Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Hegedüs Éva, Ph.D. IIBiofizikai és Sejtbiológiai IntézetMLL BCR TÖRÉSEK KIMUTATÁSA GÉLSZELET–PCR TECHNIKÁVALAkut leukémiában szenvedő egy év alatti gyermekek jelentős hányadábanaz egyik leggyakrabban megfigyelt genetikai módosulás a 11q23 sávbanelhelyezkedő MLL gént érintő kromoszóma transzlokáció. Az MLL gén egyiklegfigyelemreméltóbb tulajdonsága a transzlokációs partnerek sokfélesége: többmint 30 partnergénjét írták le. A 89 kb hosszúságú, 36 exont tartalmazó MLLgénen belül a patológiás rekombinációk nagy része egy BamH1 restrikcióshelyek határolta 8,3 kb nagyságú fragment ― breakpoint klaszter régió, bcr ―területén történik.A pontos molekuláris mechanizmus, ami az MLL gén átrendeződésétokozza, nem ismert. Felvetődött a topoizomeráz II enzim közvetítő szerepe azMLL transzlokációkban, mivel a primer leukémiás betegek topoizomeráz II –gátló szerekkel történő kezelését követően kialakuló posztterápiás leukémiákjelentős részében az MLL gén átrendeződését figyelték meg. Potenciális szerepelehet még az Alu szekvenciák között zajló homológ rekombinációnak, valamintillegitim rekombinációnak a VDJ rekombináció formájában.A bcr régiót érintő átrendeződések kimutatására az általában használtSouthern blot technikánál érzékenyebb eljárást kívántunk kidolgozni ésalkalmazni. Ennek során a standard eljárással tisztított, illetve alacsonyolvadáspontú agarózba ágyazott sejtekből izolált genomi DNS-t BamH1-enzimmel emésztjük, az így kapott fragmenteket alacsony olvadáspontú agarózgélben elektroforetizáljuk, majd a gélt felszeletelve az egyes szeletekbentalálható DNS fragmentumokat temlátként használva, PCR amplifikációtvégzünk, MLL bcr-re specifikus primerek segítségével. A PCR termékekjelenlétéből következtetünk a feltételezett töréspontokra, mennyiségükből pedigdupla szálú törések előfordulási gyakoriságára. Utóbbi meghatározásátlaboratóriumunkban kifejlesztett, áramlási citometriás qPCR eljárássalvégezzük.A fenti eljárás során normál, transzlokációt nem hordozó, nemapoptotikus, Go fázisban szinkronizált szövettenyészeti sejtekből származó DNSesetében kísérelünk meg dupla-szál töréseket kimutatni az MLL bcr-en belül.Témavezető: Prof. Szabó Gábor