Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Újvárosi Kinga , TTK VDE OEC ÁOK Humángenetika IntézetA DAMASA 16BD NŐSTÉNY STERIL MUTÁCIÓ GENETIKAIVIZSGÁLATA DROSOPHILA MELANOGASTER-BENMunkánk során a Drosophila melanogaster 16bD jelű, nőstény sterilitástokozó domináns negatív mutánsának genetikai analízisét folytattuk. A 16bDnevű domináns negatív mutációt hordozó heterozigóta nőstények életképesek,de sterilek, megtermékenyített petéik nem indulnak fejlődésnek, a zigóta már azelső hasadási osztódást sem tudja befejezni, elpusztul. A zigótában láthatóoszlási orsó felépítése és a kromoszómák szerveződése is eltér a vadfenotípusétól. A mutációt heterozigóta hímekben lehet fenntartani, mivelezekben az egyedekben a mutációnak nincs hatása. Első lépésben befejeztük amutáció lokuszának térképezését. Ehhez a kísérlethez a 16bD domináns alléljáthordozó mutáns törzset és a 3. kromoszóma egyes darabjait több példányban istartalmazó mutánsokat használtuk fel. A 16bD mutációt hordozó gén lokuszánakpontosabb meghatározásához duplikációs térképezést használtunk. Aduplikációs térképezés alapján a 16bD gén a 3. kromoszóma 62A-64C citológiairégiójába lokalizálható. A duplikációs analízis eredménye azt is valószínüsíti,hogy a mutáns géntermék ugyanabban a folyamatban vesz részt mint a vad allélterméke. A mutációt hordozó gén azonosítását két módszerrel: (1.)komplementációs analízissel és (2) inverz PCR technika felhasználásávalkíséreltük meg. 1. Ismerve a mutáns fenotípust és kölcsönhatásait más ismertmutációkkal a Drosophila genom annotált adatbázisának analízisévelkiválasztottuk a Pavarotti-KLP (pav) gént és annak egy funkcióvesztésesmutánsával végeztük el a komplementációs analízist. 2. A második esetben16bD domináns mutáció transzpozonos (P elem) mutagenezissel recesszívvéalakított alléljait tartalmazó mutánsokat (16bRP1 és 16bRP2) használtuk.Ezekben a mutánsokban a P elem várhatóan a keresett gén közelében található,ezért a revertánsokból izolált DNS-ből inverz PCR-ral felszaporítható a P elemkörnyezetében található DNS szakasz, ami nagy valószínűséggel azonosíthatja aa 16b gént.. A 16bRP1 mutáns DNS-éből három-, a 16bRP2 mutánséból pedigkét fragment volt felszaporítható. A pav-KLP génnel elvégzett komplementációsanalízis sem azonosította egyéretleműen a 16b gént, de nem is zárta ki a kétmutáns azonosságát (vagy a gének közötti kölcsönhatást). Az inverz-PCR-ralfelszaporított és izolált fragmentek szekvenálása folyamatban van.Témavezető: Dr. Penyige András