Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Ujlaky-Nagy László Dr., Ph.D. IIIBiofizikai És Sejtbiológiai IntézetPDGF RECEPTOROK SEJTFELSZÍNI MINTÁZATÁNAK HATÁSA ARECEPTOR JELÁTVITELÉRE GLIOBLASZTÓMA SEJTEKENA PDGF és receptorai fontos szerepet töltenek be a központi idegrendszerglia eredetű daganatainak növekedésében. Jelátvitelük során glioblasztómasejtekben jellegzetes tirozin foszforilációs és kalcium válaszok alakulnak ki,amelyeket proliferációs és/vagy antiapoptotikus szignálutak aktivációja követ. Alipid raftok glikoszfingolipideket, koleszterint, GPI-kötött fehérjéket, ésjelátvivő molekulákat nagy számban tartalmazó, speciális, detergens rezisztensmembrán mikrodomének. Munkánk során a PDGF receptorok és a lipid raftokmorfológiai és funkcionális összekapcsoltságát vizsgáltuk A172, U251 és T98Gjelű glioblasztóma sejteken.Az alfa és béta típusú PDGF receptorokat indirektimmunfluoreszcenciával jelöltük. A receptorok térbeli elhelyezkedését, és areceptorok, ill. az általuk alkotott klaszterek viszonyát a koleratoxin Balegységgel (CTX-B) dekorált lipid tutajokhoz konfokális mikroszkóppal,digitális képelemző algoritmusok segítségével jellemeztük. A PDGF hatására asejtekben bekövetkező intracelluláris kalciumválaszt videomikroszkópiávalvizsgáltuk. A receptor foszforilációt foszfotirozin ellenes monoklonálisantitesttel demonstráltuk immunfluoreszcenciás és Western blot módszerrel.Kísérleteink szerint a vizsgált glioblasztóma sejteken elsősorban a bétatípusú PDGF-receptorok fejeződnek ki. A receptorok sejtfelszíni sűrűségétjellemző, küszöb intenzitás feletti pixel / összes pixel arány a sejtkultúrakonfluenciájával együtt 0.05-ról 0.30-re nőtt. A receptorok a membránfelszínenfoltos eloszlást mutattak, mely a konfluenciától függően átfedést mutatott aCTX-jelölt lipid tutajokkal. Az átfedés mértékét a keresztkorrelációskoefficienssel jellemeztük; ez ~ 0.3-ról ~ 0.5-re nőtt, ha a sejtkultúra denzitásátegy nagyságrenddel növeltük. A lipidtutajok keresztkötése CTX-szel 37 oC-n aPDGFR klaszterek és a GM1-ben dús raft elemek szétválásához vezetett. Amembrán koleszterintartalmának csökkentése MBCD kezeléssel szinténalkalmas volt a lipid tutajok diszpergálására. A PDGF hatására a konfluenssejtekben létrejövő kalcium tranziens szubkonfluens kultúrákban, egymássalnem érintkező sejtek esetén igen ritkán volt észlelhető, és teljesen eltűnt, ha akonfluens kultúrákban a lipid tutajok szerkezetét megbontottuk.Eredményeink a PDGF receptorok lipid raftbeli konfluencia-függőelhelyezkedésére, és ennek funkcionális jelentőségére utalnak.Témavezető: Dr. Vereb György