Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Fábián Ákos, ÁOK VDEOEC, Biofizikai és Sejtbiológiai IntézetEGYENLET-ILLESZTÉSSEL KIEGÉSZÍTETT ENERGIA TRANSZFERMÉRÉS: FEHÉRJE INTERAKCIÓK JELLEMZÉSÉNEK ÚJ LEHETŐSÉGEIA fluoreszcencia rezonancia energia transzfer (FRET) egy olyan folyamat,amelyben egy gerjesztett donor molekula sugárzás nélkül átadja gerjesztettállapotát egy megfelelő orientációjú akceptor molekulának. Az energia transzferjellemzésére szolgál a transzfer hatékonyság (E), amely megadja, hogy azenergia transzfer sebességi állandója (kt) hogyan aránylik az összeslegerjesztődési útvonal sebességi állandóinak összegéhez. Mivel kt függ adonor-akceptor távolságtól, így a transzfer hatékonyságot hagyományosan azintermolekuláris távolság jellemzésére használják.A sebességi állandó azonban nemcsak a távolság függvénye, hanem azegy donorral kölcsönhatásba lépő akceptorok számától (n) is függ. Így az egydonor - egy akceptor interakciót jellemző, abszolút távolság tartammal bírótranszfer hatékonyság helyett többnyire csak egy hozzávetőleges hatékonyságotlehet meghatározni, amely azonban a kölcsönhatásba lépő molekulák számávalváltozik. Ezen hatás kiküszöbölése érdekében célunk volt egy olyan korrekciósegyenlet levezetése, amellyel n ismeretében meghatározható az egy donor – egyakceptor kölcsönhatást jellemző transzfer hatékonyság.Ehhez a már bevált intenzitás és akceptor kioltás alapú FRETmeghatározási technikákat kombináltuk. Kísérleteink során donornak afotostabil Alexa-546 festéket, míg akceptornak a fotolabilis Cy5 festékethasználtuk. Az akceptor lézerfény segítségével való kiégetése során n értékétfolyamatosan csökkentettük és közben az intenzitás alapú transzfermeghatározásnál használt felvételek segítségével nyomon követtük a transzferhatékonyság lecsengését, illetve a donor intenzitás „felcsengését”. A mértadatokra megillesztettük a lecsengési egyenleteket és az egyenletekparamétereiből meghatároztuk az egy donor – egy akceptor kölcsönhatásrajellemző transzfer hatékonyságot valamint a transzferben résztvevő donorhányadot (ez utóbbi n pontos ismerete nélkül is meghatározható).A képletek helyességét a jó illeszthetőségen kívül sikerült igazolni azErbB2 receptor 4D5 és 2C4 epitópjaihoz kötődő antitestek kötődési arányánakmeghatározásával, amely jól egyezett a korábban a jelölt antitestekintenzitásainak arányaiból számolt ~ 0,7 értékkel.Témavezető: Prof. Szöllősi János