengan menggunakan lidi kapas 

steril, diamkan 5’-15’. Pendiaman tidak boleh melebihi batas waktu yang 

ditentukan karena dapat mempersempit diameter zona hambat, sensitif (S) 

dilaporkan resisten (R). 

Temperatur inkubasi 

o Inkubasi dilakukan pada 35 0 C. 

o < 35 0 C diameter zona hambatan lebih lebar sehingga R dilaporkan S 

terjadi pada lempengan yang ditumpuk-tumpuk lebih dari 2 

lempengan pada saat inkubasi lempengan yang di tengah suhunya 

kurang dari 35 0 C. 

o 35 0 C ada bakteri yang kurang subur dalam pertumbuhannya, ada pula 

obat yang difusinya kurang baik. 

Waktu inkubasi 

16-18 jam. Kurang dari 16 jam, pertumbuhan bakteri belum sempurna 

sehingga sukar dibaca atau diameter zona hambatan lebih lebar. Lebih dari 18 

jam, pertumbuhan lebih sempurna sehingga diameter zona hambatan lebih 

sempit. 


Tebal agar-agar 

Ketebalan agar-agar sekitar 4 mm. 

< 4 mm difusi obat lebih cepat. 

> 4 mm difusi obat lebih lambat. 

Jarak antar disc obat 

Jarak yang dianjurkan minimum 15 mm, untuk menghindari terjadinya zona 

hambatan yang tumpang tindih. Cawan petri dengan diameter 9-10 cm, 

maksimum dapat memuat 7 disc obat. Penempelan disc obat dapat 

menggunakan pinset. 

Potensi disc obat 

Tiap jenis disc obat memiliki diameter yang sama, tetapi potensinya berbeda. 

Komposisi media 

Berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri, difusi obat, aktivitas obat dsb. 

Gambar pengujian antibiotika 


Pembacaan pengukuran diameter zona hambat 

Dengan menggunakan kertas berwarna gelap atau dengan latar belakang sedikit 

gelap, bisa dengan menggunakan jangka. 

Diameter zona hambat yang diukur adalah daerah jernih sekitar disc obat (tidak 

ada pertumbuhan bakteri), diukur dari ujung yang satu ke ujung yang lain 

melalui tengah-tengah disc obat. 

Hasil pengukuran diameter zona hambat dibandingkan dengan standar (resisten 

(R), sensitif (S) atau intermediate (I)). 



Kontrol Kualitas 

o Adalah usaha yang dilakukan untuk menetralisasi faktor-faktor yang 

berpengaruh terhadap diameter zona hambat. 

o Memeriksa mutu media dan disc obat dengan menggunakan bakteri standar: 

S. aureus ATCC 25923, E. coli ATCC 25922 dan P. aeruginosa ATCC 

27853. 


BAB X 

UJI PRODUK FARMASI 

1. Uji Pirogen 

 

Pirogen adalah reaksi demam pada tingkat yang dapat diterima oleh pasien pada 

pemberian sediaan injeksi. 

Tujuan Uji Pirogen : 

Membatasi resiko reaksi demam. 

 

Pengujian meliputi : pengukuran kenaikan suhu kelinci setelah penyuntikan 

larutan uji secara intravena dan ditujukan untuk sediaan yang dapat ditoleransi 

dengan uji kelinci dengan dosis penyuntikan tidak lebih dari 10 ml per kg bobot 

badan dalam jangka waktu tidak lebih dari 10 menit. 

 

Alat dan Pengencer 

Alat : 

1. Alat suntik 

2. Jarum 

3. Alat kaca bebas pirogen 

Pengencer : Sesuai monografi 

Misal : apabila digunakan injeksi Natrium Klorida sebagai pengencer, gunakan 

injeksi yang mengandung larutan Natrium Klorida P 0.9 %. 


Rekaman suhu 

Termometer yang telah dikalibrasi untuk menjamin ketelitian skala ± 0.1 0 C dan 

telah diuji bahwa pembacaan suhu maksimum tercapai ± 5 menit. 

