Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Brázda Péter, TTK VDE OEC, Biokémiai- és Molekuláris Biológiai IntézetAZ LG1208 SZINTETIKUS RETINOID-X RECEPTOR LIGANDVIZSGÁLATA EMLŐS-KÉT HIBRID RENDSZERBENA magreceptorok által befolyásolt genetikai folyamatok révén atöbbsejtes szervezet működésének gyakorlatilag minden területére hatássalvannak, beleértve az embriogenezist, a homeosztázis fenntartását, a szaporodást,valamint a sejt növekedését és halálát. A génkifejeződésre gyakorolt intenzívhatásuk és nagyfokú szelektivitásuk hatására rövid idő alatt számos kutatástárgyává váltak. A retinoid-x receptor (RXR) a magreceptorok fehérjecsaládjábatartozik, melyek transzkripciós faktorokként ligandfüggő módon szabályozzákcélgénjeik átírását. Ligand hiányában korepresszor molekula, ligand jelenlétébenkoaktivátor molekula kapcsolódik hozzájuk. Az RXR központi szerepére utal,hogy általános heterodimerizáló partnerként van jelen a sejtben. A retinoidokszéleskörű gyógyászati alkalmazása ellenére teratogén és toxinogén hatásukkövetkeztében szükségessé vált a terápiás szempontból hasonló, de a komolymellékhatásoktól mentes szintetikus ligandok kifejlesztése. Célunk egy új,potenciális RXR-ligand, az LG1208 működésének vizsgálata és molekulárisszintű karakterizálása volt.A jelenséget emlős-kettős rendszerben vizsgáltuk, amely alkalmasfehérje-fehérje kölcsönhatások detektálására. A módszer lényege, hogy CV-1,fibroblaszt típusú sejtekbe kationos liposzómával transzfektáltuk a vizsgálnikívánt fehérjéket kódoló plazmidokat. A transzfekció után 6-8 órával végeztünkligandkezelést, majd 16 óra elteltével a sejteket lizáltuk és a lizátumból B-galaktozidáz-, valamint luciferáz aktivitást mértünk. A módszer felhasználásávaltranszaktivációs-, valamint fehérje-fehérje kölcsönhatás vizsgálatokatvégeztünk. Ezek során egyrészt a ligand hatására megváltozó aktivációsképességet, másrészt az ennek hátterében álló receptor-koregulátor kapcsolatváltozását tanulmányoztuk.Munkánk eredményeként jellemezni tudtuk a ligandot számospermisszív-, illetve nem-permisszív RXR-heterodimer rendszerben. A korábbanelvégzett aktiválási vizsgálatok alapján a tanulmányozott LG1208 molekulakompetitív antagonistaként viselkedik az általunk vizsgált sejtmagreceptorrendszerekben. A kölcsönhatási vizsgálatokkal sikerült feltárnunk a ligandhatásának hátterében álló koregulátorkötési változásokat.Témavezető: Dr. Nagy László, Dr. Benkő Szilvia