Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Griger Zoltán, Ph.D. IIDE OEC Élettani Intézet és III. BelklinikaA PROTEIN KINÁZ C RENDSZER IZOFORMA-SPECIFIKUS SZEREPE AHUMÁN MONOCYTOID LEUKÉMIA SEJTVONAL MONOMAC-6FOLYAMATAINAK SZABÁLYOZÁSÁBANJelen kísérleteinkben a protein kináz C (PKC) izoenzimcsalád szerepétvizgáltuk az akut monocitás leukémiából származó (FAB M5) MonoMac-6sejtvonal proliferációjának és arachidonsav (AA) termelésének szabályozásában.Áramlási citometria, Western blot és quantitatív „real-time” Q-PCRtechnikákat alkalmazva kimutattuk, hogy a MonoMac-6 sejtek a normál humánperifériás monocitákhoz nagyon hasonlóan expresszálják a kalcium-függő cPKCalfát és bétát, a kalcium-független nPKC deltát és epszilont, valamint az atípusosaPKC zétát.Megállapítottuk továbbá, hogy a PKC aktivátor forbol 12-mirisztát 13-acetát (PMA) dózisfüggően gátolta a sejtproliferációt, mialatt a cPKC alfa ésnPKC epszilon szintjét növelte, a cPKC béta és nPKC delta expresszióját pedigcsökkentette. Kimutattuk, hogy az általános PKC inhibitor GF109203X nembefolyásolta szignifikáns mértékben a sejtek növekedését, míg a cPKCizoformákat gátló Gö6976, valamint a szelektív PKC delta inhibitor Rottlerincsökkentette a sejtproliferációt. RNS-interferencia technikával kimutattuk, hogycPKC alfa-specifikus siRNS transzfekciójátt követően a sejtproliferációnövekedett, míg a cPKC béta knock-down esetében csökkent a kontrollhozviszonyítva.A sejtek AA termelését vizsgálva megállapítottuk, hogy a PMA egyedülialkalmazása (kizárólagos nPKC aktiváció) önmagában nem befolyásolta, mígkalcium-ionofór jelenlétében (A23187, cPKC+nPKC aktiválás) növelte azt. Eztkövetően a MonoMac-6 sejteket különféle PKC izoenzimek szekvenciáithordozó eGFP konjugált vektorokkal, nukleofekciót alkalmazva, tranziensentranszfektáltuk. Megállapítottuk, hogy a cPKC alfa transzfekciója csökkentette aPMA+kalcium ionofr indukált; a cPKC béta overexpressziója növelte a óbazális;a nPKC delta nukleofekciója pedig serkentette a PMA indukált AA termelést akontroll sejtekéhez viszonyítva (a nPKC epszilon és aPKC zéta overexpressziójanem befolyásolja a sejtek AA termelését)Eredményeink azt sugallják, hogy a cPKC alfa gátolja, míg a cPKC bétaés a nPKC delta serkenti MonoMac-6 sejtek proliferációját. Adataink emellettrámutatnak a PKC izoenzimek specifikus, ugyanakkor meglehetősen komplexszerepére a sejtek AA termelésének szabályozásában.Témavezető: Dr. Bíró Tamás, Dr. Sipka Sándor