Cara : 

Masukkan alat pengukur suhu ke dalam anus kelinci dengan kedalaman tidak 

kurang dari 7.5 cm. 

 

Hewan Uji 

1. Kelinci dewasa yang sehat 

2. Tempatkan satu ekor dalam satu kandang dengan suhu 20-23 0 C dan bebas dari 

gangguan yang menimbulkan kegelisahan. 

3. Untuk kelinci yang belum pernah digunakan untuk uji pirogen adaptasikan 

tidak lebih dari 7 hari dengan uji pendahuluan. 

4. Kelinci tidak boleh digunakan untuk uji pirogen lebih dari sekali dalam waktu 

48 jam atau sebelum 2 minggu setelah digunakan untuk uji pirogen bila 

menunjukkan kenaikan suhu maksimum 0.60 0 C atau lebih, atau digunakan 

untuk sediaan yang mengandung pirogen. 

Prosedur : 

 

Pengujian dalam ruang terpisah dengan kondisi lingkungan yang sama dengan 

ruang pemeliharaan, bebas dari keributan yang menyebabkan kegelisahan. 

 

 

Kelinci tidak diberi makan selama waktu pengujian. 

Minum dibolehkan setiap saat, tetapi dibatasi pada saat pengujian. 


Tidak lebih 30 menit sebelum penyuntikan larutan uji, tentukan suhu. Suhu 

awal setiap kelinci tidak boleh lebih dari 39.8 0 C. 

Beda suhu setiap kelinci tidak boleh lebih dari 1 0 . 

 

Kecuali dinyatakan lain, suntikan 10 ml/kg BB melalui vena tepi telinga 3 ekor 

kelinci dan penyuntikan dilakukan dalam waktu 10 menit. 

 

Semua larutan harus bebas dari kontaminasi, dengan cara menghangatkan pada 

suhu 37 0 ± 2 sebelum penyuntikan. 

Penafsiran Hasil : 

1. Setiap penurunan suhu dianggap nol, sediaan memenuhi syarat apabila tak 

seekor kelinci pun menunjukkan kenaikan suhu 0.5 0 atau lebih. 

2. Jika ada kelinci yang menunjukkan kenaikan 0.5 0 atau lebih lanjutkan 

pengujian menggunakan 5 ekor kelinci. Jika tidak lebih dari 3 ekor dari 8 

kelinci masing-masing menunjukkan suhu 0.5 0 

atau lebih dan jumlah 

kenaikan suhu maksimum 8 ekor kelinci tidak lebih dari 3.3 0 , sediaan 

dinyatakan memenuhi syarat bebas pirogen. 

2. Uji Sterilitas 

Media yang digunakan untuk uji sterilitas : 

Media tioglikolat cair 

Media tioglikolat alternatif 

Soybean-casein digest medium 


Prosedur umum 

Prosedur pengujian terdiri atas : 

a. Inokulasi langsung ke dalam media uji 

CAIRAN 

1. Pindahkan cairan dari wadah uji (ampul atau vial) menggunakan pipet atau 

jarum suntik steril. 

2. Secara aseptik inokulasikan sejumlah tertentu bahan dari tiap wadah uji ke 

dalam tabung media. 

3. Campur cairan dengan media. 

4. Inkubasi selama 14 hari. 

5. Amati pertumbuhan pada media secara visual sesering mungkin sekurangnya 

pada hari ke-3, ke-4 dan ke-5 atau ke-7 dan ke-8 pada hari terakhir masa uji. 

ZAT PADAT 

1. Ambil sejumlah tertentu produk dalam bentuk padat kering (atau yang terlebih 

dahulu dibuat larutan atau suspensi dalam cairan pengencer steril) dengan tidak 

kurang dari 300 mg tiap wadah atau seluruh isi wadah jika tiap isi kurang dari 

300 mg. 

2. Inokulasikan ke dalam masing-masing tidak kurang dari 40 ml media 

tioglikolat cair dan soybean-casein digest medium. 

