Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

13.07.2015 Views

Gomez Izabella, ÁOK VIDE Szervetlen és Analitikai Kémiai Tanszék Környezetanalitikai CsoportOSTEOPOROSIS KEZELÉSE IONTOFORETIKUS ELJÁRÁSSALOVARIECTOMIZÁLT PATKÁNYOKONA csontritkulás korunk egyik népbetegsége. Az anti-osteoporoticusterápiák elsődleges célja a pathológiás törések kockázatának csökkentése. Azalkalmazott kezelések nem mindig eredményesek, hatásuk lassan alakul ki,valamint a gyógyszerek mellékhatásaival is számolni kell. Munkánk során egyúj kezelési módszert dolgoztunk ki, mellyel a csontritkulásos területre lokálisanlehet a hiányzó komponenseket bejuttatni.A kalcium- és foszfátionok egyidejű csontba juttatásának lehetőségétvizsgáltuk in vitro és in vivo, mivel olyan eljárást igyekeztünk kifejleszteni,amellyel kalcium-hidroxi-apatit kialakítását tehetnénk lehetővé, azaz a bevittanyagok funkcionálisan vennének részt a csont szervetlen szerkezeténekfelépítésében. Módszerünk lényege, a kalcium- és foszfátionok bejuttatásaiontoforetikusan: Az adott testrészre felhelyezett elektródokra általunk előállítottfoszfát anyagrendszert, illetve kalcium-bentonitot kentünk fel. A pakolásokbólspeciális lüktető egyenáram hatására szimultán juttattuk be a komponenseket acélzott helyekre.Kísérleteink során e kezelés csontdenzitásra kifejtett hatását vizsgáltuk(n=50) Sprague-Dawley nőstény patkányokon in vivo. Az állatokat 5 egyenlőegyedszámú csoportra osztottuk. Az 1.csoportba a kontroll állatok tartoztak. A2.-5.csoport egyedeinél bilateralis ovariectomiával indukáltunk osteoporosist. A2.csoportba sorolt patkányok kezelést nem kaptak, a 3.csoport 17-beta-oestradiolmonoterápiában részesült, a 4.csoportba tartozó állatok femurját módszerünkkelkezeltük, az 5.csoport pedig egyidejűleg részesült 17-beta-oestradiol ésiontoforetikus terápiában. A csontsűrűséget DBM-Sonic1200 ultrahangoscsontdenzitométerrel vizsgáltuk.Mind az egészséges, mind az osteoporosisos állatoknál csontdenzitásnövekedést tapasztaltunk közvetlenül az iontoforetikus kezelés után, jelezveezzel a bejuttatás eredményességét. Már egyetlen, 30 perces iontoforézishatására megnőtt a csontsűrűség, s e magasabb érték 3 nap múlva is fennállt.Megvizsgáltuk továbbá, hogy 5 iontoforetikus kezelés önállóan alkalmazva,illetve 17-beta-oestradiol terápia mellett, hogyan változtatja meg a kezelt lábdenzitását.A kapott eredmények alapján megállapíthatjuk, hogy az egyidejű kalciumés foszfát osteoporoticus területre történő bejuttatása módszerünkkelmegvalósítható. A beépülés tartósságának hosszú-távú nyomon követésétjelenleg is folytatjuk.Témavezető: Prof.Dr. Pap Lajos

