Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Dajnoki Angéla, Mol.Biol. V, Nyeste Katalin, ÁOK IVDE OEC Élettani IntézetA CANNABINOID RECEPTOR-1 (CB1) ÉS VANILLOID RECEPTOR-1(TRPV1) SZEREPE AZ ANANDAMID CELLULÁRIS HATÁSAINAKKIFEJLŐDÉSÉBEN HUMÁN EPIDERMÁLIS KERATINOCYTÁKONMunkacsoportunk korábbi kísérletei során kiderült, hogy a cannabinoidreceptor-1 (CB1), melyet eredetileg kizárólag a központi idegrendszerneuronjain írtak le, kifejeződik humán bőr meghatározottsejtkompartmentjeiben, így az epidermális keratinocytákon, valamint aszőrtüsző gyökérhüvely és mátrix keratinocytáiban is. Jelen kísérleteinkbentenyésztett humán epidermális keratinocytákban (immortalizált HaCaT sejtek)elemeztük a CB1 expresszióját, valamint szerepét a különféle sejtfolyamatokszabályozásában.Western blot, immuncitokémia, valamint RT-PCR technikákalkalmazásával kimutattuk, hogy a CB1 tenyésztett humán epidermális HaCaTkeratinocytákban is expresszálódik. MTT proliferációs assay segítségévelbebizonyosodott az is, hogy a CB1 aktiválása az endogén cannabinoidanandamiddal (ANA) dózis-függően (0,1-30 microM) lecsökkentette a HaCaTkeratinocyták proliferációját, mely jelenség kivédhető volt a specifikus CB1-antagonista AM-251 (1 microM) alkalmazásával. Kimutattuk azt is, hogy aproliferáció gátlásával párhuzamosan az ANA jelentős, dózis-függő apoptózistindukált a sejtekben.Az ANA-ról korábban bebizonyosodott, hogy bizonyos körülményekközött képes a vanilloid receptor-1 (TRPV1) aktiválására is. Ezen receptorcsatornáróla múlt évi TDK Konferencián bemutattuk, hogy specifikusaktiválása kapszaicinnel – az ANA hatásával teljes mértékben megegyezően –gátolta a HaCaT sejtek proliferációját és apoptózist váltott ki. Felmerült tehát akérdés, hogy résztvesz-e a TRPV1 útvonal az ANA fenti hatásánakkifejlődésében? Ezt vizsgálva megállapítottuk, hogy az ANA proliferációtcsökkentő hatása ugyancsak kivédhető volt TRPV1 antagonisták (50 nM iodoresiniferatoxin,1 microM kapszazepin) alkalmazásával. Érdekes (és jelenadataink birtokában egyelőre nem magyarázható) megfigyelésünk voltugyanakkor az, hogy a TRPV1 antagonisták csak alacsony (0,4 mM)extracelluláris kalciumkoncentráció mellett fejtették ki gátló hatásukat, mígmagas (1-2 mM) kalciumtartalmú tenyésztő oldatban nem.Mindezen adataink arra utalnak, hogy humán keratinocytákon azendocannabinoid ANA celluláris hatásainak kifejlődésében mind a CB1, mind aTRPV1 útvonal szerepet játszhat. Eredményeink emellett rámutatnak a nonneuronálissejteken kifejeződő CB1 funkcionális jelentőségére is.Témavezető: Dr. Bíró Tamás