3. Langkah selanjutnya sama seperti langkah pada CAIRAN. 


KAPAS MURNI, PERBAN, PEMBALUT, BENANG BEDAH DAN BAHAN 

SEJENISNYA 

1. Dari setiap kemasan kapas, perban gulung atau pembalut perban yang diuji 

ambil secara aseptik dua bagian atau lebih masing-masing 100-500 mg dari 

bagian paling dalam. Dari individu contoh bentuk kemasan tunggal seperti 

bantalan perban, ambil secara aseptik sejumlah 250-500 mg atau keseluruhan 

contoh bila ukurannya kecil, seperti pembalut serap berperekat 25 mm x 75 

mm atau lebih kecil, atau benang bedah. 

2. Langkah selanjutnya sama seperti langkah pada CAIRAN. 

ALAT KESEHATAN STERIL 

Untuk alat yang bentuk dan ukurannya memungkinkan dicelupkan keseluruhan 

ke dalam ± 1000 ml media, uji alat utuh menggunakan media yang sesuai, 

inkubasi. Langkah selanjutnya sama seperti langkah pada CAIRAN. 

Untuk alat yang mempunyai pipa/saluran berlubang seperti alat transfusi atau 

infus atau yang ukurannya menyebabkan pencelupan tidak dapat dilakukan dan 

hanya saluran cairannya yang harus steril, bilas lumen masing-masing dari 20 

unit dengan sejumlah secukupnya media tioglikolat cair dan soybean-casein 

digest medium. 

Untuk alat yang bentuk dan ukurannya tidak dapat dicelup, maka uji bagian 

alat yang paling sulit disterilisasi, dan jika mungkin lepaskan dua atau lebih 

bagian yang penting dari alat. Secara aseptik pindahkan bagian tersebut ke 

dalam 1000 ml media. 


ALAT SUNTIK KOSONG ATAU TERISI 

Untuk alat suntik terisi yang dilengkapi jarum steril, keluarkan isi produk 

melalui lumen. Pengujian sama seperti pada cairan dalam ampul atau vial. 

Untuk alat suntik kosong steril, masukkan media atau pengencer steril ke 

dalam alat suntik melalui jarum yang disertakan atau jika tidak disertakan 

melalui jarum steril yang dipasang untuk tujuan pengujian. 

Contoh : 

OBAT-OBATAN ANTIBIOTIKA/KIMIA 

Secara aseptik diambil setengah dari jumlah spesimen yang ada di dalam 

ampul, dilarutkan di dalam air garam, aquadest atau pelarut lain yang steril, 

sebanyak mungkin dengan tujuan meniadakan potensi obat tersebut. Kemudian 

lakukan penyaringan. 

VITAMIN, AQUADEST, AIR GARAM 

Diambil beberapa spesimen ampul, tutupnya atau bagian yang akan dibuka 

dibersihkan dengan kapas alkohol. Ampul dipatahkan ujungnya, sedangkan 

vial dibuka tutup aluminiumnya yang di tengah, isinya diambil dengan syringe 

steril disposable. 

KAIN KASA 

Bungkus kain kasa dibuka secara steril, kain kasa diambil diletakkan di dalam 

cawan petri steril, digunting-gunting dengan gunting steril menjadi bagian 

kecil-kecil. 

Media yang digunakan : 

BHI broth/Tryptose Soy Broth/Blood Broth untuk bakteri aerob. 

Cooked meat medium untuk bakteri aerob. 


Media tioglikolat untuk bakteri aerob/anaerob. 

Potato dextroseagar untuk kapang dan khamir. 

b. Teknik penyaringan membran 

Membran yang sesuai umumnya memiliki porositas 0.45 m, dengan diameter 

lebih kurang 47 mm, dan kecepatan penyaringan air 55 ml hingga 75 ml per 

menit pada tekanan 70 cmHg. 

