Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Szöőr Árpád, ÁOK IIIBiofizikai és Sejtbiológiai IntézetA PDGF RECEPTOROK MŰKÖDÉSÉNEK ÉS SEJTFELSZÍNILOKALIZÁCIÓJÁNAK VIZSGÁLATA GLIOBLASZTÓMA SEJTEKENAz idegrendszer glia eredetű tumoraiban a PDGF receptorok fontosszereppel bírnak. Ezen receptor tirozinkinázok aktiválódásukkortranszfoszforilálódnak és a foszfotirozin oldalláncokról kiinduló jelátvitelikaszkádok hozzájárulnak a tumorsejtek proliferációjához, ill. túléléséhez. APDGF receptorok alfa és béta formája ismert. Kísérleteinkben a béta variánssejtmembrán-lokalizációját és működését vizsgáltuk A172, T98G és U251NCIglioblasztóma sejteken. Mivel az utóbbi időben ismertté vált a membránmikrodomének, ún. lipid raftok szerepe a jelátviteli molekulák szervezésében,ezek PDGF receptorhoz való viszonyát is vizsgáltuk.A PDGF receptorokat indirekt immunfluoreszenciával, a lipid raftok GM1gangliozid komponensét fluoreszcein-konjugált koleratoxin B alegységgeljelöltük. A membránbeli eloszlást 0.5 mikronos optikai szeletekben, konfokálislézerpásztázó mikroszkóppal, digitális képelemző algoritmusok segítségévelvizsgáltuk. A receptorok aktiváltsági állapotát foszforilációjuk mérésével, és azáltaluk PDGF hatására kiváltott kalcium tranziens in situ, fluoreszcenciásindikátoron alapuló követésével jellemeztük.Megállapítottuk, hogy a sejtek felszínén a PDGF receptorok szubmikronméretű klaszteres eloszlást követnek, s ezek a klaszterek egyben GM1gangliozidban is gazdagok. Az átfedés mértékét a keresztkorrelációskoefficienssel jellemeztük. Megfigyeléseink szerint a sejtfelszínireceptoreloszlás, ill. a receptorok klaszterekbe való szerveződéseösszefüggésben van e a sejtpreparátumok konfluenciájával: a konfluencianövekedésével a klaszterek mérete és receptorsűrűsége nő, átfedésük a lipidraftokkal fokozódik: a keresztkorrelációs koefficiens 0.35–ről 0.5–re nőtt,amennyiben a sejtsűrűséget egy nagyságrenddel megnöveltük. A receptoroklipid raftbeli elhelyezkedésének funkcionális jelentősége is van. Amikrodomének megbontása metil-béta-ciklodextrinnel, ill. a raftok aggregálása aGM1 gangliozid koleratoxinos keresztkötésével a PDGF receptorok működésétgátolja: csökken a PDGFR foszforiláció, és a PDGF által kiváltott kalciumtranziens eltűnik.Témavezető: Dr. Vereb György