Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Cseh Éva, ÁOK IIDE OEC Orvosi Vegytani IntézetARABIDOPSIS THALIANA FOSZFOPROTEIN FOSZFATÁZ T-DNSINSZERCIÓS MUTÁNSOK AZONOSÍTÁSA ÉS JELLEMZÉSEA fehérjék foszforilált szerin- és treonin-oldalláncát defoszforilálófoszfoprotein foszfatáz (PPP) enzimek számos sejtfolyamat szabályozásábanvesznek részt. Mivel a növényekben levő foszfoprotein foszfatázok szerepekevéssé ismert, célkitűzésünk a növényi PPP enzimek, mindenekelőtt azújtípusú foszfatázok funkciójának vizsgálata. Modellnövényünk anövénygenetikában elterjedten használt Arabidopsis thaliana (lúdfű).Rendelkezésünkre állt a lúdfű genomjának jelentős részét lefedő T-DNSinszerciós mutánsgyűjtemény (Koncz Csaba, Max-Planck Institut fürZüchtungsforschung, Köln), így lehetővé vált számunkra, hogy a proteinfoszfatázok szerepét a fordított genetika módszereivel tanulmányozzuk.A T-DNS inszerciós mutánsgyűjtemény DNS csoportjait polimerázláncreakció segítségével, a T-DNS határszekvenciáira specifikus ésgénspecifikus primerekkel, két szűrési sorozatban szűrve olyan 100-tagúcsoportokat találtunk, amelyekben a T-DNS beépülése kimutatható egy PP1, egyPP6, egy növényspecifikus foszfatáz génben (egy-egy csoport), valamint a PP7génben (két csoport). A magok 100-as csoportjaiból felnevelt növények DNSénektovábbi PCR-szűrésével azonosítottuk a fenti PPP génekben szekvenálássaligazolható módon T-DNS-t hordozó öt növényt.Kísérleteink további részében a mutációra nézve homozigóta növényeketazonosítottunk PCR reakciók és Southern hibridizáció segítségével. Az újtípusú(PP6, növényspecifikus, PP7) foszfatáz mutánsok fenotípusának megállapításacéljából vizsgáltuk a növények csírázását különféle stresszhatások (növényihormonok, könnyű-és nehézfémsó, cukrok, paraquat) között, és a hipokotilfejlődését kék fénnyel történő megvilágítás hatására. Előzetes eredményeinkszerint a PP6 mutáns a vadtípustól eltérően reagál abszcizinsavas és kadmiumkloridoskezelésre, a növényspecifikus foszfatáz mutánsa abszcizinsavra, a PP7mutáns pedig glükóz- és paraquat kezelésre. Emellett a PP7 mutáns hipokotiljakék fényben fokozottabb megnyúlást mutat. A továbbiakban a hatásokmechanizmusának vizsgálatát tervezzük.Munkánkat az OTKA T038324 sz. pályázata támogatta.Témavezető: Dr. Farkas Ilona