Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Széles Lajos, Ph.D. IIDE-OEC, Biokémiai és Molekuláris Biológiai IntézetMAGRECEPTOROK ÁLTAL SZABÁLYOZOTT LIGAND-FÜGGŐTRANSZKRIPCIÓS GÁTLÁS TANULMÁNYOZÁSA MYELOIDSEJTEKBENA magreceptorok ligand-függő transzkripciós faktorok, melyek a ligandbeködése után a gének egy csoportjának expresszióját fokozzák, míg másokétcsökkentik. A génaktiválás az egyes gének, illetve a különböző magreceptorokesetében lényegét tekintve hasonlóan zajlik: a ligandot kötött magreceptor acélgén válaszadó DNS szakaszához kapcsolódik és ko-aktivátor molekulákonkeresztül kifejti hatását. Ezzel szemben a magreceptorok által szabályozottligand-függő transzkripciós gátlás igen változatos, hátterében többfajtamechanizmus áll (többek között: direkt gátlás, más transzkripciós faktorokdimerizációjának, transzlokációjának, DNS-hez való kötődésének blokkolása,ko-aktivátor molekulák elvonása, valamint (ko-)represszorok indukciója).Célkitűzésünk az volt, hogy Affymetrix microarray technikával vizsgáljukmeg három magreceptor (retinoid, D-vitamin és glükokortikoid receptor)dendritikus sejtekre gyakorolt hatását. Ezen magreceptorok ligandjai –irodalmiadatok alapján- gátolják a monocyta eredetű dendritikus sejtek differenciációjátés érését, mely részben citokin, kemokin és sejtfelszíni adhéziós molekulákleregulásában nyilvánul meg. A ligandok hatását korai (6-12h) és késői (5 nap)időpontban vizsgáljuk. A következő kérdésekre keresünk választ: (1) későiidőpontban mely gének regulálódnak le és ezek mennyire fednek át az egyesmagreceptorok esetében, (2) a leregulált gének promoteranalízise alapján agének mekkora hányadánál található AP-1 és NFKB válaszadó elem, végül (3)korai időpontban indukálódnak-e (ko-)represszor molekulák.A kísélethez human CD14+ monocytákat szeparálunk, melyeketcitokinek (IL4 és GM-CSF) hozzáadásával differenciáltatunk éretlen dendritikussejtekké. A sejteket szeparálás után 14h-val kezeljük ligandokkal (retinsavreceptor: AM 580, D-vitamin receptor: 1,25(OH2)D3 és glükokortikoidreceptor: dexamethasone). A munka jelenlegi fázisában a különböző időpontbangyűjtött mintákban a kezelés hatékonyságát differenciálódási markerek és ismertcélgének szintjének mérésével ellenőrizzük (ármalási citométer és RT-QPCRtechnikák).Témavezető: Dr. Nagy László