3. Uji Koefisien Fenol 

Contoh hasil pengamatan baku fenol 

Baku 

Lama kontak 

Pengenceran 5’ 10’ 15’ 

1 : 80 - - - 

1 : 90 + - - 

1 : 100 + + - 

Contoh hasil pengamatan desinfektan 

Desinfektan X 

Lama kontak 

Pengenceran 5’ 10’ 15’ 

1 : 100 - - - 

1 : 150 - - - 

1 : 200 - - - 

1 : 250 + - - 

1 : 300 + + - 

1 : 350 + + + 

1 : 400 + + + 

Hitung koefisien fenol (KF). 

Tabel hasil uji baku fenol yang memenuhi syarat 

Pengenceran 

Lama kontak 

5’ 10’ 15’ 

1 : 80 +/- - - 

1 : 90 +/- +/- - 

1 : 100 + + +/- 

Bila dari dua pengenceran pertama dari baku fenol yang diuji tidak ada satupun 

tabung pengenceran yang memberikan hasil positif dalam masa kontak 5’ dan 


memberikan hasil pertumbuhan negatif dalam masa kontak 10’, maka diperkirakan 

bahwa pengenceran yang diharapkan berada diantara pengenceran kedua (1 : 90) dan 

pengenceran ketiga (1 : 100). Lihat tabel di bawah. 

Contoh hasil perkiraan uji baku fenol 

Pengenceran 

Lama kontak 

5’ 10’ 15’ 

1 : 80 - - - 

1 : 90 - - - 

1 : 100 + + - 

Contoh hasil perkiraan uji desinfektan 

Pengenceran 

Lama kontak 

5’ 10’ 15’ 

1 : 300 - - - 

1 : 350 - - - 

1 : 400 + + - 

Jadi angka perkiraan untuk baku fenol antara 90-100, untuk desinfektan antara 350- 

400. 

Hitung koefisien fenol (KF). 


BAB XI 

FUNGI 

Terbagi atas dua golongan yaitu kapang dan khamir. 

Kapang 

‣ Membentuk filamen panjang yang disebut hifa dan merupakan ciri utama 

fungi. 

‣ Kumpulan hifa disebut miselium. 

‣ Hifa memiliki dua struktur yaitu bersepta dan tidak bersepta. 

‣ Septa menyekat sel sehingga filamen yang panjang terlihat sebagai rangkaian 

sel. 

‣ Hifa yang tidak bersepta disebut hifa konositik. 

‣ Dinding sel fungi mengandung khitin yang merupakan komponen utama 

dinding sel. Hifa mengabsorbsi zat hara dari sekelilingnya dan memanjang 

dengan cara membelah diri. 

‣ Hifa dapat membentuk struktur reproduksi yang disebut spora. 

‣ Metode untuk melihat struktur fungi dengan jelas adalah dengan slide culture. 

‣ Identifikasi kapang berdasarkan ciri morfologi hifa, warna (pigmen) hifa, 

jenis hifa (ada septa/tidak), ukuran, bentuk, warna serta penataan spora. 


‣ Kelompok kapang diklasifikasikan berdasarkan spora seksualnya; 

Klasifikasi 

Ciri 

Zygomycetes 

Hifa konositik. 

Spora seksual : zygospora. 

Spora aseksual : sporangiospora 

dalam sporangium. 

Contoh : Rhizopus dan Mucor. 

Ascomycetes 

Hifa bersepta. 

Spora seksual : askuspora dalam 

askus. 

Spora aksesual : konidium. 

Contoh : Neurospora, 

Saccharomyces. 

Deuteromycetes 

Bentuk seperti khamir. 

Hifa seperti Ascomycetes. 

Tidak mempunyai stadium seksual. 

Spora aseksual : konidium. 

Contoh : Penicillium, Aspergillus, 

Candida. 


Slide Culture 

Cara : 

1. Letakkan kertas saring pada dasar cawan petri. 

2. Letakkan batang gelas steril berbentuk “U” diatas kertas saring. 

3. Kertas saring dibasahi dengan air, sehingga suasana dalam cawan petri menjadi 

lembab. 

