Programfüzet (PDF) - DE OEC Tudományos Diákköri Tanács

Orosz Ágnes Dr., Ph.D. IIDE OEC BIOFIZIKA ÉS SEJTBIOLÓGIA INTÉZETNORMÁL ÉS DISZTRÓFIÁS HUMÁN CORNEÁKBÓL SZÁRMAZÓPRIMER SEJTKULTÚRÁK JELLEMZÉSEAz 5q31-hez kapcsolt szaruhártya disztrófiákban a TGFBI gén mutációimiatt a BIGH3 fehérje különböző hosszúságú köztitermékei lerakódnak acorneában, melynek átlátszósága elvész. Még nem ismert, hogy a mutációkhogyan okoznak fehérjelerakódást, illetve a BIGH3 fiziológiás szerepe semtisztázott. A betegek véréből DNS szekvenálással a hazai mutációs skálafelderíthető. Vizsgálataink szerint a leggyakoribb mutáció az R124C.Célunk primer cornealis sejtkultúrák létrehozása, azok tenyészthetőségiés adhéziós tulajdonságainak vizsgálata, melyek modellrendszerkéntszolgálhatnak a BIGH3 lebontási folyamatainak, illetve a a fehérje corneábanbetöltött szerepének megismeréséhez.Munkánk során az egészséges és disztrófiás corneákból származó primersejtkultúrák összehasonlításához a cornea centrális, 7-8 mm átmérőjű részéthasználtuk, amely tranziensen amplifikálódó sejteket tartalmaz, de epiteliálisőssejteket nem. Emellett egészséges donorok perifériás corneoscleralis gyűrűjétis vizsgáltuk. A primer kultúrák létrehozásához SHEM illetve KGM médiumotés sejtosztódást fokozó adalékokat használtunk. A sejtek letapadásátszövettenyésztő edényekben, ezek I-es és IV-es kollagénnel bevont változatain,valamint perforált szubsztrátumon fibroblaszt kokultúrában vizsgáltuk.A normál corneoscleralis gyűrűkből mind fibroblaszt, mind epithelialisprimer sejtkultúrák létrehozása sikerült. Mindkét médium alkalmas volt atenyésztésükre. Az epithelsejtek kitapadása kezeletlen edényekben gyenge, I-eskollagénen közepes, míg IV-esen megfelelő; legjobban fibroblaszt kokultúrábannövekednek. Passzálásra a diszpáz volt a legmegfelelőbb, tripszin-EDTAkezeléskor a letapadási képesség elveszett, a sejtek elpusztultak. A disztrófiás ésegészséges corneák centruma jelentősen különbözött: az előbbiből szabályos,kockakő alakú; míg az utóbbiból kisebb, szabálytalan alakú, nehezen letapadó,rendkívül lassan növekedő epithel sejtek tenyészthetők. A letapadási ésproliferációs készség a disztrófiás corneákból származó fibroblasztok esetében isgyengébb volt.A különbségek egyik oka vélhetőleg a mutáns BIGH3 funkciójánakkárosodása, ill. megváltozása. Ismert a BIGH3 szerepe a sejtadhézióban, amutáns BIGH3 pedig keratocitákba transzfektálva apoptosist indukál. Ezzelösszhangban kísérleteinkben a mutáció jelentősen befolyásolta a sejtekkitapadási és növekedési tulajdonságait.Témavezető: Dr. Vereb György