Gyöngyösi Adrienn , TTK VDE OEC ÁOK Humángenetika IntézetFEHÉRJÉK ADP-RIBOZILÁCIÓJÁNAK VIZSGÁLATA STREPTOMYCESGRISEUS-BAN.Az ADP-riboziláció egy reverzibilis poszttranszlációs fehérje módosítás,ami lehetővé teszi a célfehérjék aktivitásának szabályozását. Fontossága ellenéremég mindig kevés ismeret áll rendelkezésünkre az így szabályozottfolyamatokról. Korábbi eredményeink arra utalnak, hogy a módosítást katalizálóADP-riboziltranszferáz (ADPRTáz) enzim aktivitása és az ADP-riboziláltfehérjék mintázata korrelációt mutat a sejtek differenciálódási folyamatával.Munkánk során az ADP-ribozilált fehérjék azonosításával akarjuk tisztázni ebiokémiai reakció fiziológiai szerepét. Kísérleteinkben kidolgoztunk egy újeljárást ADP-ribozilált fehérjék tisztítására. Az ADPRTáz NAD-ot használszubsztrátként és annak ADP-ribóz részét kapcsolja a célfehérjékhez. Eddigáltalában radioaktív NAD-ot használtak a folyamat vizsgálatára, ez azonbanrendkívül drága, nehézkes és radioaktív hulladékot is termelő eljárás.Kísérleteinkben biotinilált NAD-ot alkalmaztunk a radioaktív termék helyett ésegy kétlépéses, specifikus, affinitás kromatográfiás módszert dolgoztunk ki azADP-ribozilált fehérjék tisztítására. Első lépésben kidolgoztuk az optimálisreakció körülményeket a biotinilált szubsztrát mono-ADP-ribozilációsreakcióban történő felhasználására. A reakció során keletkező biotin-ADP-ribózmódosító csoportot tartalmazó fehérjéket SDS-PAGE eljárással történőelválasztás és elektroblottolás után avidin-peroxidáz konjugátummalazonosítottuk a blotton. A következő lépésben kidolgoztuk a tisztítás lépéseit,először egy – glükozilált fehérjék tisztítására alkalmas – aminofenilboronsavagaróztöltetet használó affinitás kromatográfiás oszlopon tisztítottuk az ADPriboziláltfehérjéket, majd a második, specifikus lépésben egy SoftLink-SoftRelease Avidin Resin kromatográfiás oszlopon tisztítottuk tovább a biotin-ADP-ribóz módosító csoportot tartalmazó fehérjéket. Ez a lépés alkalmas azADP-ribozilált fehérjéknek az egyéb, glükozilált fehérjéktől való elválasztásra.Az így összegyűjtött fehérjéket két dimenziós gélben választottuk szétizoelektromos pont és molekulaméret szerint, majd a fehérjéket a gélből kivágvatripszines emésztésnek vetettük alá ás az így nyert fragmenteket MALDI-TOFanalízissel azonosítottuk. A fehérjék azonosítását azonban nehezíti, hogy a S.griseus genom még nem ismert, ezért a fragmentek aminosav szekvenciájánakmeghatározását is el kell végeznünk a fehérjék felismeréséhez.Témavezető: Dr. Penyige András

Gomez Izabella, ÁOK VI<strong>DE</strong> Szervetlen és Analitikai Kémiai Tanszék Környezetanalitikai CsoportOSTEOPOROSIS KEZELÉSE IONTOFORETIKUS ELJÁRÁSSALOVARIECTOMIZÁLT PATKÁNYOKONA csontritkulás korunk egyik népbetegsége. Az anti-osteoporoticusterápiák elsődleges célja a pathológiás törések kockázatának csökkentése. Azalkalmazott kezelések nem mindig eredményesek, hatásuk lassan alakul ki,valamint a gyógyszerek mellékhatásaival is számolni kell. Munkánk során egyúj kezelési módszert dolgoztunk ki, mellyel a csontritkulásos területre lokálisanlehet a hiányzó komponenseket bejuttatni.A kalcium- és foszfátionok egyidejű csontba juttatásának lehetőségétvizsgáltuk in vitro és in vivo, mivel olyan eljárást igyekeztünk kifejleszteni,amellyel kalcium-hidroxi-apatit kialakítását tehetnénk lehetővé, azaz a bevittanyagok funkcionálisan vennének részt a csont szervetlen szerkezeténekfelépítésében. Módszerünk lényege, a kalcium- és foszfátionok bejuttatásaiontoforetikusan: Az adott testrészre felhelyezett elektródokra általunk előállítottfoszfát anyagrendszert, illetve kalcium-bentonitot kentünk fel. A pakolásokbólspeciális lüktető egyenáram hatására szimultán juttattuk be a komponenseket acélzott helyekre.Kísérleteink során e kezelés csontdenzitásra kifejtett hatását vizsgáltuk(n=50) Sprague-Dawley nőstény patkányokon in vivo. Az állatokat 5 egyenlőegyedszámú csoportra osztottuk. Az 1.csoportba a kontroll állatok tartoztak. A2.-5.csoport egyedeinél bilateralis ovariectomiával indukáltunk osteoporosist. A2.csoportba sorolt patkányok kezelést nem kaptak, a 3.csoport 17-beta-oestradiolmonoterápiában részesült, a 4.csoportba tartozó állatok femurját módszerünkkelkezeltük, az 5.csoport pedig egyidejűleg részesült 17-beta-oestradiol ésiontoforetikus terápiában. A csontsűrűséget DBM-Sonic1200 ultrahangoscsontdenzitométerrel vizsgáltuk.Mind az egészséges, mind az osteoporosisos állatoknál csontdenzitásnövekedést tapasztaltunk közvetlenül az iontoforetikus kezelés után, jelezveezzel a bejuttatás eredményességét. Már egyetlen, 30 perces iontoforézishatására megnőtt a csontsűrűség, s e magasabb érték 3 nap múlva is fennállt.Megvizsgáltuk továbbá, hogy 5 iontoforetikus kezelés önállóan alkalmazva,illetve 17-beta-oestradiol terápia mellett, hogyan változtatja meg a kezelt lábdenzitását.A kapott eredmények alapján megállapíthatjuk, hogy az egyidejű kalciumés foszfát osteoporoticus területre történő bejuttatása módszerünkkelmegvalósítható. A beépülés tartósságának hosszú-távú nyomon követésétjelenleg is folytatjuk.Témavezető: Prof.Dr. Pap Lajos

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!