Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Pálóczi Balázs, ÁOK VDE OEC, Klinikai Kutató KözpontIN VITRO MÓDSZER ÁRAMLÓ VÉRBEN AKTIVÁLÓDÓTHROMBOCYTÁK VIZSGÁLATÁRAThrombus képződése során az első lépés a thrombocyták thrombogenfelszínhez való kötődése, adhéziója, majd a második lépés a thrombocytákegymáshoz kapcsolódása, aggregációja. Fontos szerepet játszik ebben afolyamatban az intravasculáris nyírófeszültség, mely a folyadék rétegek közöttható mechanikai erőt jelenti, ha az áramló vért egymáson elmozduló rétegekkéntképzeljük el. A nyírófeszültség és a thrombocyta aktiváció összefüggésénekvizsgálatára többféle áramlási kamrát használnak a kutató laboratóriumok, mintpl. a párhuzamos lemezű, a körátmetszetű és a síkon forgó kúp kamrákat.Kísérletem célja, hogy összeszereljek és kipróbáljak egy körátmetszetűkapilláris kamrát, mely lehetővé tenné jól jellemezhető áramlási körülményekközött a thrombocyta aktiváció vizsgálatát rutin laboratóriumban is.Vizsgálataim során nátrium-citráttal alvadásgátolt vért áramoltattam körátmetszetű kapillárisban. Az áramlást egy tápegységről 3-6 V-os feszültségtartományban működtetett villanymotorral hoztam létre úgy, hogy az egyfecskendőből nyomta a vért a kapillárison át. Különböző feszültségértéknélkülönböző nagyságú áramlási sebességet tudtam létrehozni. Az adhezív felszínlétrehozására I-es és III-as típusú kollagén keverékével töltöttem meg akapillárisokat és minimum egy órahosszáig hagytam a kollagén rostokat afelszínhez kötődni. Pufferes mosása után 1 ml vért áramoltattam át rajtuk, majdazonnali mosás után metanollal dehidráltam a kollagén felszínhez és egymáshozkötődött sejteket és May-Grünwald és Giemsa oldattal festettem. Azátáramoltatott vért EDTA tartalmú pufferbe engedtem és meghatároztam athrombocyta számát.1137/s nyíróaránynál áramoltatott vér thrombocyta száma 0-29 %-kalcsökkent (n=19). A csökkenés mértéke nem mutatott összefüggést a kiindulásithrombocyta számmal, mely 74 és 335 G/L között volt. Kihagyva a szélsőértékeket az átlag csökkenés 6±2,5 % (n=15). Fénymikroszkóppal a kollagénnelfedett kapillárisokban kitapadt thrombocytákat és thrombust sikerültmegfigyelnem, más sejteket nem. A kitapadt thrombocyták és a vérből eltűntthrombocyták száma közötti összefüggés elemzése folyamatban van. Athrombocyta aktivációban nem tapasztaltam eltérést 475/s, 605/s és 1137/snyíróarányt alkalmazva.Eredményeim azt mutatják, hogy az általunk összeállított kapilláris kamrateljes vér áramoltatására és dinamikus thrombusképződés vizsgálatára alkalmas.Témavezető: Dr. Hársfalvi Jolán