4. Letakkan object glass diatas batang gelas berbentuk “U”. 

5. Potong agar Saboraud berbentuk persegi dan letakkan diatas object glass. 

6. Sisi dari agar ini diinokulasi dengan kapang. 

7. Letakkan kaca penutup diatas potongan agar, kemudian tutup cawan petri. 


8. Diamkan dalam suhu kamar selama 48 jam. 

Khamir (Ragi) 

‣ Merupakan fungi yang tidak berfilamen dan bereproduksi melalui pertunasan 

atau pembelahan sel. 

‣ Pertunasan dapat terjadi melalui satu ujung (pertunasan polar) atau melalui 

beberapa tunas di sekeliling sel (pertunasan multilateral). 

‣ Jenis pertunasan, bentuk dan jumlah askuspora merupakan ciri yang 

banyak digunakan dalam identifikasi khamir. 

‣ Khamir digunakan dalam pembuatan roti dan anggur, namun ada khamir yang 

bersifat patogen, contoh : Candida dan Cryptococcus. 


‣ Klasifikasi khamir sebagai berikut berdasarkan morfologinya : 

Genus 

Ciri 

Torulopsis, 

Rhodotorula 

Cryptococcus, 

Hanya ada pertunasan 

Candida 

Tunas dan pseudomiselium 

Trichosporon Tunas, pseudomiselium dan 

arthrospora 

Geotrichum 

Miselium dan arthrospora 

Saccharomyces 

Tunas dan askuspora 

Torulopsis 

Kecil, berbentuk oval, seringkali menyebabkan pencemaran dalam industri 

minuman. 

Cryptococcus 

Besar, berbentuk bulat, mempunyai kapsel dan sering ditemukan pada buah, 

C. neoformans bersifat patogen terhadap manusia. 

Rhodotorula 

Khamir berwarna merah atau merah muda. Bila biakan dibiarkan tumbuh 

pada lempengan agar maltosa terlihat pertumbuhan koloni bayangan pada 

bagian tutup cawan petri. 


Candida 

Candida penting dalam bidang kesehatan, terutama C. albicans. Semua 

candida membentuk koloni kekuningan dan licin pada agar, terkecuali C. 

krusei yang berpenampilan seperti serpihan kaca. C. utilis sering digunakan 

pada industri makanan sehingga sering disebut khamir pangan. 

Trichosporon 

T. cutaneum sering ditemukan pada permukaan kulit. Bila ditumbuhkan 

pada agar maltosa akan terlihat sebagai koloni yang menyebar dan basah. 

Geotrichum 

Pencemar dalam industri makanan dan acar. 

Saccharomyces 

S. cereviseae digunakan dalam industri minuman dan roti. 


Bahan yang diperlukan : 

Biakan khamir 

Media : agar V-8 

Potongan wortel 

Cara mengerjakan : 

Buat preparat basah dari biakan khamir yang disediakan. 

Periksa preparat dengan menggunakan perbesaran 45x dan 100x. Amati 

morfologi khamir dan penampilan tunas. Cari sel yang memiliki askuspora. 

Amati bentuk dan hitung jumlah askuspora. 


Bila askuspora tidak ditemukan, biakkan khamir pada agar V-8 atau sepotong 

wortel. Khamir seringkali membentuk askuspora pada media biakan yang kaya 

seperti agar V-8. 

Bandingkan dengan tabel di bawah ini. 

TABEL CIRI BIOKIMIA BEBERAPA KHAMIR 


Daftar Pustaka 

Anonim, 1995, Farmakope Indonesia Ed. IV, Jakarta : DEPKES RI. 

Benson, Microbiological Applications, e-book. 

Fardiaz, S., 1993, Analisis Mikrobiologi Pangan, Jakarta : PT RajaGrafindo Persada. 

Irianto, K., 2006, Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme, Bandung : CV 

Yrama Widya. 

Lay, B.W., 1994, Analisis Mikroba di Laboratorium, Jakarta : PT RajaGrafindo 

Persada.

Please read my original book Leave a Reply - Blogs Unpad

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?