Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Kis Andrea, Mol.Biol. VOrvosi MikrobiológiaGYAKORI P16INK4A ÉS P14ARF GÉN DELÉCIÓ, VALAMINTPROMOTER METILÁCIÓ HTLV-I ÁLTAL FERTŐZÖTT T-SEJTVONALAKBANAz INK4A/ARF lókusz két tumor-szuppresszor fehérjét kódol(p16INK4A, p14ARF), melyek aminosav sorrendje eltérő. A p16INK4A aCDK4 és 6 aktivitását gátolja, ezáltal az RB fehérje hipofoszforilált marad; ap14ARF a p53 útvonal szabályozásával a sejtciklust szintén a G1/G0 fázisbantartja. Ezen gének megfelelő expressziója nélkülözhetetlen a normális sejtciklusfenntartásához. Sok daganatos betegségben, így leukémiákban éslymphomákban is, megfigyelték ezen tumor-szuppresszor gének deléciójátilletve promoter régióik metilációját, amely változások a génexpressziótgátolták. Vizsgálataink során meghatároztuk a p16INK4A és a p14ARF géneketérintő genetikai eltéréseket és a promoter régiókban bekövetkező metilációsváltozásokat 8 HTLV-I fertőzött és 3 HTLV negatív T-sejtvonalban.A tumor-szuppresszor génekben bekövetkező deléciót PCR-t követőegyszálú konformációs polimorfizmus (PCR-SSCP) technikával mutattuk ki. Ap16INK4A és a p14ARF kódoló szekvenciáit érintő mutációkat ABI automataszekvenátorral vizsgáltuk. A gének promoter metilációját metiláció-specifikusPCR (MSP) alkalmazásával határoztuk meg. A fehérje jelenlétét Western bloteljárással vizsgáltuk.Az INK4A/ARF lókusz delécióját, amely mindkét tumor-szuppresszorgén inaktiválását eredményezte, a 3 HTLV negatív és a belőlük kialakítottösszes HTLV fertőzött T-sejtvonalban ki tudtuk mutatni. A további 4 HTLV+sejtvonalban deléció nem volt, és a szekvencia analízissel is csak heterozigótamutációt találtunk. Három esetben egyik vagy mindkét gén promoter régióinakrészleges/teljes metilációját figyeltük meg. Az összes vizsgált sejtvonalattekintve az MSP mindkét gén promoterét metilált állapotban mutatta ki 2HTLV+ sejtvonalban, míg csak a p14ARF promoterét 4 esetben, és csak ap16INK4A promoterét 1 esetben. Érdekes módon az egyetlen olyansejtvonalban, mely genetikai és epigenetikai változásokat sem mutatott avizsgált gének tekintetében, sem volt kimutatható a p14 fehérje. A perifériásvérből származó, negatív kontrollként használt limfocitákban a vizsgált tumorszuppresszorgéneknek mind a genetikai, mind a metilációs státusza normálisvolt.Ezek az adatok a HTLV-I fertőzés és az INK4A/ARF lókusz metilációsinaktiválása közötti szoros összefüggést mutatják. A sejtciklus kontrollinaktiválása pedig egy fontos lépés lehet a sejtciklus deregulálásában és a vírusáltal okozott transzformációban.Témavezető: Dr. Beck Zoltán