Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Buslig Júlia Judit, Ph.D. IDEOEC Biokémiai és Molekuláris Biológiai IntézetÚJ MOLEKULÁRIS BIOLÓGIAI MÓDSZER A MINIMÁLIS REZIDUÁLISBETEGSÉG MONITOROZÁSÁRA,GYERMEKKORI AKUTLIMFOBLASZTOS LEUKÉMIÁBAN.A gyermekkori akut limfoblasztos leukémia (ALL) heterogén betegség,mely a betegségért felelős sejttípus, kromoszomális és molekuláris aberrációk,illetve a génexpressziós profilok alapján is több, eltérő prognózisú alcsoportraosztható. A tumorsejtek számának nyomonkövetése a terápia során segít abetegek különböző kockázati csoportba való besorolásában, ezáltal a személyreszabott terápia alkalmazásában; prognosztizálja a csontvelő-átültetésszükségességét és sikerességét, illetve relapszus esetén a korai felismeréskedvezőbb terápiás kilátásokat biztosít. Ezért a minimális reziduális betegség(MRD) nyomon követése nagyon fontos és a terápiás döntések alapjául szolgál.Az MRD monitorozására a legelterjedtebb módszerek az áramlásosimmuncitometria és a PCR.Munkánk célja egy Európában már használatos, új nyomonkövetésimódszer meghonosítása, mely érzékenyebb a klasszikus módszereknél. Emódszer alapja a tumorsejtek számának a leukémia-specifikus Ig/TCRgénátrendeződések monitorozásával való mérése, real-time kvantitatív PCR-rel(QPCR). Az egyre szélesebb körben alkalmazott QPCR nagyon érzékeny,specifikus, abszolút kvantitálást is lehetővé tevő módszer, melynekalkalmazásával már nagyon kevés tumorsejt jelenléte/mennyisége kimutatható.Munkánk során a BIOMED-2 Concerted Action (BMH4-CT98-3936) általkifejlesztett primer-párokat és konszenzus QPCR reagenseket alkalmaztuk.A diagnosztikus mintából génspecifikus PCR-rel és heteroduplexanalízissel azonosítottuk a klonális génátrendeződéseket több páciensben, majdszekvenálással meghatároztuk a génszegmensek csatlakozási régiójában az adottpáciensre specifikus, egyedi PCR-célszekvenciát. Páciensenként többgénátrendeződésre terveztünk és optimalizáltunk QPCR assay-ket, melyeket afollow-up minták tumorterhének meghatározására használtunk. A terápiakülönböző szakaszaiból származó follow-up mintákban mért tumorsejtszámváltozása alapján megállapítottuk, hogy a különböző páciensek mely kockázaticsoportba tartoznak.Eredményeink alapján elmondhatjuk, hogy az Ig/TCR génátrendeződésekreal-time kvantitatív PCR-ral történő mérése érzékeny és megbízhatómódszernek bizonyult a minimális reziduális betegség nyomon követésére ALLben.Témavezető: Dr. Scholtz Beáta