Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Eizert Helga, Ph.D. III, Horváth András, Ph.D. V, Szöllősi János, ÁOK IBiokémiai és Molekuláris Biológiai IntézetSEJTFELSZÍNI THIOREDOXIN KÖLCSÖNHATÁSA KÉMIAILAGMÓDOSÍTOTT OLIGONUKLEOTIDOKKALMunkacsoportunk kifejlesztett egy kémiailag módosítottoligonukleotidot, mely potens és szelektív inhibítora a HIV replikációnak(eredmények szabadalmaztatva, publikáció alatt). Az oligonukleotid 4-tiodezoxiuridiláthomooligonukleotid, 35-tagu, kémiai felépítése: (s4dU)35. Gátlóhatásának valószínű mechanizmusa a HIV felvételhez szükséges sejtfelszínioxidoredukciós folyamatok gátlása. Jelen vizsgálatainkban azt tűztük ki célul,hogy megvizsgáljuk a tioredoxin és az (s4dU)35 kölcsönhatását.Elkészítettük az (s4dU)35 Cy5 jelzett és biotin jelzett változatát.Megállapítottuk konfokális lézer szkenning mikroszkópiával, hogy a K6 Tlymphoma sejtek felszínén az (s4dU)35 kolokalizált a sejtfelszíni tioredoxinnal.Ezután a biotinnal jelzett (s4dU)35 és izolált tioredoxin kölcsönhatásátvizsgáltuk különböző pH-n. Az oligonukleotid és a tioredoxin között spontánkovalens kölcsönhatás alakult ki, mely reverzibilis és merkaptoetanollal,redukált glutationnal és DTT-vel kivédhető volt. A kovalens kölcsönhatástdenaturáló gélelektroforézist követő blotton történő biotin detektálással mutattukki. Ezek az eredmények jelzik, hogy az oligonukleotid anti-HIV aktivitásánakegyik lehetséges mechanizmusa, a bázis tautomer átalakulása során kialakult –SH csoport és a sejtfelszíni tioredoxin reaktív –SH csoportja közötti kovalenskölcsönhatás. Az eredmények azonban nem magyarázzák az anti-HIV aktivitáslánchossz függését. Megállapítottuk továbbá, hogy a rövidebb lánchosszú tioláltoligonukleotidok láthatóan azonos reaktivitással reagálnak tioredoxinnal.Kimutattuk, hogy a vegyület nem toxikus és rendkívül ellenálló nukleázokhatásával szemben.Vizsgáltuk az (s4dU)35 interakcióját CD4 sejtfelszini receptorral is,melynek 2. doménjében található diszulfid híd tioredoxin által mediáltoxidoredukciós változáson megy át a HIV belépése során.A 4-tio-dezoxiuridilát tartalmú oligonukleotidok kovalens kölcsönhatásatioredoxinnal és valószínűleg más –SH tartalmú proteinekkel pl. proteindiszulfid izomerázzal, fontos technikai módszer lehet a sejtbiológiaikutatásokban azon túl, hogy potens anti-HIV ágens.Témavezető: Dr. Aradi János