Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Dobrosi Nóra, Mol.Biol. V, Nagy Georgina, Mol.Biol. VÉlettani IntézetAZ ÉLELMISZER- ÉS GYÓGYSZERIPARBAN ALKALMAZOTTFENOLSZÁRMAZÉKOK HATÁSA AZ INTRACELLULÁRIS KALCIUMTRANSZPORTRAMunkám célja az SR kalcium-csatorna működésének, a kalciumfelszabadulásának vizsgálata. Méréseimhez sertés vázizomból izolált nehéz SR(HSR) vezikulákat használtam, mely tartalmazza mind a kalcium csatornát,mind a kalcium pumpát (Ca2+ATPázt). A HSR vezikulákat a kísérletekkezdetekor aktívan töltöttem fel kalciummal, magnézium és ATP jelenlétében.Ezt követően mértem az egyes növényi alkaloidok által kiváltott kalciumfelszabadulást,fotometriás módszerrel kalcium-kötő metallokróm festék(Antipirilazo III) segítségével. A fényintenzitás változását 710 nm-eshullámhosszon követtem nyomon SPEX Fluoromax spektrofotométerrel.A kísérletek során a hatóanyagokat 500 microM-os koncentrációbanalkalmaztam. A vizsgált illóolajok közül a para- és a meta- ánizsaldehid, atransz-anetol, illetve a cineol esetében nem tapasztaltam kalcium felszabadulást,míg a timol és a karvakrol hatására jelentős mennyiségű kalcium szabadult fel aHSR vezikulákból. A timol hatására mintegy 136 microM, míg a karvakrolesetében 224 microM kalcium szabadult fel. A két hatásos anyag dózishatásgörbéjétmeghatározva kapott eredmények timol esetén kd=211±55 microM,nHill =1,5 ±0,38, karvakrolnál kd=158,8±16 microM, nHill =2,1 ±0,4; tehát akarvakrol hatásosabb.Tríciummal jelzett rianodin segítségével megvizsgáltam, hogy a hatásosszerek hogyan befolyásolják a HSR vezikulák rianodin kötését. A maximáliskötőhelyek száma kontroll körülmények között: Bmax = 4,02 ± 0,38 pmol/mgprotein; a disszociációs konstans: Kd=14,60 ± 2,22 nM; nHill= 1,62 ± 0,2. Amaximálisan megkötött tríciált rianodin mennyisége 300 microM timoljelenlétében nőtt, Bmax=7,37 ± 0,49 pmol/mg protein, valamint nőtt a csatornarianodin affinitása is: Kd=11,55 ±1,40 nM. Ezt követően meghatároztam a timoldózis-hatás görbéjét 6 nM rianodin jelenlétében. Az adatok Hill - analízisselkapott eredményei: Kd = 81,33 ± 32 microM ; nHill =1,12 ±0,95. Timoljelenlétében tehát mind a maximálisan kötött rianodin mennyisége, mind acsatorna rianodin affinitása a nőtt, azaz a timol aktiválja a csatornát.Témavezető: Dr. Szegedi Csaba