Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Nagy Georgina, Mol.Biol. V, Dobrosi Nóra, Mol.Biol. VÉlettani IntézetTERMÉSZETES FENOLSZÁRMAZÉKOK HATÁSA AZ AKTÍV KALCIUMTRANSZPORTRAAz izomkontrakció és a relaxáció szabályozó szignálja az intracellulárisszabad kalcium koncentráció változása. A felszíni membránon végighaladóakciós potenciál kialakulását a mioplazmatikus kalcium szint emelkedése követi.A depolarizáció elsőként a T-tubulusok falában elhelyezkedő dihidropiridinreceptorok konformáció változását idézi elő, ami megnyitja a szarkoplazmatikusretikulum terminális ciszternáiban levő Ca2+ csatornát (rianodin receptort). Akalcium az SR lumenéből az elektrokémiai gradiensnek megfelelően akontraktilis fehérjékkel azonos kompartmentbe áramlik és az izomösszehúzódik. Az izom relaxációját a szarkoplazmatikus tér kalciumszintjénekcsökkenése váltja ki. A Ca2+ transzportja (visszavétele) döntően az SRlumenébe történik. Ezt a gradiens ellenében zajló iontranszportot a Ca2+-ATPázvalósítja meg.Kísérleteink során a timol és néhány, a timolhoz hasonló szerkezetűtermészetes fenolszármazék (cineol, transz-anetol, para-ánizsaldehid, metaánizsaldehid,vanillin, o-vanillin, 6-amino-m-cresol, 4metil-2-nitrofenol)pumpaműködésre gyakorolt hatását vizsgáltuk. Vizsgálatainkat nyúl vázizombólpreparált könnyű SR vezikulákon végeztük ún. piruvát-kináz „kapcsolt enzimassay” módszerrel, melynek során 334 nm-en követtük nyomon a NADHfogyását és ebből határoztuk meg a Ca2+-ATPáz aktivitását.Kísérleteink szerint a timol, a transz-anetol, a vanillin, az orto-vanillin, ameta-ánizsaldehid, a cineol és a 4-metil-2-nitrofenol koncentrációfüggő módongátolja a pumpa aktivitását. A dózishatás görbék Hill analízisével meghatározottdisszociációs konstansok értékei: Kd,t-anetol= 168 ± 10,4 microM; Kd,timol=224 ± 10 microM; Kd,vanillin= 626,4 ± 8,7 microM; Kd,o-vanillin= 1125 ± 153microM; Kd,m-ánizsaldehid= 2248 ± 141 microM; Kd,cineol = 3338 ± 218microM és Kd,nitrofenol= 1103 ± 21 microM. A meghatározott Hillkoefficienseka következők voltak: nHill,t-anetol= 2,51 ± 0,3; nHill,timol= 1,95± 0,14; nHill,vanillin= 7,46 ± 0,86; nHill,o-vanillin= 1,77 ± 0,5; nHill,mánizsaldehid=2,46 ± 0,42; nHill,cineol= 2,22 ± 0,34 és nHill,nitrofenol= 5,95 ±0,54. A p-ánizsaldehid és a 6-amino-m-cresol nem befolyásolja a pumpaműködését.Témavezető: Dr. Szegedi Csaba