Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Szántó Tímea Dr., Ph.D. III, Tóth Judit Dr., Ph.D. IIIDE OEC Klinikai Kutató KözpontAZ IMMOBILIZÁLT VON WILLEBRAND FAKTOR LIGAND PEPTIDJEA von Willebrand faktor (VWF) egy nagy molekulatömegű, multimerszerkezetű adhéziós fehérje, amely azáltal vesz részt a thrombocyta funkcióban,hogy a thrombocytáknak az érfalhoz és egymáshoz való kapcsolódását közvetítimagas áramlási sebességű helyeken és alapvető fontosságú a thrombusképződésfolyamatában. Feltételezik, hogy ezen funkciójához vagy maga azimmobilizáció, vagy az áramlás, vagy mindkettő hatására létrejövő konformációváltozás szükséges. Az elmúlt néhány évben különösen nagy figyelem irányultazokra a VWF doménekre, amelyek elősegítik a thrombocytáknak azextracelluláris mátrix komponenseihez való adhézióját, nevezetesen az ismert3D szerkezetű A1, illetve A3 doménekre. Az Ib-alfa glikoprotein az Ib-IX-Vthrombocyta membránreceptor komplex része, amellyel a thrombocyták azimmobilizált VWF-hoz kötődnek az endothelsérülés helyein.Jelen munkánk célja az immobilizáció hatására esetlegesen megváltozottkonformációjú VWF-hoz kötődő molekulaszerkezetek megismerése fágtechnológia alkalmazásával. Kísérleteink során lineáris hetes fehérje könyvtárathasználtunk, amely olyan M13 bakteriofágokat tartalmaz, amelynek egy kisköpenyfehérjéjébe (pIII) 7 aminosavból álló peptidet építettek be. A fágokbanezek az aminosavak random kombinációban vannak. Eredményeink aztmutatják, hogy a szelektált fágok nagymértékben és koncentrációfüggőenkötődtek az immobilizált VWF-hoz és ezen fágok mindegyike azonos peptidszekvenciát mutatott. A fágok, illetve a szintetizált inzert peptid nembefolyásolták a thrombocyta adhéziót a VWF-hoz, amelyet sztatikus, illetvedinamikus körülmények között immobilizáltunk, ami arra utal, hogy ez a peptidszekvencia nem verseng a thrombocyták Ib-alfa receptorának VWFkötőhelyével. A fágok, illetve a szintetizált peptid azonban jelentősencsökkentették a thrombocyták adhézióját mind a humán I., mind a humán III.típusú kollagén felszínen, tehát gátolták a VWF-humán I., és a VWF-humán III.típusú kollagén interakciót. A továbbiakban sztatikus körülmények között(ELISA módszerrel) is sikerült kimutatni a fágok VWF és a két kollagén típusinterakcióját gátló hatását. A vizsgált peptid szekvencia nagyfokú hasonlóságotmutatott az Ib-alfa glikoprotein, illetve a humán I. és humán III. típusú kollagénbizonyos szekvenciáival. További kísérleteink arra irányulnak, hogy lokalizáljukezen peptid VWF-on belüli kötőhelyét.Témavezető: Dr. Hársfalvi Jolán